產(chǎn)品管理--NEB產(chǎn)品知識和市場培訓（PPT51頁）

1、來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEB 產(chǎn)品知識和市場培訓產(chǎn)品知識和市場培訓 2001年8月市場與技術支持部來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載第一部分第一部分 NEBNEB廠家背景回顧廠家背景回顧美國總部： Beverly, MA來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載19752001支柱產(chǎn)品支柱產(chǎn)品工具酶工具酶先進的基因克隆和高先進的基因克隆和高表達體系的構建技術表達體系的構建技術120120種自主開發(fā)的酶種自主開發(fā)的酶6060多種酶是由多種酶是由NEBNEB首先篩首先篩選到并進入商品化生產(chǎn)選到并進入商品化生產(chǎn)二十五年的生產(chǎn)歷史二十五年的生產(chǎn)歷史來

2、自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載國際化的生產(chǎn)和營銷網(wǎng)絡國際化的生產(chǎn)和營銷網(wǎng)絡v 在全世界在全世界3535個國家和地區(qū)有分銷商個國家和地區(qū)有分銷商v 美國、英國、德國、加拿大四個生產(chǎn)基地美國、英國、德國、加拿大四個生產(chǎn)基地專業(yè)水準的廠商專業(yè)水準的廠商v 發(fā)酵中心發(fā)酵中心生產(chǎn)部生產(chǎn)部v 酶制備和酶制備和DNADNA重組技術中心重組技術中心研發(fā)部研發(fā)部v 分子生物學和寄生蟲學研究中心分子生物學和寄生蟲學研究中心基礎研究院基礎研究院來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載第二部分第二部分 NEB NEB 產(chǎn)品講解產(chǎn)品講解來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載核酸工

3、具酶核酸工具酶 DNA限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶 DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶 Vent系列的系列的PCR聚合酶聚合酶 DNA/RNA修飾酶修飾酶來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載 在在5050 l l反應體系中，反應體系中，1 1小時內(nèi)，完全消化小時內(nèi)，完全消化1 1 g g的的DNADNA所所需要的酶量為需要的酶量為1 1 UnitUnit 常用酶大多數(shù)為常用酶大多數(shù)為10 10 U/U/ l l 4 4種不同顏色標記的標準緩沖液和特定緩沖液種不同顏色標記的標準緩沖液和特定緩沖液 分為分為A A、B B、C C三種，依表詢?nèi)N，依表詢 在不被稀釋的情況下，可長期存放

4、在在不被稀釋的情況下，可長期存放在 零下零下2020度長達度長達2020之久之久DNA限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載非特異性的內(nèi)切酶活性檢測非特異性的內(nèi)切酶活性檢測核酸酶污染檢測核酸酶污染檢測外切酶污染檢測外切酶污染檢測藍白斑篩選檢測藍白斑篩選檢測DNA限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶針對于常用在克隆實驗中的酶針對于常用在克隆實驗中的酶檢驗過量酶切對檢驗過量酶切對DNADNA末端的完整性是否有破壞末端的完整性是否有破壞來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEB自主克隆的酶基因自主克隆的酶基因從重組菌株中提純的酶從重組菌株中提純的酶隨酶另附一管隨

5、酶另附一管BSA酶識別位點被酶識別位點被dam或或dcm甲基化后不能被切動甲基化后不能被切動酶是否耐熱酶是否耐熱經(jīng)過藍白斑法檢測經(jīng)過藍白斑法檢測目錄書中出現(xiàn)的標志符號的含義目錄書中出現(xiàn)的標志符號的含義最佳的工具酶反應溫度最佳的工具酶反應溫度酶所對應的緩沖液編號酶所對應的緩沖液編號DNA限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載Homing 核酸內(nèi)切酶核酸內(nèi)切酶識別識別12-40堿基的長的、對稱識別位點的稀有內(nèi)切酶堿基的長的、對稱識別位點的稀有內(nèi)切酶 v 同裂酶的概念同裂酶的概念識別同一酶切位點的一組內(nèi)切酶識別同一酶切位點的一組內(nèi)切酶 v BSA的作用的作用酶保護

6、劑，在反應中保證酶具有最佳的活性酶保護劑，在反應中保證酶具有最佳的活性DNA限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶小常識：小常識：來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEB限制性內(nèi)切酶的賣點：限制性內(nèi)切酶的賣點：種類非常齊全，（豐富的稀有酶）種類非常齊全，（豐富的稀有酶）穩(wěn)定性好，存放時間長穩(wěn)定性好，存放時間長價格在進口酶類里適中價格在進口酶類里適中質(zhì)量可靠質(zhì)量可靠DNA限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載DNA/RNA聚合酶聚合酶DNA或或RNA的探針標記的探針標記3末端和末端和5末端的補平末端的補平3末端的堿基置換末端的堿基置換DNA測序反應、定點突變

7、和轉(zhuǎn)錄測序反應、定點突變和轉(zhuǎn)錄3末端突出的切平末端突出的切平特特 性：性：以單鏈以單鏈DNA或或RNA為模板，從為模板，從5端向端向3端合成新鏈端合成新鏈應應 用用來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載性能指標：性能指標：5端向端向3端的外切活性端的外切活性3端向端向5端的外切活性端的外切活性聚合速度聚合速度錯配率錯配率耐熱性耐熱性延伸能力延伸能力常用的種類：常用的種類：E.coli DNA Polymerase IKlenow Fragment （35 exo-）T4 DNA PolymeraseTerminal TransferaseM-MuLV Reverse Transcr

8、iptase*M-MuLVReverse Transcriptase（RNase H-） T7/Sp6 RNA PolymeraseDNA/RNA聚合酶聚合酶來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEB Vent系列聚合酶系列聚合酶特 性 / 種 類Vent Vent(exo-)Deep VentDeep VentDeepVent(exo-) DeepVent(exo-) 3- 5外切活性3- 5外切活性有有無無有有無無5- 3外切活性5- 3外切活性無無無無無無無無熱穩(wěn)定性熱穩(wěn)定性95C 6.7小時95C 6.7小時95C 6.7小時95C 6.7小時95C 23小時95C 23

9、小時95C 23小時95C 23小時錯配率錯配率低低較高較高最長擴增片段最長擴增片段13.2kb13.2kb15.0kb15.0kb14.0kb14.0kb15.0kb15.0kbVent DNA Polymerase 主要應用：常規(guī)主要應用：常規(guī)PCR擴增擴增 雙脫氧法測序雙脫氧法測序來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEB Vent系列聚合酶系列聚合酶Vent DNA Polymerase與常規(guī)與常規(guī)Taq酶的錯配率比較酶的錯配率比較賣點：賣點：高保真高保真耐熱性非常好耐熱性非常好來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載DNA/RNA 修飾酶修飾酶DNA / RN

10、A Modifying Enzyme連接酶連接酶 Ligase激酶激酶 Kinase堿性磷酸酶堿性磷酸酶 PhosphataseBeta瓊脂糖酶瓊脂糖酶 Agarase甲基化酶甲基化酶 Methylase核酸酶核酸酶 Nuclease外切酶外切酶 Exonulease內(nèi)切酶內(nèi)切酶 EndonuleaserecA重組蛋白酶重組蛋白酶recA Protein來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載DNA/RNA 修飾酶修飾酶重點產(chǎn)品：重點產(chǎn)品： T4 DNA Ligase單位定義：單位定義：20000 NEB Unit = 300 Weiss Unit 4000 NEB Unit = 6

11、0 Weiss Unit T4 Polynucleotide Kinase （T4 PNK）對對DNA5末端進行磷酸化，用于探針標記或克隆末端進行磷酸化，用于探針標記或克隆 Alkaline Phosphatase, Calf Intesinal （CIP）去除去除DNA 5和和3的磷酸基團，用于制備的磷酸基團，用于制備5的置換的置換標記和載體克隆，阻止載體的自我連接。標記和載體克隆，阻止載體的自我連接。來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載分子量標準分子量標準來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載 DNA分子量標準分子量標準常用類型：整數(shù)分子量的常用類型：整數(shù)分子量的

12、 Marker1kb DNA Ladder2-log DNA Ladder100bp DNA LadderNEW來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載噬菌體噬菌體DNA和質(zhì)粒和質(zhì)粒DNA酶消化型的酶消化型的DNA分子量標準分子量標準非整數(shù)型的非整數(shù)型的 DNA分子量標準分子量標準來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載 DNA分子量標準分子量標準PGF 分子量標準分子量標準DNA被包埋在凝膠中，以注射器的形式包裝被包埋在凝膠中，以注射器的形式包裝用于幾十用于幾十kb至上千至上千kb的的DNA分離時的分離時的Marker脈沖電泳分離脈沖電泳分離 分子量種類分子量種類： Lo

13、w Range MidRange Lambda Ladder Yeast Chromosome來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載RNA 分子量標準分子量標準適用于普通凝膠或變性膠適用于普通凝膠或變性膠條帶為整數(shù)的分子量條帶為整數(shù)的分子量 RNA分子量標準分子量標準來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載蛋白分子量標準蛋白分子量標準蛋白分子量標準蛋白分子量標準普通型普通型2-212kDa （精確）（精確）預染型預染型6-175kDa （估計）（估計） HRP蛋白蛋白Marker檢測包檢測包 6.5-165kDa （Biotin標記，標記，Biotin Ab）來自來自 中

14、國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載蛋白工具酶蛋白工具酶蛋白酶蛋白酶內(nèi)切糖苷酶內(nèi)切糖苷酶外切糖苷酶外切糖苷酶蛋白激酶和抑制劑蛋白激酶和抑制劑蛋白磷酸化酶和抑制劑蛋白磷酸化酶和抑制劑Factor Xa Protease來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載探針標記探針標記雜交檢測雜交檢測NEBlot Kit隨機引物法探針標記試劑盒隨機引物法探針標記試劑盒下游應用：下游應用： 文庫篩選文庫篩選 Southern / Northern 原位雜交原位雜交賣賣 點：點：標記的標記的dNTP參入率高參入率高模板用量在模板用量在25ng到到2ug半小時即可完成標記反應半小時即可完成標記反應可用

15、于多種類型的標記可用于多種類型的標記dNTP（同位素或非同位素標記）（同位素或非同位素標記）來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEBlot Phototope Kit隨機引物法隨機引物法探針標記試劑盒探針標記試劑盒用于化學發(fā)光檢測用于化學發(fā)光檢測與與Phptotope-Star Chemiluminescent Detection Kit配合使用配合使用生物素標記的探針穩(wěn)定，可長時間存放生物素標記的探針穩(wěn)定，可長時間存放雜交后可洗脫下來，進行反復雜交雜交后可洗脫下來，進行反復雜交來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載Phptotope-Star Chemilumin

16、escent Detection Kit賣賣 點：點：靈敏度同位素檢測法相當靈敏度同位素檢測法相當曝光時間短，只需曝光時間短，只需10-70分鐘分鐘信號穩(wěn)定，可通過改變曝光信號穩(wěn)定，可通過改變曝光時間來摸索最佳的信號強度時間來摸索最佳的信號強度來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載第三部分第三部分 NEB 蛋白表達產(chǎn)品介紹蛋白表達產(chǎn)品介紹來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載1. pMAL 蛋白融合表達蛋白融合表達 與純化系統(tǒng)與純化系統(tǒng)賣賣 點：點：生產(chǎn)級別的應用生產(chǎn)級別的應用高水平表達量高水平表達量1升培養(yǎng)上清可達到升培養(yǎng)上清可達到100mg的蛋白產(chǎn)量的蛋白產(chǎn)量與與M

17、BP融合表達可以增加融合表達可以增加蛋白的溶解性蛋白的溶解性來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載1. IMPACT蛋白表達蛋白表達 與純化系統(tǒng)與純化系統(tǒng)賣賣 點：點：應用了蛋白內(nèi)含肽自我剪應用了蛋白內(nèi)含肽自我剪切技術切技術無需蛋白酶去除標簽，只無需蛋白酶去除標簽，只需一次過柱純化過程需一次過柱純化過程Intein可接在蛋白的可接在蛋白的C端端或或N端端IMPACT-CN System來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載IMPACT-TWIN System賣賣 點：點：應用了蛋白內(nèi)含肽自我剪應用了蛋白內(nèi)含肽自我剪切技術，將兩個切技術，將兩個Intein接接在目的蛋白的

18、兩端。在目的蛋白的兩端。無需蛋白酶去除標簽，只無需蛋白酶去除標簽，只需一次過柱純化過程需一次過柱純化過程Intein行使剪切功能后，行使剪切功能后，可在目的蛋白兩端產(chǎn)生帶可在目的蛋白兩端產(chǎn)生帶S的氨基和羧基，可環(huán)化，的氨基和羧基，可環(huán)化，可標記可標記來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載第三部分第三部分 NEB英文目錄附錄的內(nèi)容介紹英文目錄附錄的內(nèi)容介紹NEBcutter V1.0來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載內(nèi)容一內(nèi)容一 分子生物學數(shù)據(jù)庫索引分子生物學數(shù)據(jù)庫索引REBASE 限制性內(nèi)切酶數(shù)據(jù)庫限制性內(nèi)切酶數(shù)據(jù)庫3100種限制性酶的相關信息種限制性酶的相關信息酶

19、的基因序列、甲基化敏感位點、結(jié)酶的基因序列、甲基化敏感位點、結(jié)構構5600篇參考文獻篇參考文獻InBase 內(nèi)含肽數(shù)據(jù)庫內(nèi)含肽數(shù)據(jù)庫分子生物學數(shù)據(jù)庫網(wǎng)址總匯分子生物學數(shù)據(jù)庫網(wǎng)址總匯224個網(wǎng)址個網(wǎng)址可按功能領域分類查找可按功能領域分類查找來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載內(nèi)容二內(nèi)容二 工具酶常用查詢表工具酶常用查詢表以酶識別序列分類的索引以酶識別序列分類的索引同裂酶索引同裂酶索引限制性內(nèi)切酶的發(fā)展歷史和知識背景限制性內(nèi)切酶的發(fā)展歷史和知識背景NEBuffer的酶的酶 活性對照表活性對照表雙酶切緩沖液選擇表雙酶切緩沖液選擇表酶稀釋液對照查詢表酶稀釋液對照查詢表限制性酶在引物延伸反

20、應中的活性表限制性酶在引物延伸反應中的活性表來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載限制性核酸內(nèi)切酶的熱失活對照表限制性核酸內(nèi)切酶的熱失活對照表酶切反應酶用量查詢表酶切反應酶用量查詢表 補平反應新酶識別位點查詢表補平反應新酶識別位點查詢表相同粘端酶查詢表相同粘端酶查詢表限制性酶識別位點中甲基化位點查詢表限制性酶識別位點中甲基化位點查詢表來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載內(nèi)容三內(nèi)容三 分子生物學常用工具表分子生物學常用工具表常用常用E.coli菌株表型及基因型查詢表菌株表型及基因型查詢表常用遺傳標記常用遺傳標記NEB菌株描述菌株描述遺傳密碼表遺傳密碼表氨基酸化學結(jié)構氨基

21、酸化學結(jié)構常用單位換算常用單位換算常用載體上的酶識別位點出現(xiàn)頻率常用載體上的酶識別位點出現(xiàn)頻率常用載體的酶切圖譜常用載體的酶切圖譜來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載內(nèi)容四內(nèi)容四 分子生物學實驗分子生物學實驗Protocol瓊脂糖包埋的瓊脂糖包埋的DNA的限制性酶消化的限制性酶消化基因組酶消化的選擇指導基因組酶消化的選擇指導甲基化酶反應甲基化酶反應來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載第五部分第五部分 NEB NEB 銷售統(tǒng)計分析銷售統(tǒng)計分析來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載2000年度NEB全國銷售額的大區(qū)分配2000年度NEB全國銷售額的大區(qū)分配4

22、.8513.085.56北京區(qū)北京區(qū)上海區(qū)上海區(qū)廣州區(qū)廣州區(qū)單位：萬美金來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載12345678910QIAGENClontechNEB分子生物學試劑產(chǎn)品銷售比例分子生物學試劑產(chǎn)品銷售比例統(tǒng)計統(tǒng)計 2000.42001.3來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEB產(chǎn)品種類銷售比較NEB產(chǎn)品種類銷售比較12%60%9%8%6%3%2%XS EnzymeRestriction EnzymeModifying EnzymeDNA MarkerProtein MarkerProtein ExpressionOthers2000.4 2001.3來

23、自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載2001.42001.7 NEB NEB產(chǎn)品種類銷售統(tǒng)計產(chǎn)品種類銷售統(tǒng)計7%62%12%7%7%5% 0%XS EnzymeRestriction EnzymeModifying EnzymeDNA MarkerProtein MarkerProtein ExpressionOthers來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載今年與去年4月至7月同期今年與去年4月至7月同期銷售額比較銷售額比較785770564997809113402157471521813454020000AprilMayJuneJuly20002001比去年同期增長

24、一倍多來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEB2000年度月銷售統(tǒng)計NEB2000年度月銷售統(tǒng)計0.0010,000.0020,000.0030,000.0040,000.00April-00June-00August-00October-00December-00February-01NEB來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載NEB 2000年度上海地區(qū)銷售統(tǒng)計NEB 2000年度上海地區(qū)銷售統(tǒng)計1431301.82101065.54120128.9869642.110500000100000015000002000000上海上海江蘇江蘇浙江浙江湖北湖北年銷售額

25、來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載0100200300XSSM+LTotalHincSphT4 PNKSpeT4 DNA PolymeraseEcoR KlenowSmaPstSacBglNocXbaSalHind XhoEcoRBamHNotT4 Ligase來自來自 中國最大的資料庫下載中國最大的資料庫下載目前的小酶庫存目前的小酶庫存ECOR IHinc IIHind IIIMsp IHae IIINde ISnaB IBamH ISAL IPST ISMA IKpn IBGI IIXBA IXHO IPvu IISac IBstE IISAU3A IFNU4H ISph ISTU INot INco IECOR VCla IPNKT4 DNA LigaseT4 DNA Po