蜂膠技術(shù)要求編制說明

1、一、起草背景和研究經(jīng)過蜂膠是蜜蜂從植物新生枝腋芽處、花蕾處、創(chuàng)傷處采集的樹脂類物質(zhì)，再注入其腺體分泌物，經(jīng)加工轉(zhuǎn)化而成的膠狀物質(zhì)。是蜜蜂用來抵御蜂巢外部病蟲害、病原性微生物入侵以及保持巢內(nèi)環(huán)境干凈清潔的物質(zhì)。是常用的保健食品原料。也收載于中國(guó)藥典2010年版，適應(yīng)癥為抗菌消炎、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、加速組織愈合。用于高脂血癥和糖尿病的輔助治療。蜂膠主要由樹脂類、芳香油、蜂蠟、花粉等組成。蜂膠來源因地域廣泛性和植被多樣性，造成了成分的復(fù)雜性。上世紀(jì)初Küstenmacher1從蜂膠中鑒定出肉桂醇與肉桂酸。至50年代后期國(guó)內(nèi)外己從蜂膠中分離鑒定出化學(xué)成分有黃酮類、萜烯類、醌類、酯類、醇類、醛

2、類、酚類、有機(jī)酸類，酶類、維生素類、多糖及多種微量元素等。中國(guó)蜂膠化學(xué)成分研究始于80年代初期，尚天民等2從北京蜂膠中分離出白楊素，3 ,4-二甲氧基肉桂酸、異阿魏酸和廿六烷酸、5,7-二羥基黃酮、3,5,7-三羥基黃酮、5,7-二羥基,2-甲氧基黃酮、二十三(烷)酸甲酯、鄰苯二甲酸雙(2-乙基己基)酯、鄰苯二甲酸雙異丁酯和葵二酸雙(2-乙基己基)酯3，球橙素、喬橙素、柚木楊素、白楊素、良姜素和高良姜4。遲家平等57從遼西蜂膠中分離出白楊素、良姜素、刺槐素、洋芹素、山奈素、鼠李素、柚木楊素、咖啡酸芐酯、芫花素、硫的多倍體S8, 3，4-二甲氧基桂皮酸、異阿魏酸、咖啡酸、苯甲酸。曾唏8從貴陽蜂膠

3、中分離得到刺魄素。從貴陽蜂膠中分離得到5-苯基-2,5-戊二烯酸，3,4-二甲氧基肉桂酸，3羥基-4-甲氧基肉桂酸9。蜂膠含揮發(fā)油，鑒定出甲酸乙酷、乙酸乙醋、-按葉油醇、愈創(chuàng)烯醇等化合物10。用CG-MS在泰山蜂膠中分析鑒定出多種成分，主要為苯甲醇、苯甲酸、苯乙醇11，河南蜂膠中檢出了苯乙醇、3-苯基-2-丙酸、1-（1, 5-二甲基-4-乙烯基）-4-甲基苯、苯并蒽酮12，宜昌蜂膠中檢出肉桂酸、a-桉葉醇、10-表- C5 -桉葉醇等成分13。內(nèi)蒙古蜂膠中檢測(cè)出了多種化合物,主要是-2沒藥醇、2-甲基-3-丁烯-2-醇、3-甲基-2-丁烯-1-醇14，北京蜂膠中分離得到愈創(chuàng)木醇、愈創(chuàng)木醇、-

4、桉葉油醇、異愈創(chuàng)木醇15；甘肅蜂膠中檢測(cè)到的主要成分是大黃酚16。我國(guó)蜂膠原料產(chǎn)量有限，經(jīng)有關(guān)方面統(tǒng)計(jì)：每年蜂膠原料產(chǎn)量?jī)H為350噸左右，年產(chǎn)值約7000萬元；提純蜂膠產(chǎn)量不足200噸，產(chǎn)值近億元；正常情況下，年產(chǎn)銷各種蜂膠制品約為600噸，銷售總額應(yīng)在18億元左右，而實(shí)際上，各種蜂膠制品年銷售額達(dá)30億元以上。2007年，統(tǒng)計(jì)21家蜂膠企業(yè)生產(chǎn)用蜂膠原料消耗量，大大地超過了全國(guó)蜂膠原料的實(shí)際產(chǎn)量。保守估計(jì)，目前市場(chǎng)上未經(jīng)批準(zhǔn)的、存在各種問題的蜂膠產(chǎn)品約占蜂膠產(chǎn)品總量的半數(shù)以上，問題十分嚴(yán)重，而且愈演愈烈。更有甚者，有的蜂膠產(chǎn)品生產(chǎn)用原料摻假使雜，以油脂類物質(zhì)冒充蜂膠，產(chǎn)品安全隱患極大。目前，

5、尚無保健食品原料蜂膠技術(shù)要求，項(xiàng)目組收集到有關(guān)部門頒布的9個(gè)蜂膠標(biāo)準(zhǔn)： 1、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局頒布的“中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 19330-2008蜂膠標(biāo)準(zhǔn)”；2、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局頒布的“中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T24283-2009蜂膠標(biāo)準(zhǔn)”；3、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局頒布的“中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 20574-2006蜂膠中總黃酮的測(cè)定方法”； 4、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局頒布的“中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23870-2009蜂膠中鉛的測(cè)定方法”；5、國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局頒布的“中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 19427-2002蜂膠中蘆丁、楊梅

6、酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因、高良姜素含量的測(cè)定方法”；6、中國(guó)藥典2010年版蜂膠標(biāo)準(zhǔn)； 7、國(guó)內(nèi)貿(mào)易部頒布的“中華人民共和國(guó)蜂膠行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10096-92”；8、國(guó)家農(nóng)業(yè)部頒布的“中華人民共和國(guó)蜂膠農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY 5136-2002；9、國(guó)家農(nóng)業(yè)部頒布的“中華人民共和國(guó)蜂膠農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)無公害食品蜂膠NY 629-2002”；不同標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)氣味色澤滋味GBT 19330-2008 地理標(biāo)志產(chǎn)品 東北黑蜂蜂膠不透明團(tuán)塊或碎片，在35以上逐漸變軟，有粘性和可塑性，明顯的芳香味褐色、灰褐、暗綠、灰黑色等，有光澤有明顯的辛辣味GBT 24283-2009 蜂膠蜂膠團(tuán)塊或碎片狀，不

7、透明，約30以上隨溫度升高逐漸變軟，且有粘性，有蜂膠所有的芳香氣味，燃燒時(shí)有樹脂乳香氣，無異味。棕黃色、棕紅色、褐色、黃褐色、灰褐色、青綠色、灰黑色等，有光澤微苦，略澀，有微麻感和辛辣感。蜂膠提取物斷面結(jié)構(gòu)緊密，固體狀，約30以上隨溫度升高逐漸變軟，且有粘性，有蜂膠所有的芳香氣味，燃燒時(shí)有樹脂乳香氣，無異味。棕色、褐色、黑褐色，有光澤微苦，略澀，有微麻感和辛辣感。B/T 10096-1992 內(nèi)易部蜂膠呈不透明固體團(tuán)塊狀或碎渣狀，20-40時(shí)，膠塊變軟，有粘性，20'C以下膠塊變硬、脆。有芳香氣味，然燒時(shí)有樹脂乳香氣，棕黃、綜紅，有光澤一級(jí)棕褐帶青綠色，光澤較差二級(jí)灰褐色，無光澤三級(jí)口

8、嘗味苦、略帶辛辣味斷面結(jié)構(gòu)緊密，呈黑大理石花紋狀斷面結(jié)構(gòu)密實(shí)不一，呈砂粒狀斷面結(jié)構(gòu)粗糙，有明顯的雜質(zhì)NY5136-2002農(nóng)業(yè)部無公害蜂膠不透明團(tuán)塊或碎片，在35以上逐漸變軟，有粘性和可塑性有明顯的芳香味褐色、灰褐、暗綠、灰黑色等，有光澤有明顯的辛辣味NY/T 629-2002農(nóng)業(yè)部蜂膠不透明的非晶狀團(tuán)塊或碎片，10以下為固體，20'C-40逐漸變軟，有粘性和可塑性，60以上逐漸熔化為粘稠性流體有濃烈的芳香味，味強(qiáng)弱為分優(yōu)、一、二及等外品暗綠、灰褐、灰黑或褐色等，分有較亮麗的光澤、有亮麗的光澤、有光澤、色澤灰暗用口嘗辛辣感極強(qiáng)、較強(qiáng)、有辛辣感、辛辣感較淡中國(guó)藥典2010年版為團(tuán)塊狀或不

9、規(guī)則碎塊，20以下性脆，30以上逐漸變軟，發(fā)黏性。氣芳香多數(shù)呈棕黃色、棕褐色或灰褐色，具光澤。味苦，有辛辣感。表2 蜂膠不同標(biāo)準(zhǔn)理化指標(biāo)比較表總黃酮含量氧化時(shí)間/s乙醇浸出物含量蜂蠟和75%乙醇不溶物含量碘值%酚類化合物含量%薄層鑒別或含量測(cè)定GBT 19330-2008 地理標(biāo)志產(chǎn)品 東北黑蜂蜂膠8%2255（75%乙醇）45GBT 24283-2009 蜂膠蜂膠815224060蜂膠提取物17202295B/T 10096-1992 內(nèi)易部蜂膠定性反應(yīng)227555552535452512NY5136-2002農(nóng)業(yè)部無公害蜂膠8%2255（75%乙醇）45NY/T 629-2002農(nóng)業(yè)部蜂膠

10、15% 、10-15、10-5、55、5-10、10-22、2270、55-70、40-45、40（75%乙醇）30、30-45、45-60、60中國(guó)藥典2010年版2250白楊素、高良姜素TLC、HPLC測(cè)定現(xiàn)有的蜂膠相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)主要從蜂膠形態(tài)、色澤、氣味、滋味、總黃酮含量、氧化時(shí)間、乙醇浸出物、白楊素、高良姜素含量等指標(biāo)控制蜂膠質(zhì)量，對(duì)蜂膠質(zhì)量控制起到了一定作用。但缺少特征鑒別和特征成分的含量檢測(cè)指標(biāo)等項(xiàng)目，可控性差，無法檢測(cè)其真假優(yōu)劣，嚴(yán)重影響了產(chǎn)品的質(zhì)量控制和監(jiān)管的有效實(shí)施。二、蜂膠技術(shù)要求研究情況1. 儀器與試藥 HP-1100高效液相色譜儀（美國(guó)：包括1322A在線脫氣機(jī)、G1311A

11、四元梯度泵、G1315A二極管陣列檢測(cè)器、HP化學(xué)工作站），PBQ-薄層自動(dòng)鋪板器（重慶南岸實(shí)驗(yàn)電器廠）；SPU-自動(dòng)噴霧顯色儀（日本島津）；CQ-250超聲波清洗器（上海船舶電子設(shè)備研究所），定量毛細(xì)管（美國(guó)Drummond公司），SimplicityTM型超純水系統(tǒng)（Millipore公司），硅膠G預(yù)制板、硅膠G高效薄層板（青島海洋化工有限公司）。 白楊素對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào):111701-200501，中國(guó)藥品生物制品檢定所），高良姜素對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào):111699-200501，中國(guó)藥品生物制品檢定所），蘆丁對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào):100080-200707，中國(guó)藥品生物

12、制品檢定所），槲皮素對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào):100081-200907，中國(guó)藥品生物制品檢定所），木犀草素對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào):111520-200504，中國(guó)藥品生物制品檢定所），山奈素對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào): 110861-200606，中國(guó)藥品生物制品檢定所），蜂膠對(duì)照品（自制），甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。 疑似摻假蜂膠原料：編號(hào)7、13、24；摻假蜂膠提取物：編號(hào)18、19、58、59、62、63、64、65、66；疑似假蜂膠：編號(hào)7、24、25；蘆丁粉：編號(hào)60；楊樹芽：編號(hào)61、92、93、94；楊樹葉：編號(hào)67、69、71、73、75、77、81、83、85；

13、楊樹枝：編號(hào)68、70、72、74、76、78、82、84；楊樹皮：編號(hào)80；巴西蜂膠原料：編號(hào)91；其他編號(hào)為蜂膠原料。狀態(tài)：經(jīng)江西汪氏蜂蜜園有限公司多年來收樣觀察和采購經(jīng)驗(yàn)以及本課題組對(duì)60多批次樣品的觀察，多數(shù)蜂膠為團(tuán)塊狀或不規(guī)則碎塊，10以下性脆，1030脆性不強(qiáng)，30以上逐漸變軟，因此，狀態(tài)定為：為團(tuán)塊狀或不規(guī)則碎塊，10以下性脆，30以上逐漸變軟。色澤：經(jīng)觀察60多批次樣品，多數(shù)蜂膠多數(shù)呈棕黃色、棕褐色或灰褐色，具光澤，與中國(guó)藥典2010年版蜂膠描述一致。氣味：經(jīng)嗅聞60多批次樣品，蜂膠具芳香氣味，正品蜂膠氣味芳香，而摻假蜂膠氣無芳香味或有異味，因此，結(jié)合GBT 24283-200

14、9 蜂膠標(biāo)準(zhǔn)，氣味定為：氣芳香，無異味。滋味：中國(guó)藥典規(guī)定：味苦，有辛辣感。經(jīng)品嘗40多批次樣品，參照GBT 24283-2009 蜂膠標(biāo)準(zhǔn)，滋味定義為：味微苦，略澀，有辛辣感和微麻感。蜂膠薄層色譜鑒別方法1：是為真?zhèn)舞b別而研究的薄層色譜鑒別方法。蜂膠主要成分有：球橙素、喬橙素、柚木楊素、白楊素、高良姜素、刺槐素、洋芹素、山奈素、鼠李素、柚木楊素、咖啡酸芐酯、芫花素，采用單一成分對(duì)照難以杜絕偽劣、造假現(xiàn)象，有人將楊樹葉、芽等粉末或者楊樹分泌物攙入蜂膠中，或者直接用楊樹芽提取物來假冒蜂膠提取物，所得到的劣質(zhì)蜂膠在顏色、氣味、形狀上都與真蜂膠十分相似，給蜂膠的鑒別帶來了困難17。曹煒等18采用高效

15、液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-多極質(zhì)譜聯(lián)用法分析了不同產(chǎn)地的30個(gè)蜂膠樣品以及2個(gè)楊樹芽乙醇提取物的化學(xué)成分，結(jié)果30個(gè)蜂膠樣品與楊樹芽乙醇提取物的成分十分相似，因此，建立蜂膠專屬性強(qiáng)的鑒別方法尤其重要，我們采用蜂膠對(duì)照品作為對(duì)照，對(duì)其進(jìn)行了薄層鑒別研究。通過綜合考察，確定薄層色譜條件為，采用預(yù)制硅膠板，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（1030.5）為展開劑，噴以1%三氯化鋁乙醇試液，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，特征斑點(diǎn)Rf值適中，結(jié)果見圖1。圖1. 蜂膠TLC圖1、12、13、20、29、31、36、37、46、47、53

16、為蜂膠樣品48（蜂膠對(duì)照品），18、58為假蜂膠提取物，7、24、61（楊樹芽）。蜂膠薄層色譜鑒別方法2：是為本次提高技術(shù)要求而研究的薄層色譜鑒別方法。取鑒別1項(xiàng)下的供試品溶液和對(duì)照品溶液各0.5ml，分別加入0.25% 5-二甲氨基萘磺酰氯丙酮溶液0.5ml，用三乙胺調(diào)pH至9-9.5，放置2-3小時(shí)，分別作為供試品溶液和對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版附錄 B）試驗(yàn)，吸取上述二種溶液各2l，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯冰醋酸（91）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光（365 nm）燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。圖2. 蜂膠TL

17、C圖43、44、45、46、47、49、50、51、52、53、54、55、56、57為蜂膠樣品，48（蜂膠對(duì)照品），58、59為假膠，60為蘆丁，61楊樹芽。干燥失重：中國(guó)藥典2010年版蜂膠項(xiàng)下規(guī)定干燥失重不得過2%，經(jīng)測(cè)定，蜂膠水分在不同季節(jié)波動(dòng)較大一般在1.2至4.5之間，結(jié)果見表5，因此，規(guī)定干燥失重不得過4.0%?？偦曳?、酸不溶性灰分：按中國(guó)藥典2010年版蜂膠項(xiàng)下的方法測(cè)定，總灰分在1.0%4.5%之間，酸不溶性灰分在0.2%4.0%之間，因此，規(guī)定總灰分不得過8.0%，酸不溶性灰分不得過6.0%表5 不同批次蜂膠有關(guān)理化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果4.082.12蜂膠樣品463.661.25蜂

18、膠樣品503.781.41蜂膠樣品514.171.29蜂膠樣品524.082.06蜂膠樣品533.671.88蜂膠樣品544.351.16蜂膠樣品553.461.99蜂膠樣品563.282.21蜂膠樣品57氧化時(shí)間：按中國(guó)藥典2010年版蜂膠項(xiàng)下的方法測(cè)定，氧化時(shí)間均在22秒之內(nèi)，結(jié)果見表6，因此規(guī)定氧化時(shí)間不得過22秒。乙醇浸出物含量：中國(guó)藥典2010年版蜂膠項(xiàng)下規(guī)定醇浸出物含量為50%，經(jīng)江西汪氏蜂蜜園有限公司近幾年大生產(chǎn)提取數(shù)據(jù)和本課題組浸出物測(cè)定數(shù)據(jù)表明，蜂膠醇浸出物含量均在35%52%之間，結(jié)果見表6，因此，規(guī)定醇浸出物含量大于或等于38.0%。表6 不同批次蜂膠醇浸出物、氧化時(shí)間測(cè)

19、定結(jié)果19蜂膠樣品46標(biāo)志性成分（白楊素、高良姜素）TLC：按中國(guó)藥典一部2010年版蜂膠藥材項(xiàng)下的鑒別方法，采用白楊素、高良姜素對(duì)照品作對(duì)照，對(duì)蜂膠進(jìn)行薄層色譜鑒別有一定意義，因此，本技術(shù)要求采用該鑒別方法。標(biāo)志性成分（白楊素、高良姜素）含量：按中國(guó)藥典2010年版蜂膠項(xiàng)下含量測(cè)定方法，測(cè)得各批次含量白楊素在1.63.8%之間，高良姜素在0.853.42%之間，結(jié)果見表8，因此，規(guī)定白楊素含量不得少于2.0%，高良姜素含量不得少于1.0%。表8 不同批次蜂膠中楊素、高良姜素測(cè)定結(jié)果1.49蜂膠樣品46鉛、砷、汞：分別按GB 5009.12、GB/T 5009.11、GB/T 5009.17規(guī)

20、定的方法測(cè)定，不同批次有毒有害物質(zhì)測(cè)定結(jié)果見表10，結(jié)果顯示，不同批次重金屬鉛含量測(cè)定結(jié)果相差較大，根據(jù)實(shí)測(cè)結(jié)果及日本保健食品原料手冊(cè)中乙醇提取液，粉末制品規(guī)定Pb 20mg/kg的要求，而由于蜂膠并不直接食用而是提取物投料的現(xiàn)狀（原料蜂膠鉛含量高，經(jīng)過提取后，提取物中基本不含鉛），規(guī)定蜂膠鉛含量每公斤少于或等于20 mg，砷含量實(shí)測(cè)值在0.10.7 mg/kg之間，因此，規(guī)定砷含量每公斤少于或等于1.0 mg，汞含量參照無公害蜂膠標(biāo)準(zhǔn)NY5136-2002，規(guī)定蜂膠汞含量每公斤少于或等于0.3 mg。表10 不同批次有毒有害物質(zhì)測(cè)定結(jié)果蜂膠樣品46表11 不同批次有毒有害物質(zhì)測(cè)定結(jié)果蜂膠樣品

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24、蜂膠提取物及蜂膠保健食品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)探討及質(zhì)量安全控制J.蜜蜂雜志，2008，（1）: 10-1418、曹煒，符軍放，索志榮，等. 蜂膠與楊樹芽提取物成分的比較研究J.食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，33（7）: 162-166蜂膠對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)本品為蜜蜂采自植物的枝條、葉芽及愈傷組織等的分泌物與上腭腺、蠟腺等的分泌物所形成的粘性物質(zhì)。【性狀】 為團(tuán)塊狀或不規(guī)則碎塊，10 以下性脆，30 以上逐漸變。多數(shù)呈棕黃色、棕褐色或灰褐色，具光澤。氣芳香，無異味。味微苦，略澀，有辛辣感和微麻感?！捐b別】 1、取蜂膠粉末0.5g，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取白楊素對(duì)照品、高良姜素對(duì)

25、照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版附錄 B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-丁酮（9.40.30.3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。3、取鑒別1項(xiàng)下的供試品溶液0.5ml，加入0.25% 5-二甲氨基萘磺酰氯丙酮溶液0.5ml，用三乙胺調(diào)pH至9 9.5，放置23小時(shí)，作為供試品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版附錄 B）試驗(yàn)，吸取上述溶液2l，點(diǎn)于聚酰胺薄膜上，以甲苯冰醋酸（91）為展開劑，展開，取出