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文檔簡(jiǎn)介
1、植物組織中可溶性糖與淀粉的測(cè)定一、意酮法測(cè)定可溶性糖【儀器與用具】分光光度計(jì);電爐;鋁鍋;20ml刻度試管;刻度吸管5ml1支,1ml2支;記號(hào)筆;吸水紙適量?!驹噭? .慈酮乙酸乙酯試劑:取分析2酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,貯于棕色瓶中,在黑暗中可保存數(shù)星期,如有結(jié)晶析出,可微熱溶解。2 .濃硫酸(比重)?!痉椒ā? .標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取20ml刻度試管11支,從010分別編號(hào),按表24-1加入溶液和水。表1各試管加溶液和水的量管號(hào)012345678910100pg/ml蔗糖液(ml)0水(ml)蔗糖量(Hg)020406080100然后按順序向試管內(nèi)加入1ml9%茶酚溶液,搖勻,再?gòu)墓?/p>
2、液正面快速加入5ml濃硫酸,搖勻。比色液總體積為8ml,在恒溫下放置30min,顯色。然后以空白為參比,在485nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定,以糖含量為橫坐標(biāo),光密為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出標(biāo)準(zhǔn)直線方程。按表1加入標(biāo)準(zhǔn)的蔗糖溶液,然后按順序向試管中加入慈酮乙酸乙酯試劑和5ml濃硫酸,充分振蕩,立即將試管放入沸水浴中,逐管均準(zhǔn)確保溫1min,取出后自然冷卻至室溫,以空白作參比,在630nm波長(zhǎng)下測(cè)其光密度,以光密度為縱坐標(biāo),以糖含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程。2 .可溶性糖的提取取新鮮植物葉片,擦凈表面污物,剪碎混勻,稱取0.30g,共3份,或干材料。分別放入3支刻度試管中,加入510m
3、l蒸儲(chǔ)水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液過濾入25ml容量瓶中,反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)ㄈ葜量潭取? .顯色測(cè)定吸取樣品提取液于20ml刻度試管中(重復(fù)2次),加蒸儲(chǔ)水,以下步驟與標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定相同,測(cè)定樣品的光密度。4 .計(jì)算可溶性糖的含量可溶性糖含量(mg/g尸W103式中C標(biāo)準(zhǔn)方程求得糖量(pg);a V n W吸取樣品液體積(ml);提取液量(ml);-稀釋倍數(shù);組織重量(g)四、淀粉含量的測(cè)定【儀器與用具】電子天平;容量瓶:100mlX4,50mlx2;漏斗;小試管若干支;電爐;刻度吸管X1,X3,5mlX4;分光光度計(jì);記號(hào)筆?!驹噭浚?)濃硫酸(比重);(
4、2) LHCQ;(3) 2嫄酮試劑:同意酮法(或9豚酚,同方法一);(4)淀粉標(biāo)準(zhǔn)液:準(zhǔn)確稱取100mgM淀粉,放入100ml容量瓶中,加6070ml熱蒸儲(chǔ)水,放入沸水浴中煮沸,冷卻后加蒸儲(chǔ)水稀釋至刻度,則每ml含淀粉1mg吸取此液,加蒸儲(chǔ)水稀釋至50ml,即為每ml含淀粉100wg的標(biāo)準(zhǔn)液?!痉椒ā?.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取小試管11支從010編號(hào),按表2加入溶液和蒸儲(chǔ)水以下步驟按苯酚法或慈酮法均可,繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表2各試管加入標(biāo)準(zhǔn)液和蒸儲(chǔ)水量管號(hào)012345678910淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(ml)0蒸儲(chǔ)水(ml)0淀粉含量(mg»040801201602002.樣品提取將提取可溶性糖以后的殘
5、渣,移入50ml容量瓶中,力口20ml熱蒸儲(chǔ)水,放入沸水浴中煮沸15min,再加入L高氯酸2ml提取15min,冷卻后,混勻,用濾紙過濾,并用蒸儲(chǔ)水定容(或以2500r/min離心10min)。3.測(cè)定可采用苯酚法或慈酮顯色法測(cè)定按下式計(jì)算淀粉的含量。淀粉水解時(shí),在單糖殘基上加了1分子水,因而計(jì)算時(shí)所得的糖量乘以才為扣除加入水量后的實(shí)際淀粉含量。淀粉含量(%c V a_ =W 106100式中C標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的淀粉含量(wg);V提取液總量(ml);a一顯色時(shí)取液量(ml);W-樣品重(g)。注:淀粉水解完全度試驗(yàn)樣品測(cè)定中可同時(shí)作1份用于淀粉水解完全度檢驗(yàn)的樣品,在酸解過濾后,將其殘?jiān)由?ml
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