微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)導(dǎo)學(xué)案(含答案)

1、【精品文檔】如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站刪除，僅供學(xué)習(xí)與交流微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)導(dǎo)學(xué)案(含答案).精品文檔.課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)一、培養(yǎng)基1概念：人們按照微生物對(duì)_營養(yǎng)物質(zhì) _的不同需求，配制出的供其_生長繁殖_的營養(yǎng)基質(zhì)。2.種類：按照培養(yǎng)基的物理性質(zhì)劃分 （1）_液體_培養(yǎng)基：配制成的_液體_狀態(tài)的基質(zhì)。 （2）_固體_培養(yǎng)基：在_液體_培養(yǎng)基中加入_凝固劑_，如瓊脂后，配制成的_固體_狀態(tài)的基質(zhì)，是實(shí)驗(yàn)室中最常用的培養(yǎng)基之一，微生物在其上面生長，可形成肉眼可見 的_菌落_。3.組成成分：各種培養(yǎng)基的具體配方_ 不同_，但一般都有_水_、_碳源_、_氮源_、_無機(jī)鹽_，此外培養(yǎng)基還需要

2、滿足微生物生長對(duì)_PH_、_ _特殊營養(yǎng)物質(zhì)_ 以及_氧氣_的需求。 二、無菌技術(shù) 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是_防止外來雜菌的入侵_。 1消毒是指使用_較為溫和_的物理方法或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分_ _對(duì)人體有害_的微生物（不包括_芽孢_(dá)和_孢子_）。實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法有_煮沸消毒法_、_巴氏消毒法_、_化學(xué)藥劑消毒法_。 2.滅菌是指使用_強(qiáng)烈_的理化因素殺死_物體內(nèi)外所有_的微生物，包括_芽孢_(dá)和_孢子_。常用的滅菌方法有_灼燒滅菌_、_干熱滅菌_、_高壓蒸汽滅菌_。 3.實(shí)驗(yàn)操作中避免雜菌的污染，主要包括四方面的內(nèi)容： （1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的_空間_、操作者的_衣著和手_進(jìn)行清潔和

3、消毒。 （2）將用于微生物培養(yǎng)的_器皿_、_接種用具_(dá)和_培養(yǎng)基_等進(jìn)行滅菌。 （3）為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在_酒精燈火焰_附近進(jìn)行。 （4）實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免_已經(jīng)滅菌處理_的材料用具與周圍物品相接觸。 4.在實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被_微生物污染_。使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行_滅菌_處理，以免污染環(huán)境。 三、分離純化大腸桿菌 本實(shí)驗(yàn)使用的培養(yǎng)基為_牛肉膏蛋白胨_培養(yǎng)基。進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分為_ _制備培養(yǎng)基_和_純化大腸桿菌_兩個(gè)階段。 1.制備培養(yǎng)基的一般步驟為：_計(jì)算_、_稱量_、_溶化_、_滅菌_、_倒平板_。 2.純化

4、大腸桿菌：微生物接種最常用的方法是_平板劃線法_和_稀釋涂布法_。 （1）平板劃線法通過_接種環(huán)_在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)_劃線_的操作，將_聚集_的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 （2）稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的_梯度稀釋_，然后將不同稀釋度的菌液_分布涂布_到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。 3.菌落的概念：_由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體_。 4.結(jié)果分析： （1）如果接種了大腸桿菌的培養(yǎng)基上生長的菌落顏色、形狀、大小基本一致，說明_接種符合要求_； （2）若培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中_有雜菌未消化_； （3）未接種大腸桿菌的空白對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程

5、中若長出菌落，則說明_培養(yǎng)基滅菌_不徹底，實(shí)驗(yàn)失敗。 四、菌種保存 1.對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用_臨時(shí)保藏_的方法。 （1）過程：首先將菌種接種到試管的_固體斜面培養(yǎng)基上_，合適溫度下培養(yǎng)，菌落長成后，放于_4_冰箱中保藏，每隔36個(gè)月，都要將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。 （2）缺點(diǎn)：保存時(shí)間_短_，菌種容易被_污染_或產(chǎn)生_變異_。 2.對(duì)于需要長期保存的菌種，可以采用_甘油管藏_的方法，將培養(yǎng)的菌液與等體積滅菌后的甘油混勻于_-20_的冷藏箱內(nèi)保存。隨堂練習(xí)1用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)(C)可以用相同的培養(yǎng)基都需要使用接種針進(jìn)行接種都需要在火焰旁進(jìn)行接種都可以

6、用來計(jì)數(shù)活菌AB C D2下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的說法正確的是(C)A天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基B接種前需對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手等進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理C大腸桿菌的純化培養(yǎng)過程包括培養(yǎng)基的配制和純化大腸桿菌兩個(gè)階段D分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，尿素是培養(yǎng)基中唯一的氮源和碳源3下列對(duì)滅菌和消毒的理解不正確的是(B)A滅菌是指殺滅環(huán)境中的一切微生物的細(xì)胞、芽孢和孢子 B消毒和滅菌實(shí)質(zhì)上是完全相同的C接種環(huán)用灼燒法滅菌 D常用滅菌方法有灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法4用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照是(C)A未接種的選擇培養(yǎng)基 B未接種的牛肉膏

7、蛋白胨培養(yǎng)基C接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 D接種了的選擇培養(yǎng)基5下列關(guān)于微生物的分離和培養(yǎng)的有關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是 (A)A微生物培養(yǎng)前，需對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行消毒 B分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度C測定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用菌落計(jì)數(shù)法D分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源6三個(gè)培養(yǎng)皿中分別加入10 mL不同的培養(yǎng)基，然后接種相同的大腸桿菌樣液。培養(yǎng)36 h后，計(jì)算菌落數(shù)，結(jié)果如下表。下列選項(xiàng)正確的是(D)培養(yǎng)皿培養(yǎng)基成分菌落數(shù)瓊脂、葡萄糖35瓊脂、葡萄糖、生長因子250瓊脂、生長因子0A. 該實(shí)驗(yàn)采用的是液體培養(yǎng)基 B該實(shí)驗(yàn)采用平板劃線法接種C和對(duì)照，說明大腸桿菌的生長不

8、需要生長因子D和對(duì)照，說明大腸桿菌的生長需要葡萄糖7.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是( C )A計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌 B計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板 D計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板8.有關(guān)倒平板的操作錯(cuò)誤的是(C ) A將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上 B使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰 C將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌子上 D等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置 9.有關(guān)平板劃線操作正確的是(D ) A使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過程中不再滅菌 B打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞 c將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸人平板內(nèi)，劃

9、三至五條平行線即可 D最后將平板倒置，放人培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 10.關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是( D )A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽 D.無機(jī)氮源也能提供能量8下表是用于從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的培養(yǎng)基配方。請(qǐng)回答：試劑牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水用量5 g10 g5 g20 g1000 mL(1)培養(yǎng)基的類型有很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、_氮源_和無機(jī)鹽。上述培養(yǎng)基配方中能充當(dāng)碳源的成分是_牛肉膏和蛋白胨_。培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)pH，并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行_滅菌_處理。該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)上分類屬于_固體培養(yǎng)基_。(2)分離

10、純化微生物最常使用的接種方法是_平板劃線法_和_稀釋涂布平板法_。(3)假設(shè)培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是什么？(列舉兩項(xiàng))_稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高；劃線時(shí)，劃完第一次沒有滅菌即接著劃第二次；培養(yǎng)過程中滅菌不嚴(yán)格，受到了其他微生物的污染。_。9.葡萄酒是具有多種營養(yǎng)成分的高級(jí)飲料。某同學(xué)制作葡萄酒的過程大致如下：將沖洗過并晾干的成熟葡萄捏爛，與糖按103的比例放入發(fā)酵瓶，攪拌密封后發(fā)酵。初期，泡沫不斷增多，隨著時(shí)間的延長，泡沫逐漸減少，待基本不產(chǎn)生氣泡后，結(jié)束發(fā)酵。根據(jù)上述過程，回答以下問題。(1)發(fā)酵所需的酵母菌菌種的來源是_葡萄表皮上附著的野生型酵母菌_。(2)具

11、有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種。若想篩選出這樣的菌種，步驟如下：獲得野生菌：從酵母菌的生存環(huán)境中獲得野生菌；制備_選擇_培養(yǎng)基：在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，注意添加_適量的糖(蔗糖或葡萄糖)_并_調(diào)整pH_，滅菌后制成平板；接種：采用_稀釋涂布平板(或平板劃線)_法將野生菌接種在平板上；培養(yǎng)：在適宜條件下培養(yǎng)一定時(shí)間；選種：從_生長良好的菌落_中篩選出所需要的菌株。(3)增大接種量能縮短發(fā)酵時(shí)間。為增加菌種的量，在上述中獲得所需菌株后，可以采取的措施是_擴(kuò)大培養(yǎng)(或多次培養(yǎng))_。(4)釀酒過程中，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)活菌數(shù)量適宜卻不產(chǎn)生酒精。在釀酒初期應(yīng)采取的措施是_隔絕空氣(或加強(qiáng)密封)_。(5)葡萄汁中加入糖的目的是_酵母菌提供碳源，促進(jìn)發(fā)酵_。(6)密封發(fā)酵后泡沫增多，這時(shí)應(yīng)該采取的措施是_松蓋放氣_。(7)為研究發(fā)酵瓶中酵母菌的生長狀況，常進(jìn)行取樣統(tǒng)計(jì)分析。一般用顯微計(jì)數(shù)法測定酵母菌數(shù)量時(shí)常常需要借助一種特制的載玻片_血球計(jì)數(shù)板_來完成。13 (2009上海卷)氯苯化合物是重要的有機(jī)化工原料，因其不易降解，會(huì)污染環(huán)境。某研究小組依照下圖所示的實(shí)驗(yàn)方案，篩選出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培養(yǎng)基配方如表。表培養(yǎng)基的組成液體培養(yǎng)基蛋白胨牛肉膏氯苯氯化鈉硝酸銨無機(jī)鹽(無碳)蒸餾水號(hào)10g5g5mg5g1L號(hào)50mg5g3g適 量1L號(hào)20-80mg5g3g適