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文檔簡介

1、淺談工藝控制的復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌缺血的影響 作者:黃琳,林青,肖曉麗,方泰惠 【摘要】 目的控制工藝條件制備了有效成分含量不同的復(fù)方丹參片,觀察其對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌缺血的影響。方法結(jié)扎麻醉犬冠脈復(fù)制心肌缺血模型。觀察給藥后st段偏移總和(-st)、st段抬高2mv以上的個(gè)數(shù)(n-st)和乳酸脫氫酶(ldh)、磷酸肌酸激酶(ck)的變化。通過ttc染色,觀察心臟梗塞范圍。結(jié)果工藝a、b、c組均可顯著減少冠脈結(jié)扎所致的-st抬高和n-st增加,工藝a組和工藝b組可減少血清中l(wèi)dh和ck的釋放,縮小心肌梗塞范圍。結(jié)論 復(fù)方丹參片能明顯減輕心肌缺血程度。工藝參數(shù)的調(diào)整影響復(fù)方丹參

2、片有效成分的含量,有效成分含量越高持續(xù)作用時(shí)間越長。 【關(guān)鍵詞】 復(fù)方丹參片; 麻醉犬; 心肌缺血 復(fù)方丹參方是中國藥典方, 主要由丹參、三七、冰片3味藥組成。其中丹參為君,三七為臣,冰片為佐使藥,具有活血化瘀、理氣止痛的功能,用于氣滯血瘀所致的胸痹,癥見胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見上述證候者。本文采用麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌缺血的動(dòng)物模型,研究工藝相同,調(diào)整工藝參數(shù)進(jìn)行制備的復(fù)方丹參片(有效成分含量有差異)抗心肌缺血的作用效果。 1 材料與儀器 1.1 藥物與試劑工藝a:淺褐色粉末,實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成所需濃度。工藝b:棕褐色粉末,實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成所需濃度。工藝c:淺褐色粉末,實(shí)驗(yàn)時(shí)用

3、蒸餾水配制成所需濃度。工藝a組復(fù)方丹參片:8090下提取、濃縮、干燥,加熱時(shí)間總計(jì)65 h(72 h以內(nèi)),含丹參酮?a 1.08 mg/g,丹酚酸b 21.25 mg/g;工藝b組復(fù)方丹參片:7080下提取、濃縮、干燥,加熱時(shí)間總計(jì)30 h(36 h以內(nèi)),含丹參酮?a 1.76 mg/g,丹酚酸b 34.83 mg/g;工藝c組復(fù)方丹參片:8090下提取、濃縮、干燥,加熱時(shí)間總計(jì)80 h,含丹參酮?a 0.84 mg/g,丹酚酸b 13.34 mg/g。所有供試品藥粉,每克相當(dāng)于丹參原生藥0.95 g,三七生藥0.3 g。為實(shí)驗(yàn)統(tǒng)一給藥劑量,稀釋為人用量4.25 g/d,相當(dāng)于原生藥5.3

4、2 g/d,由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供,丹參批號(hào)0601002、三七粉批號(hào)c6c001、冰片批號(hào)0604007。 1.2 動(dòng)物雜種犬,體質(zhì)量710 kg,雌雄兼用,均由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心收購自市郊的雜種犬,試驗(yàn)前在該中心馴養(yǎng),經(jīng)檢疫及驅(qū)蟲后,用于該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。 1.3 儀器rm-6000八道生理記錄儀及其附件,日本nihon kohden公司產(chǎn)品;dh140人工呼吸器,浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠產(chǎn)品;bt01-100型恒流泵,保定蘭格恒流泵有限公司產(chǎn)品;日立7020全自動(dòng)生化分析儀,蘇州日立電器有限公司產(chǎn)品。 2 方法1 2.1 實(shí)驗(yàn)分組與劑量取雜種犬25只,隨機(jī)分為5組,每組5只動(dòng)

5、物, 雌雄兼用。分別為:假手術(shù)組(給予等容積蒸餾水);蒸餾水組(給予等容積蒸餾水);工藝a組(0.12 g生藥/kg);工藝b組(0.12 g生藥/kg);工藝c組(0.12 g生藥/kg)。將各組動(dòng)物所用藥物溶于蒸餾水中,給藥容積為1 ml/ kg。采用組間t檢驗(yàn)法與蒸餾水組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。 2.2 實(shí)驗(yàn)過程試驗(yàn)犬由前肢小隱靜脈用3戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉后,背位固定于手術(shù)臺(tái)上。將針狀電極插入犬四肢皮下,記錄心電圖(ecg)。分離氣管并插入氣管插管。分離左側(cè)股靜脈插入靜脈插管,緩慢恒速輸入蒸餾水(約1 ml/min);于左側(cè)第四、五肋間開胸,暴露心臟,并接人工呼吸機(jī)。打開心包膜,縫

6、于胸壁,做成荷包搖籃。用0號(hào)絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支中下1/3處,假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。于梗塞區(qū)附近12個(gè)標(biāo)測點(diǎn)縫置心外膜電圖電極,并在遠(yuǎn)離梗塞區(qū)選1對(duì)照點(diǎn),手持絕緣金屬點(diǎn)狀電極按標(biāo)測點(diǎn)順序進(jìn)行標(biāo)測,經(jīng)傳感器(jb-642g)、放大器(ab-621g),用八道生理記錄儀記錄心外膜電圖(eecg)(定標(biāo):1 mm=1 mv)。結(jié)扎15 min后經(jīng)十二指腸給藥,記錄結(jié)扎前、結(jié)扎后15 min和給藥后30,45,60,90,120,150,180 min的eecg。統(tǒng)計(jì)各標(biāo)測點(diǎn)eecg的st段偏移-st,以及st段抬高2mv以上的個(gè)數(shù)n-st。各組分別于結(jié)扎前,結(jié)扎15 min,給藥60 min后股

7、靜脈取血,用試劑盒測定血清ck、ldh值。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,立即取出心臟,用蒸餾水洗去血液后,稱取全心重和心室重量,并把心室橫切成5片,置于37 1ttc溶液中染色15 min,剪去各心肌片被染色的非梗塞區(qū),把未染色的梗塞區(qū)心肌稱重,除以全心重或心室重分別得到梗塞范圍占全心重或占心室重的百分率。 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以s表示。所有數(shù)據(jù)采用student-t檢驗(yàn)。3 結(jié)果 3.1 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞-st的影響復(fù)方丹參片工藝a、工藝b、工藝c組可降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞麻醉犬-st,部分時(shí)間點(diǎn)與蒸餾水組比較差異顯著(p0.05或p0.01),其中工藝b組能持續(xù)至給藥后120 min。結(jié)果見

8、表1。表1 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞-st的影響(略) 3.2 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞n-st的影響復(fù)方丹參片工藝a、工藝b、工藝c組可降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞麻醉犬n-st,部分時(shí)間點(diǎn)與蒸餾水組比較差異顯著(p0.05或p0.01)。結(jié)果見表2。表2 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞n-st的影響(略) 3.3 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞的血清ck、ldh的影響復(fù)方丹參片工藝a、工藝b組可減少麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞后血清中ck,ldh的釋放,與蒸餾水組比較差異顯著(p0.05或p0.01)。結(jié)果見表3。表3 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞血清ck、ld

9、h的影響(略) 3.4 對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞范圍的影響復(fù)方丹參片工藝a、工藝b組可減少麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞范圍,與蒸餾水組比較差異顯著(p0.05或p0.01)。結(jié)果見表4。表4 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞范圍的影響(略) 4 討論 復(fù)方丹參片的有效成分主要分為水溶性和脂溶性兩部分,分別以丹酚酸b、丹參酮?a為代表,均為對(duì)熱敏感的化合物。工藝a、b、c組所用復(fù)方丹參片為不同工藝參數(shù)下制備,主要是控制提取、濃縮、干燥等加熱步驟的時(shí)間。加熱時(shí)間短、溫度低,所得丹參酮?a、丹酚酸b為代表的有效成分含量較高。其中工藝a組復(fù)方丹參片含丹參酮?a 1.08 mg/g;丹酚酸b 2

10、1.25 mg/g,工藝b組含丹參酮?a 1.76 mg/g、丹酚酸b 34.83 mg/g;工藝c組含丹參酮?a 0.84 mg/g、丹酚酸b 13.34 mg/g。 心外膜電圖st段電壓變化幅度的改變(-st和n-st)是反映心肌缺血損傷程度的可靠指標(biāo),縮小心電圖心肌缺血程度和范圍是評(píng)價(jià)抗心肌缺血藥物的主要治療指標(biāo)。較多臨床及基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn),ldh、ck既是評(píng)價(jià)心肌缺血損害程度較客觀的指標(biāo),也是判斷細(xì)胞從可逆到不可逆的損傷的一個(gè)重要標(biāo)志。在定量組織學(xué)方法測定心肌梗塞范圍的研究中,多采用梗塞區(qū)占心室或全心百分比來反映梗塞范圍的大小。ttc染色法能較明顯地區(qū)分心肌梗塞區(qū)域2。復(fù)方丹參片對(duì)eecg(-st、 n-st)、ldh、ck、心肌梗塞范圍等指標(biāo)的改善作用表明其對(duì)麻醉犬冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎所致急性心肌缺血具有保護(hù)作用,且有效成分含量越高持續(xù)作用時(shí)間越長。 對(duì)比3種工藝的復(fù)方丹參片,均有較好的抗心肌缺血作用,其效應(yīng)與劑量有關(guān),即復(fù)方丹參片水溶性和脂溶性有效成分含量越高,抗心肌缺血的作用越好。經(jīng)測定考察,市售各廠家的復(fù)方丹參片有效成分含量波動(dòng)較大,對(duì)藥效作用必然存在影響。大部分市售復(fù)方丹參片,其丹酚酸b、丹參酮?a為代表的水溶性成分和脂溶性成分含量接近工藝c,少數(shù)接近工藝a,更少數(shù)接近工藝b。因此,在處方固

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