臨床生化常用地色原及檢測波長

1、實用標準文案精彩文檔臨床生化常用的色原及檢測波長Toos 545nm苯酚（對氯苯酚）505nmNAD （ P） H 指示系統(tǒng)，波長 340nm，項目：ALT、AST、GLUC 己糖激酶法、CK、UREA、LDH 等。苯衍生物類，波長 400-410nm ，女口 ALP、GGT、CHE 等。過氧化物酶指示系統(tǒng)，項目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA 等?？梢姽獠ㄩL及其互補色：可見光波長及其相應被吸收的顏色依次為：紅色（630700nm ）、橙色（600 630nm ）、黃色（570 600nm ）、綠色（500 570nm ） 、藍色（435 500nm ）、紫色（400 435nm

2、）。 540nm :1.雙縮脲測蛋白：所有蛋白質分子都含有肽鍵。在堿性溶液中，肽鍵與銅離子結合，生成藍紫色化合物，在 540nm 處吸光度與肽鍵的數(shù)量呈正比關系，可以計算蛋白質含量。2.染料結合法測實用標準文案精彩文檔腦脊液蛋白：在檸檬酸存在的酸性條件下，伊紅丫燃料離解成陰離子型，染料的 黃色消退，使試劑空白吸光度降低；另外，蛋白質多肽鏈中 的精氨酸、組氨酸、賴氨酸和色氨酸殘基，離解生成帶- NH3+基團，與染料陰 離子的羧基和酚基借靜電吸引而結合成紅色蛋白燃料復合物，其 540nm 處吸光度大小與蛋白質濃度呈比例。 628nm :1.溴甲酚綠法測血清白蛋白：在 PH4.2 的緩沖液中，白蛋白

3、分子帶正電荷，與 帶負電荷的溴甲酚綠（BCG）生成藍綠色復合物，在波長 628nm 處有吸收峰。 復合物的吸光度與白蛋白濃度成正比。 603nm :1.溴甲酚紫法（BCP）測血清白蛋白：BCP 溶于 PH5.2 的醋酸緩沖液中，呈黃 色。當它與白蛋白結合后轉變?yōu)榫G色的符合物，在波長603 出有最大吸收峰。 650nm :1.磷鎢酸法測黏蛋白：以 0.6mol/L 過氯酸沉淀血清中蛋白質時，黏蛋白不被沉 淀，仍存留在濾液中，再加磷鎢酸使黏蛋白沉淀，然后以酚試劑測定沉淀物中蛋 白質的含量實用標準文案精彩文檔2.米吐爾直接顯色法測血清無機磷：利用無機磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應生 成磷鉬酸銨復合物，用

4、還原劑對甲氨基酚硫酸鹽（米吐爾）還原生成鉬藍。在試 劑中加入吐溫一 80 以抑制蛋白質的干擾。 604nm :1.鄰苯三酚紅鉬絡合顯色法測腦脊液總蛋白：鄰苯三酚紅與鉬酸絡合形成紅色復合物（吸收峰 475nm ）。該復合物在酸性條件下與蛋白質形成復合體，其吸收峰移至 604nm。用比色法求蛋白質含量。 530nm :1比濁法測腦脊液蛋白：腦脊液中蛋白質與磺基水楊酸-硫酸鈉試劑作用產生 沉淀，所形成的濁度在 530nm 處進行吸光度測定，與同樣處理的標準液比較測 得蛋白含量。 415nm :1親和層析法測 HbAlc :用于分離糖化與非糖化 Hb 的親和層析凝膠柱，是交 聯(lián)間-氨基苯硼酸的瓊脂糖珠

5、。硼酸與結合在 Hb 分子上葡萄糖的 順位二醇基 反應，形成可逆的五環(huán)化合物，致使樣品中的糖化 Hb 選擇性地結合在柱上，而 非糖化 Hb 則被洗脫。然后用山梨醇解離五環(huán)化合物以洗脫糖化 Hb，在 415nm 分別測定解析液的吸實用標準文案精彩文檔光度，計算糖化 Hb 的百分率。 550nm :1.糖化血清蛋白測定：血清葡萄糖能與白蛋白及其他血清蛋白分子N 末端的氨基發(fā)生非酶促糖化反應，形成高分子酮胺結構。此酮胺結構能在堿性環(huán)境中與硝 基四氮唑藍（NBT）發(fā)生還原反應，生成甲？，以 1 脫氧一 1 嗎啉果糖（DMF ） 為標準參照物，在 550nm 處進行比色。 340nm :1.血清前白蛋白

6、測定：血清中的 PA 與抗 PA 抗體在液相中反應生成抗原抗體復合物，使反應液呈現(xiàn)濁度。當一定量抗體存在時，濁度與血清中PA 的含量呈正比，利用 340nm 處的散射比濁或投射比濁技術，與同樣處理的PA 標準比較，求得樣品種 PA 含量2.尿微量白蛋白測定：尿液中的白蛋白與抗人白蛋白特異性抗體在緩沖液中反 應生成抗原一抗體復合物，產生濁度，與尿中白蛋白濃度呈正比，利用透射比濁 法測定340nm 處吸光度，與同樣處理的標準品制備的標準曲線比較，求得尿液 中的白蛋白濃度。實用標準文案精彩文檔3.己糖激酶法測血清葡萄糖：在己糖激酶（HK）催化下，Glu 和 ATP 發(fā)生磷酸 化反應，生成葡萄糖6 磷

7、酸（G-6-P ）與 ADP。前者在葡萄糖6 磷酸脫 氫酶（G 6 PD）催化下脫氫，生成 6 磷酸葡萄糖醛酸（6 PG）,同時使 NADP 還原成 NADPH。反應式如下：葡萄糖 +ATP HK G6P+ ADPG6P + NADP G6PD 6PG + NADPH + H+NADPH 的生成速率與葡萄糖濃度呈正比。NADPH 在波長 340nm 有吸收峰，檢測吸光度升高速率，計算血清葡萄糖濃度。4. 葡萄糖脫氫酶法測血清葡萄糖：葡萄糖脫氫酶（GDH ）催化葡萄糖脫氫，氧 化生成葡萄糖酸（D 葡萄糖酸& 內酯）。B D 葡萄糖+NAD+ GDH D 葡萄糖酸內酯+NADH向反應液中加

8、入變旋酶可縮短反應達平衡時間，反應過程中NADH 生成量與葡萄糖濃度成正比關系。5. 血漿乳酸測定：在 NAD 存在下，乳酸脫氫酶催化乳酸氧化成丙酮酸， 同時生成 NADH :L 乳酸 + NAD+ LDH 丙酮酸 + NADH + H+在 PH9.8 時，平衡偏向乳酸氧化成丙酮酸。加入肼或氨基脲與丙酮酸生成復合 物，使丙酮酸不斷從反應體系中移去， 進一步促進反應向右移動，從而驅動反應 的完成。分光光度計波長 340nm，監(jiān)測吸光度的升高速率，計算乳酸含量。6. 全血乳酸測定：在 NAD+存在下，LDH 催化乳酸，氧化成丙酮酸。加入硫酸實用標準文案精彩文檔肼捕獲產物丙酮酸，并促進反應完成。反應

9、完成后生成的NADH 與乳酸為等摩爾關系，在 340nm 下測定 NADH 的生成量，計算乳酸的含量。7.血漿丙酮酸測定：乳酸脫氫酶催化丙酮酸還原成乳酸，反應如下。丙酮酸 + NADH + H+ LDH L 乳酸 + NAD+分光光度計波長 340nm，監(jiān)測 NADH 吸光度下降速率，計算樣品中丙酮酸濃 度。本法適用于各種任選式自動分析儀。8.全血丙酮酸測定： 原理同血漿丙酮酸測定，PH7.5 條件下利于上述反應（生成乳酸方向）9.血清（B 羥丁酸）B HB 測定：在有 NAD 存在時，B 羥丁酸在 B 羥丁 酸脫氫酶（B HBDH ）催化下，生成乙酰乙酸（AcAc ）和 NADH。在波長 3

10、40nm 處，監(jiān)測反應中吸光度的上升速率，可以計算血清中 B 羥丁酸的濃度。B HB + NAD B-HBDH AcAc + NADH + H+10. 鉀的酶法測定：磷酸烯醇丙酮酸（PEP）與二磷酸腺苷（ADP ）在鉀依賴性 丙酮酸激酶（PK）催化下，生成丙酮酸和三磷酸腺苷（ATP）。再在乳酸脫氫酶 催化下，所生成的丙酮酸和 NADH 反應，生成乳酸和 NAD。反應中 NADH 的 消耗量與樣品種鉀離子濃度呈正比。因此，在 340nm 處監(jiān)測吸光度下降速率， 可以計算鉀離子含量。反應式如下：實用標準文案精彩文檔PEP + ADP K+, PK 丙酮酸 + ATP丙酮酸 + NADH + H+

11、LDH 孚 L 酸 + NAD+11. 酶法測定血漿（血清）碳酸氫根及總二氧化碳：血漿（清）中的碳酸氫根在 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反應， 生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶（MDH ）催化下，生成蘋果酸， 同時 NADH被氧化成 NAD+。在分光光度計 340nm 處，吸光度下降速率與樣 品中 HCO3-含量成正比。反應式如下。磷酸烯醇式丙酮酸 + HCO3- PEPC 草酰乙酸+磷酸草酰乙酸 + NADH + H+ MDH 蘋果酸 + NAD+12. 紫外分光光度法測血清無機磷：血清中無機磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應生 成的磷鉬酸銨復合物，

12、直接在 340nm 或 325nm 波長處測定吸光度。13. 速率法測定血清 ALT :在 ALT 速率法測定中，酶偶聯(lián)反應式為：L-丙氨酸+a-酮戊二酸一 ALT丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸 +NADH+H+ LDH L-孚 L 酸 +NAD+上述偶聯(lián)反應中，NADH 的氧化速率與標本中酶活性成正比，可在 340nm 波 長處檢測吸光度下降速率（-K/min ），計算出 ALT 的活力單位。 600nm :實用標準文案精彩文檔1.染料結合法測尿微量白蛋白：將尿標本實現(xiàn)用Sephadex G-50 凝膠過濾，除去尿中色素及其他干擾成分。將流出物加 BPB 染料，使之與白蛋白結合顯色, 經與同樣顯色

13、的白蛋白標準液比較，可求得尿中白蛋白含量。2.甲基麝香草酚蘭比色法測血清鎂：血清中鎂、鈣離子在堿性溶液中能與甲基 麝香草酚蘭染料結合，生成藍紫色的復合物，加入EGTA （乙二醇雙-N,N,N,N-四乙酸，簡稱 EGTA）可掩蓋鈣離子的干擾。 505nm :1.葡萄糖氧化酶法測血清葡萄糖：葡萄糖氧化酶（GOD ）催化葡萄糖氧化成葡 萄糖酸（D -葡萄糖酸&內酯），并產生過氧化氫：Glu + 2H2O + 02 GOD 葡萄糖酸 + 2H2O2在色原性氧受體（如聯(lián)大茴香胺、4-氨基安替比林偶氮酚）的存在下，過氧化 物酶催化過氧化氫，氧化色原物質，生成有色化合物。于505nm 處比色即可測的

14、葡萄糖濃度。 405nm :1鈉的酶法測定：鄰硝基酚-B-D-半乳糖苷（ONPG ）在鈉依賴性 B-半乳糖苷 酶催化下生成鄰-硝基酚和半乳糖。鄰-硝基酚的生成量和樣品中鈉離子濃度呈 正比。鄰-硝實用標準文案精彩文檔基酚在堿性環(huán)境中呈黃色，可在 405nm 波長處監(jiān)測吸光度的升高 速度，計算鈉的濃度。 460nm :1.硫氰酸汞比色法測血清氯化物：標本中的氯離子與硫氰酸汞反應，生成極難解離的氯化汞，并釋放出相應當量的硫氰酸離子。后者與試劑中鐵離子結合生成 色澤很深的橙紅色硫氰酸鐵，吸收峰在 460nm，色澤強度與氯化物的含量成正 比。Hg （ SCN）2 2CI - HgCI2 + 2SCN-3

15、CN- + Fe3+ Fe（ SCN）3 （橙紅色） 610 nm甲基麝香草酚蘭比色法測血清總鈣：血清中鈣離子在堿性溶液中與甲基麝香草酚 蘭結合，聲稱藍色的絡合物。加入適量的 8-羥基喹啉，可消除鎂離子對測定的 干擾，與同樣處理的鈣標準液進行比較，以求得血清總鈣的含量。 575nm鄰-甲酚酞絡合酮比色法測血清總鈣： 鄰-甲酚絡合酮是金屬絡合指示劑，同時 也是酸堿指示劑，在堿性溶液中與鈣及鎂螯合，聲稱紫紅色螯合物。作鈣測定時， 在試劑中加入 8-羥基喹啉以消除標本中鎂離子的干擾。實用標準文案精彩文檔 640nm硫酸亞鐵磷鉬藍比色法：用三氯醋酸沉淀蛋白，向無蛋白濾液中加入鉬酸銨試劑， 與無機磷結合

16、生成磷鉬酸銨，在以硫酸亞鐵為還原劑，還原成藍色化合物（鉬藍）， 進行比色測定。 510 nmCalmagite 染料比色法測定血清鎂：血清中鎂在堿性條件下與 Calmagite 染料 生成紫紅色絡合物，顏色的深淺與鎂的濃度成正比。 溶液中的 EGTA 可消除鈣的 干擾，使用表面活性劑可使蛋白膠體穩(wěn)定，不必去除血清中蛋白質而直接測定鎂。 562nm血清鐵和總鐵結合力測定：與轉鐵蛋白結合的血清鐵在酸性介質中從轉鐵蛋白中 解離出來，再被還原劑還原成二價鐵，后者與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在 562nm 處有吸收峰，可作比色測定。直接測定法應糾正血清本身的色度，故應 設血清空白?？傝F結合力（TIBC）是指血清中轉鐵蛋白能與鐵結合的總量。將過量鐵標準液 加到血清中，使之與未帶鐵的轉鐵蛋白結合，多余的鐵被輕質碳酸