微生物限度檢查方法驗證方案

1、頁碼：第1頁，共12頁文件編碼： ZYCWJ-TS-07156-01起草部門：質(zhì)量管理部版本號：01標(biāo)題微生物限度檢查方法驗證方案起草人起草時間審核人審核時間批準(zhǔn)人批準(zhǔn)時間頒發(fā)部門質(zhì)量管理部生效日期分發(fā)部門份數(shù)質(zhì)量管理部生產(chǎn)部設(shè)備部 物料部行政人事部銷售部財務(wù)部變更記載：修訂號批準(zhǔn)日期執(zhí)行日期變更原因頁碼：第2頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微生物限度檢查方法驗證方案微生物驗證實施小組主要成員:部門質(zhì)量管理部曰.rin 寺it曰.rin 寺it曰.rm 寺it質(zhì)量官理部質(zhì)量官理部質(zhì)量官理部質(zhì)量官理部姓名職位驗證領(lǐng)導(dǎo)小組審查匯簽:姓名部門職務(wù)或崗位簽字日期

2、企業(yè)負(fù)責(zé)人質(zhì)量管理部經(jīng)理生產(chǎn)部經(jīng)理設(shè)備部經(jīng)理質(zhì)量管理部QC主管質(zhì)量管理部QA主管物料部經(jīng)理頁碼：第3頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微生物限度檢查方法驗證方案1. 概述藥典微生物限度檢查法中要求在建立藥品的微生物限度檢查法時，應(yīng)進行方法的驗證，以證明所采 用的方法適合于該藥品的微生物限度檢查。所以對感冒靈顆粒微生物限度檢查進行方法的驗證。2. 目的為了保證檢驗質(zhì)量，對所用的檢驗方法必須經(jīng)過驗證，才能確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。3. 適用范圍本方案適用于感冒靈顆粒微生物方法學(xué)確實認(rèn)與驗證。4. 驗證人員職責(zé)4.1 .驗證小組：組長：質(zhì)量管理部經(jīng)理成員：QC主管

3、、微生物操作人員4.2 .職責(zé)及分工：QC主管組織起草該驗證方案，并組織實施該方案；微生物操作人員具體實施該方案；質(zhì)量管理部經(jīng)理協(xié)助和監(jiān)控該方案的實施。4.3 .驗證方案批準(zhǔn)后，應(yīng)進行培訓(xùn)。由驗證小組指定人員負(fù)責(zé)對小組成員及和驗證有關(guān)的人員進行培訓(xùn)。5. 驗證依據(jù)中國藥典2015年版通則“1105”、“1106”序號項目潛在的風(fēng)險分析潛在的失敗后果原因分析嚴(yán)重程度發(fā)生頻次風(fēng)險等級措施結(jié)果采取的措施嚴(yán)重程度發(fā)生頻次風(fēng)險等級1驗證方案編寫人員編寫人員未按照ZYCWJ-SOP-10008-01微生物限度檢查法標(biāo)準(zhǔn) 操作規(guī)程編寫方案。驗證方法錯 誤，導(dǎo)致驗證 結(jié)果不可靠。人員培訓(xùn)考核不到位F2P3AL

4、ARP對驗證編寫人員進行培 訓(xùn)和考核，合格后方可 編寫F2P5ACC可接受2試驗人員試驗人員未按照編寫的驗證方案進行操作操作不正確，導(dǎo)致試驗結(jié)果不可靠人員培訓(xùn)考核不到位F2P3ALARP按照驗證方案進仃培 訓(xùn)，培訓(xùn)合格后方可操 作F2P5ACC可接受3培養(yǎng)箱、凈化工作臺儀器未經(jīng)校驗或不在校驗期內(nèi)。導(dǎo)致檢驗環(huán)境 和培養(yǎng)環(huán)境不 符合要求，最 終導(dǎo)致驗證失 敗。使用人員 使用前未 對校驗期 進行檢查F2P3ALARP設(shè)備人員使用前對設(shè)備進行檢查。F3P5ACC可接受4干熱火菌 烘箱、壓 力蒸氣鍋儀器未經(jīng)校驗或不在校驗期內(nèi)。導(dǎo)致試驗結(jié)果出現(xiàn)異常。使用人員使用前未對校驗期進行檢杳F2P3ALARP設(shè)備人

5、員使用前對設(shè)備進行檢查。F3P5ACC可接受5對照培 養(yǎng)基、檢查用培養(yǎng)基、檢 定菌對照培養(yǎng)基、檢查用培養(yǎng)基、檢疋菌失效導(dǎo)致驗證失敗使用前未對對 照培養(yǎng)基、檢 查用培養(yǎng)基、F2P3ALARP對管理人員進行培訓(xùn)，嚴(yán)格按照ZYCWJ-SMP-10020-00F3P5ACC可接受檢定菌有效期進行核查。培養(yǎng)基及檢定菌管理規(guī) 程進行管理，使用前頁碼：第5頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微生物限度檢查方法驗證方案使用人對有效期進行確認(rèn)。6培養(yǎng)基、 緩沖液、 消毒劑培養(yǎng)基、緩沖液、消毒劑配制不正確導(dǎo)致驗證失敗嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求制備緩沖液和消毒劑F2P3ALARP對實驗人員

6、進行驗證培訓(xùn)F3P5ACC可接受7火菌器具、潔凈服已火菌器具和潔凈服過效期導(dǎo)致驗證失敗使用前未對已火菌器具和潔 凈服有效期進行確認(rèn)F2P3ALARP使用前對已火菌器具和潔凈服有效期進行確認(rèn)F3P5ACC可接受8驗證方法不正確1、驗證方案編與不正確；2、未嚴(yán)格按照驗證方案開展驗證工作導(dǎo)致驗證失敗驗證方案未經(jīng)批準(zhǔn)F3P3ALARP對驗證方案進行審核F3P5ACC可接受9控制菌 檢驗結(jié) 果不合 格實驗組無菌落生長，供試品可能有抑菌性導(dǎo)致驗證失敗1、供試品可能 對試驗菌存在抑制作用2、檢驗員判斷 失誤。F2P3ALARP采用培養(yǎng)基稀釋法消除抑菌性F3P5ACC可接受10實驗組各試驗組回收率低于或?qū)е买?/p>

7、證失敗1、供試品可能F2P3ALARP采用培養(yǎng)基稀釋法消除F3P5ACC可頁碼：第6頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微生物限度檢查方法驗證方案菌種回收率不達標(biāo)咼于標(biāo)準(zhǔn)范圍對試驗菌存在 抑制作用2、檢驗人貝計 數(shù)錯誤。抑菌性接受11樣品儲存環(huán)境樣品儲存環(huán)境、溫度異 常。導(dǎo)致樣品被污染或失敗樣品存放不當(dāng)F2P3ALARP嚴(yán)格控制樣品存放環(huán)境的溫濕度F3P5ACC可接受12潔凈區(qū)環(huán)境1、潔凈區(qū)溫濕度、壓差異常2、潔凈區(qū)環(huán)境被污染導(dǎo)致驗證失敗1. 潔凈區(qū)溫濕 度、壓差控制 不當(dāng)2. 未定期對潔 凈區(qū)進行清潔 和消毒；F2P3ALARP1. 每天定期監(jiān)察潔凈區(qū)的溫

8、濕度；2. 按照SOP規(guī)定對潔凈區(qū)進行消毒；3. 嚴(yán)格按照潔凈度 監(jiān)測管理規(guī)程對 潔凈區(qū)環(huán)境進行監(jiān)測。F3P5ACC可接受6.1結(jié)果分析：通過以上采取的措施，風(fēng)險均控制在可接受范圍內(nèi)。7.人員培訓(xùn)確認(rèn)表培訓(xùn)時間培訓(xùn)內(nèi)容培訓(xùn)對象培訓(xùn)地點培訓(xùn)講師主辦部門被培訓(xùn)人員簽名序號部門及崗位QA主管QC主管設(shè)備部經(jīng)理設(shè)備管理員生產(chǎn)部經(jīng)理質(zhì)量管理部QC檢驗員質(zhì)量管理部QC檢驗員質(zhì)量管理部QC檢驗員質(zhì)量管理部QC檢驗員8.驗證方法6.1儀器及設(shè)備名稱儀器及設(shè)備名稱型號生產(chǎn)廠家是否校驗備注生化培養(yǎng)箱是口否口頁碼：第8頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微生物限度檢查方法驗證方案

9、金黃色葡萄球菌CMCC(B)26 003、大腸埃希菌CMCC(B)44 102、枯草芽孢菌CMCC(B)63 501、恒溫培養(yǎng)箱是口否口凈化工作臺是口否口超凈工作臺是口否口立式壓力消毒器是口否口立式壓力火菌器是口否口驗證用樣品：感冒靈顆粒規(guī)格:批號:感冒靈顆粒感冒靈顆粒規(guī)格：規(guī)格：批號：批號：6.2 .驗證用培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：沙氏匍萄糖瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號沙氏匍萄糖瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號麥康凱液體培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號麥康凱瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠

10、家：批號：配制批號驗證用菌種白色念珠菌CMCC(F)98 001、黑曲霉菌CMCC(F)98 003菌液制備:取經(jīng)30C 35C培養(yǎng)1824小時的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌與枯草芽孢桿菌營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)物1ml5 7加入9ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至1010為不大于100cfu/ml備用。取經(jīng)2025C培養(yǎng)23天的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml，加入9ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至105為不大于100cfu/ml備用。將黑曲霉菌斜面的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，20? 25C培養(yǎng)5? 7天，使大量的孢子成熟。加入3-5ml含0.05% ml/ml丨聚山梨酯

11、80的0.9%無菌氯化鈉溶液或無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。然后，采用適宜方法吸出孢子懸液無菌試管內(nèi)用含0.05% ml/ml丨聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液或無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液依次稀釋至，制成每 1ml含孢子數(shù)小于100cfu 的孢子懸液。上述菌懸液制備后假設(shè)在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；假設(shè)保存在 28C，可在24內(nèi)使用。供試液制備：取樣品10g,加入pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml，為1: 10供試液。頁碼：第9頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微生物限度檢查方法驗證方案7.1需氧菌、霉菌及酵母菌計數(shù)平皿法所加菌液的

12、體積不得超過供試液體積的1%為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分檢出，首先應(yīng)選擇最低稀釋級的供試液進行計數(shù)方法適用性檢查。試驗組取上述制備好的供試液，加入試驗菌液、混勻，使每1ml供試液或每張濾膜過濾的供試液中含菌量不大于100cfu。取的供試液和小于 lOOOOcfu的銅綠假單胞菌菌懸液混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基1520ml，混勻，凝固，于 3035C倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備2個平皿。取的供試液和小于 10000cfu的金黃色葡萄球菌菌懸液混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基1520ml，混勻，凝固，于 3035C倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)

13、。平行制備 2個平皿。取的試液和小于10000cfu的枯草芽孢桿菌菌懸液混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基1520ml，混勻，凝固，于 3035 C倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備2個平皿。取的供試液和小于 10000cfu的白色念珠菌菌懸液混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基1520ml，混勻，凝固，于 3035 C倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備2個平皿。取的供試液和小于 10000cfu的黑曲霉菌懸液混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基1520ml，混勻，凝固，于 3035C倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備 2個平皿。取

14、的供試液和小于 10000cfu的白色念珠菌菌懸液混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基1520ml，混勻，凝固，于 2025 C倒置培養(yǎng)5天點計菌落數(shù)。平行制備2個平皿。取的供試液和小于 10000cfu的黑曲霉菌懸液混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基1520ml，混勻，凝固，于 2025C倒置培養(yǎng)5天點計菌落數(shù)。平行制備 2個平皿。7.3菌液組取小于100cfu的銅綠假單胞菌菌懸液、金黃色葡萄球菌菌懸液、枯草芽孢桿菌菌懸液、白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液各1ml，注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基約1520ml，混勻，凝固，于3035C倒置

15、培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。各平行制備2個平皿。取小于100cfu的白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液各1ml，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基各1520ml，混勻，凝固，于 2025C倒置培養(yǎng)5天點計菌落數(shù)。各平行制備2個平皿。供試品對照組取的供試液1ml，注入平皿中，分別立即傾注1520 ml溫度不超過45C胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基3035 C倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基2025C倒置培養(yǎng)5天點計菌落數(shù)。各組平行制備2個平皿。計算公式：稀釋劑對照組的回收率= 稀釋劑對照組菌落數(shù)-供試品對照組菌數(shù)X 100%菌液組菌落數(shù)試驗組菌數(shù)回收率=

16、試驗組菌落數(shù)-供試品對照組菌數(shù)X 100%菌液組菌落數(shù)頁碼：第10頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微生物限度檢查方法驗證方案7.5判定標(biāo)準(zhǔn)：實驗組、稀釋劑對照組的菌數(shù)回收率應(yīng)在2之間。假設(shè)各試驗菌的回收率均符合規(guī)定,照所用的供試液制備方法及計數(shù)方法進行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)。表1平皿法驗證結(jié)果1#批號:、實驗組別試驗菌種供試液對照組菌液組菌數(shù)試驗組菌數(shù)回收率%1號2號1號2號金黃色葡萄球菌大腸埃希菌枯草芽孢桿菌黑曲霉白色念珠菌表2平皿法驗證結(jié)果 2#批號:實驗組別試驗菌種供試液對照組菌液組菌數(shù)試驗組菌數(shù)回收率%1號2號1號2號金黃色葡

17、萄球菌大腸埃希菌枯草芽孢桿菌黑曲霉白色念珠菌表3平皿法驗證結(jié)果 3#批號:實驗組別試驗菌種供試液對照組菌液組菌數(shù)試驗組菌數(shù)回收率%1號2號1號2號金黃色葡萄球菌大腸埃希菌頁碼：第11頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微生物限度檢查方法驗證方案枯草芽孢桿菌黑曲霉白色念珠菌結(jié)果說明:8.控制菌檢查方法驗證1大腸埃希菌取1: 10供試液10ml兩份，分別加入兩瓶 100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，其中一瓶加入 1ml大腸埃 希菌液不大于100cfu/ml丨為試驗組；一瓶為供試品；另取一瓶 100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基加入 10ml 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液為陰性

18、對照。取上述培養(yǎng)物1ml,接種至含100ml麥康凱液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，4244 C培養(yǎng)2448小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上3035C培養(yǎng)1872小時。表10大腸埃希菌常規(guī)法驗證結(jié)果1#批號:步驟實驗組陽性對照組陰性對照組胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，3035C培養(yǎng)1824小時麥康凱液體培養(yǎng)基，4244C培養(yǎng)2448小時取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，3035C培養(yǎng)1872小時。假設(shè)麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進行別離、純化及適宜的鑒定試驗,確證是否為大腸埃希菌；假設(shè)麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定結(jié)果 為陰性，判未檢出大腸埃希菌。表11大腸埃希菌常規(guī)法驗證結(jié)果2#批號:步驟實驗組陽性對照組陰性對照組胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，3035C培養(yǎng)1824小時麥康凱液體培養(yǎng)基，4244C培養(yǎng)2448小時取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，3035C培養(yǎng)1872小時。假設(shè)麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長，應(yīng)進行別離、純化及適宜的鑒定試驗頁碼：第12頁共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01版本號：01題目：微