分子生物學(xué)簡(jiǎn)答題整理

1、1闡述操縱子（operon）學(xué)說(shuō):見(jiàn)課本2、乳糖操縱子的作用機(jī)制？/簡(jiǎn)述乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)及其正、負(fù)調(diào)控機(jī)制答：A、乳糖操縱子的組成：大腸桿菌乳糖操縱子含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖甘酶、透酶和半乳糖甘乙酰轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O,一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因I。B、阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：沒(méi)有乳糖存在時(shí)，I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時(shí)，乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)，不能結(jié)合于操縱序列，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開(kāi)放合成分解乳糖的三種酶。所以，乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控。C、CAP的正性調(diào)節(jié)：在啟動(dòng)子上游有C

2、AP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)，cAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使CAP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。D、協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約。3、基因調(diào)控的水平有哪些？基因調(diào)控的意義？答：a、DNA水平的調(diào)控。b、轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控。c、轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控。d、翻譯水平的調(diào)控。e、細(xì)胞質(zhì)與基因調(diào)控。意義：適應(yīng)物理，化學(xué)等環(huán)境因素變化，調(diào)節(jié)

3、代謝，維持細(xì)胞生長(zhǎng)與分裂。4、簡(jiǎn)述乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)及其正負(fù)調(diào)控機(jī)制。答：結(jié)構(gòu)：A、Y和Z,以及啟動(dòng)子、控制子和阻遏子。正調(diào)控機(jī)制：CAP分解代謝產(chǎn)物激活蛋白質(zhì)，直接作用于操縱子區(qū)上與cAMP結(jié)合形成CAP-cAMP復(fù)合物，轉(zhuǎn)錄進(jìn)行。負(fù)調(diào)控機(jī)制：a、無(wú)誘導(dǎo)物時(shí)結(jié)才基因不轉(zhuǎn)錄。b、有誘導(dǎo)物時(shí)與阻遏基因相結(jié)合，形成無(wú)活性阻遏物，RNA聚合酶可與啟動(dòng)子區(qū)相結(jié)合，起始基因轉(zhuǎn)錄。5、簡(jiǎn)述Trp操縱子的結(jié)構(gòu)及其調(diào)控機(jī)制。答：Trp操縱子由5個(gè)結(jié)構(gòu)基因TrpE、TrpD、TrpC、TrpB、TrpA組成一個(gè)多順因子的基因簇，在5'端是啟動(dòng)子、操縱子、前導(dǎo)順序和弱化子區(qū)域。機(jī)制：a、輔阻蛋白參與的負(fù)調(diào)控

4、阻遏調(diào)節(jié)。/、trp誘導(dǎo)物含量高，與游離的輔阻遏蛋白相結(jié)合，形成有活性阻遏物，與操縱子區(qū)DNA緊密結(jié)合，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。/、trp誘導(dǎo)物含量低，不能與輔阻遏物結(jié)合，輔阻遏物從O區(qū)上解離，trp操縱子阻遏轉(zhuǎn)錄進(jìn)行。b、弱化作用。/、trp濃度高時(shí)，2-3不配對(duì)，3、4區(qū)自由配對(duì)形成莖環(huán)狀終止結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停止。/、trp濃度低時(shí)，2,3配對(duì)，4區(qū)片段無(wú)配對(duì)，結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。6、細(xì)菌的trp操縱子為什么除需要阻遏體系外還需要弱化系統(tǒng)。答：細(xì)菌的trp操縱子通過(guò)弱化作用彌補(bǔ)阻遏作用的不足，因?yàn)樽瓒糇饔弥荒苁罐D(zhuǎn)錄不起始，而對(duì)于已經(jīng)起始的轉(zhuǎn)錄，只能通過(guò)弱化作用使之中途停頓下來(lái)，阻遏作用的信號(hào)是細(xì)胞內(nèi)trp的多少，弱

5、化作用的信號(hào)是細(xì)胞內(nèi)載有trp的tRNA的多少，兩種作用相輔相成，體現(xiàn)周密的調(diào)控作用。7、簡(jiǎn)述原核生物轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的機(jī)制。答：a、mRNA自身結(jié)構(gòu)元件對(duì)翻譯起始的調(diào)節(jié)。b、mRNA穩(wěn)定性對(duì)轉(zhuǎn)錄水平的影響。c、調(diào)節(jié)蛋白的調(diào)控作用。d、反義RNA的調(diào)節(jié)作用。e、稀有密碼子對(duì)翻譯的影響。f、重疊基因?qū)Ψg的影響。g、翻譯的阻遏。h、魔斑核甘酸水平對(duì)翻譯的影響。8、簡(jiǎn)要概括真核生物基因表達(dá)調(diào)控的7個(gè)層次答：a、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控，包括基因的開(kāi)與關(guān)和轉(zhuǎn)錄效率的高與低。b、DNA水平上的表達(dá)調(diào)控，包括基因丟失、擴(kuò)增、交換、重排、DNA甲基化。c、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控，順式作用元件與特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合影響轉(zhuǎn)錄，反式作用因

6、子能識(shí)別結(jié)合于順式作用元件上，參與調(diào)控。d、反式作用因子的DNA識(shí)別域或結(jié)合域。e、蛋白質(zhì)修飾、磷酸化和去磷酸化。f、轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控。g、翻譯水平的調(diào)控mRNA的“掃描模式”與蛋白質(zhì)合成起始mRNA5'端帽子結(jié)構(gòu)及polyA尾巴，mRNA穩(wěn)定性與基因表達(dá)調(diào)控，蛋白質(zhì)的修飾。9、真核基因表達(dá)調(diào)控與原核生物有什么異同點(diǎn)。答：同：a、都有轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控和轉(zhuǎn)錄水平后調(diào)控，并且都以轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控為重要。b、在結(jié)構(gòu)基因的上下游都存在著許多特異的調(diào)控成分，并依靠特異蛋白因子與這些調(diào)控成分的結(jié)合與否，調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄。異：a、真核基因表達(dá)調(diào)控環(huán)節(jié)多，位點(diǎn)多，區(qū)域大，位置多樣化。b、真核基因的轉(zhuǎn)錄與染

7、色質(zhì)的結(jié)構(gòu)變化相關(guān)。c、無(wú)操縱子和衰減子。d、受環(huán)境影響小。e以正性調(diào)控為主。f、調(diào)控的基因組很大，而原核基因組小。10、簡(jiǎn)述DNA水平對(duì)真核基因表達(dá)的調(diào)控。答:DNA水平的調(diào)控是真核生物發(fā)育調(diào)控的一種形式，包括基因丟失，擴(kuò)增，重排和移位等方式，通過(guò)這些方式可以消除或變換某些基因并改變它們的活性。主要有：a、染色質(zhì)狀態(tài)對(duì)基因表達(dá)調(diào)控。b、修飾作用（乙?；谆┡c染色質(zhì)狀態(tài)的關(guān)系。c、基因丟失，擴(kuò)增，重排，交換。11、真核基因順式作用元件及各自的特點(diǎn)。答：a、啟動(dòng)子，位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)附近且為轉(zhuǎn)錄起始所必需的DNA序列。/、核心啟動(dòng)子，指保證RNA聚合酶2轉(zhuǎn)錄正常起始所必需的，最少的DNA序列，包

8、括轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)及位點(diǎn)上游-30-負(fù)25bp處的TATA區(qū)。/、上游啟動(dòng)子元件，包括通常位于-70bp附近的CAAT區(qū)和GC區(qū)等能通過(guò)TF2D復(fù)合物調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄起始的頻率，提高轉(zhuǎn)錄效率。b、增強(qiáng)子，指能使與之連鎖的基因轉(zhuǎn)錄頻率明顯增加的DNA序列，位于離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)較遠(yuǎn)位置上，具有參與激活和增強(qiáng)起始功能的序列元件。c、絕緣子，負(fù)調(diào)控作用元件（與增強(qiáng)子作用相反）。12、反式作用因子的DNA結(jié)合域有哪幾種？各自的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)？答：a、螺旋-轉(zhuǎn)折-螺旋結(jié)構(gòu)（HTH）。b、鋅指結(jié)構(gòu)。c、堿性-亮氨酸拉鏈。d、堿性-螺旋-環(huán)-螺旋，（BHLH結(jié)構(gòu)）。e同源域蛋白。13、真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的主要模式答：?jiǎn)?dòng)子、轉(zhuǎn)錄模板

9、、RNA聚合酶2、RNA聚合酶2基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄所需的蛋白質(zhì)因子、增強(qiáng)子及絕緣子對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響、反式作用因子對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響。14、簡(jiǎn)述DNA加工水平對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控答：RNA加工水平：a、rRNA加工成熟，包括分子內(nèi)的切割和化學(xué)修飾（主要是核糖甲基化）。b、mRNA加工成熟，包括mRNA5'末端加“帽子”，3'端加上polyA尾巴。c、tRNA的3'末端CCA-OH,5'端加上甲基鳥(niǎo)甘酸。翻譯水平：a、真核生物mRNA“掃描模式”與蛋白質(zhì)合成的起始。b、mRNA的穩(wěn)定性與基因表達(dá)的調(diào)控。c、mRNA5'端帽子結(jié)構(gòu)的識(shí)別與蛋白質(zhì)的合成。d、可溶性蛋白因子的修飾與翻譯起

10、始調(diào)控15、生物體內(nèi)主要有幾種RNA?mRNA:編碼特定蛋白序列rRNA:直接參與核糖體中蛋白質(zhì)的合成tRNA:能特異性解讀mRNA中的遺傳信息，將其轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的氨基酸后加入多肽鏈中SnRNA:小核RNA,是真核生物轉(zhuǎn)錄后加工過(guò)程中RNA剪接體的主要成分.HnRNA:指導(dǎo)RNA,核酶RNA16、轉(zhuǎn)錄包括哪幾個(gè)基本過(guò)程？.模板識(shí)別：RNA聚合酶與啟動(dòng)子DNA雙鏈互相作用與之相結(jié)合的過(guò)程.轉(zhuǎn)錄起始：RNA鏈上第一個(gè)核甘酸鏈的產(chǎn)生.轉(zhuǎn)錄延伸：RNA聚合酶釋放因子離開(kāi)啟動(dòng)子后，核心酶沿模板DNA鏈移動(dòng)并使新生RNA鏈不斷伸長(zhǎng).轉(zhuǎn)錄終止：RNA-DNA雜合物分離，轉(zhuǎn)錄泡瓦解，DNA恢復(fù)成雙鏈狀態(tài)，RNA

11、聚合酶和RNA鏈從模板上釋放出來(lái)17、簡(jiǎn)述真核細(xì)胞RNA聚合酶的細(xì)胞定位及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物答：見(jiàn)課本18、簡(jiǎn)述原核和真核生物啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)答：原核生物：?jiǎn)?dòng)子在兩段由5個(gè)核甘酸組成的共同序列，即位于一10bp處的TATA區(qū)（也叫pribnow區(qū)），和一35bp處的TTGACA區(qū)，他們是RNA聚合酶與啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn)，能與（7因子相互識(shí)別而具有很高的親和力真核生物：?jiǎn)?dòng)子在一30-25bp處的Hogness區(qū)，類似pribnow區(qū)，在一7080bp區(qū)有CAAT區(qū)（與一35區(qū)序列相對(duì)應(yīng)），在一110-80的GC區(qū)（GCCACACCC或GGGCGGG序歹U）19、什么是SD序列？答：原核生物起始密碼子AU

12、G上游712個(gè)核甘酸的保守區(qū)，能與16srRNA的3'端反向互補(bǔ)20、簡(jiǎn)述真核生物mRNA的結(jié)構(gòu)與原核生物mRNA的結(jié)構(gòu)的區(qū)別答：、真核生物mRNA具有前體，需要轉(zhuǎn)錄后加工成成熟RNA才能與蛋白質(zhì)合成、原核生物mRNA以多順?lè)醋有问酱嬖?，一個(gè)mRNA可編碼幾個(gè)多肽；真核生物mRNA最多只能編碼一個(gè)多肽、原核生物mRNA的5'端無(wú)帽子結(jié)構(gòu)，3'端沒(méi)有或只有較短的polyA;而真核生物mRNA的5'端存在帽子結(jié)構(gòu)，絕大多數(shù)正所謂3'端有polyA結(jié)構(gòu)、原核生物mRNA起始密碼子AUG上游有SD序列的保守區(qū)、起始密碼子原核生物的有AUG（有時(shí)GUG,UUG）,

13、真核生物只有AUG21、轉(zhuǎn)錄終止有幾種機(jī)制？各有何特點(diǎn)？答：、依賴p因子的終止：p因子是一個(gè)由6個(gè)相同亞基組成的六聚體，具有NTP酶和解螺旋酶活性，能水解各種核甘酸三磷酸，通過(guò)催化NTP的水解促使新生RNA鏈從三元轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中解離出來(lái)，從而終止轉(zhuǎn)錄、不依賴p因子的終止：沒(méi)有任何其他因子的參與，核心酶也能在某些位點(diǎn)終止轉(zhuǎn)錄，因模板DNA上存在終止轉(zhuǎn)錄的特殊信號(hào)一一終止子.終止位點(diǎn)上游一般存在一個(gè)富含GC堿基的二重對(duì)稱區(qū)，由這段DNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA容易形成發(fā)卡式結(jié)構(gòu).在終止位點(diǎn)前有一段48個(gè)A組成的序列，所以轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3'端為寡聚U,這種結(jié)構(gòu)特征的存在決定了轉(zhuǎn)錄的終止22、內(nèi)含子的分類及

14、剪接機(jī)制（含剪接信號(hào)、轉(zhuǎn)酯反應(yīng)等），各類內(nèi)含子剪接過(guò)程的異同。答：內(nèi)含子的分類：GU-AG,AU-AC,I類內(nèi)含子，II類內(nèi)含子，田類內(nèi)含子，雙內(nèi)含子，pretRNA中的內(nèi)含子。I類內(nèi)含子的剪接主要是轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，即剪接反應(yīng)實(shí)際上是發(fā)生了兩次磷酸二酯鍵的轉(zhuǎn)移；II類內(nèi)含子切除體系中，轉(zhuǎn)酯反應(yīng)無(wú)需游離鳥(niǎo)甘酸或鳥(niǎo)甘，而是由內(nèi)含子本身的靠近3'短的腺甘酸2'OH作為親核基因攻擊內(nèi)含子5'端的磷酸二酯鍵，從上游切開(kāi)RNA鏈后形成套索環(huán)結(jié)構(gòu)，再由上游外顯子的自由3'-OH作為親核基因攻擊內(nèi)含子3'端的磷酸二酯鍵，使內(nèi)含子被完全切開(kāi)，上下游兩個(gè)外顯子通過(guò)新的磷酸二酯鍵鍵

15、相連。發(fā)生了兩次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)。in類內(nèi)含子主要依靠SnRNP發(fā)生2次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，在哺乳動(dòng)物中，mRNA前體上的SnRNP是從5'向下游“掃描”懸著在分支點(diǎn)富喀噬區(qū)3'下游的第一個(gè)AG作為剪接的3'位點(diǎn)。剪接機(jī)制：組成型剪接：需要外界能量和各種酶形成復(fù)合物剪接；自我剪接：不需外源酶和能量，剪接特征由35sRNA自我催化完成；選擇性剪接：同一前體mRNA中的外顯子通過(guò)不同組合形成不同的成熟mRNA分子36.RNA編輯的種類及意答：種類：位點(diǎn)特異性脫氨基作用和引導(dǎo)DNA指導(dǎo)的尿喀噬的插入或刪除意義：1、能夠改變和補(bǔ)充遺傳信息2、增加基因產(chǎn)物的多樣性3、與生物細(xì)胞發(fā)育與分化有關(guān)4、校

16、正作用5、翻譯調(diào)控39）核糖體的組成結(jié)構(gòu)及功能答：組成結(jié)構(gòu)：由大、小兩個(gè)亞基，許多不同的核糖體蛋白質(zhì)子和核糖體RNA共同組成，有3個(gè)tRNA的結(jié)合位點(diǎn)（A、P、E位點(diǎn)）功能：、在多肽合成過(guò)程中，不同的tRNA將相應(yīng)的氨基酸帶到蛋白質(zhì)合成部位，并與mRNA進(jìn)行專一性的相互作用，以選擇對(duì)信息專一的氨基酸一tRNA、核糖體容納另一種攜帶肽鏈的tRNA,即肽酰一tRNA,并使之處于肽鏈容易生成的位置上。、核糖體小亞基負(fù)責(zé)對(duì)mRNA進(jìn)行序列特異性識(shí)別；大亞基負(fù)責(zé)攜帶氨基酸以及tRNA的功能，包括肽鍵的形成，氨基酸一tRNA,肽酰一tRNA的結(jié)合等40）蛋白質(zhì)前體的加工主要內(nèi)容答：1、N端fMet或Met

17、的切除：N端的甲硫氨酸往往在多肽合成完畢之前被切除2、二硫鍵的形成：蛋白質(zhì)的二硫鍵是蛋白質(zhì)合成后，通過(guò)兩個(gè)半胱氨酸的氧化作用生成的，密碼子中沒(méi)有胱氨酸的密碼子。3、特定氨基酸的修飾：氨基酸側(cè)鏈的修飾包括磷酸化、糖基化、甲基化、已基化、羥基化和竣基化等。4、切除新生肽鏈中的非功能片段：不少肽類激素和酶的前體都要經(jīng)過(guò)加工才能變成活性分子41）蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的主要機(jī)制答：1、翻譯一轉(zhuǎn)運(yùn)同步機(jī)制：由信號(hào)肽介導(dǎo)協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)。蛋白質(zhì)其實(shí)首先合成信號(hào)肽一一SRP與信號(hào)肽結(jié)合，翻譯暫停一一SRP與SRP受體結(jié)合，核糖體與結(jié)合，翻譯重新開(kāi)始一一信號(hào)肽進(jìn)入膜結(jié)構(gòu)一一蛋白質(zhì)過(guò)膜，信號(hào)肽被切除，翻譯繼續(xù)進(jìn)行一一蛋白質(zhì)完全過(guò)膜

18、，核糖體解離并回復(fù)翻譯起始前狀態(tài)。2、翻譯后轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制：由前導(dǎo)肽介導(dǎo)協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)，線粒體和葉綠體中的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)由外膜上的Tom受體復(fù)合蛋白識(shí)別與分子伴侶相結(jié)合形成轉(zhuǎn)運(yùn)多肽，通Tom和Tim組成的膜通道進(jìn)入內(nèi)腔一一蛋白酶水解前導(dǎo)肽。3、核定位蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制：細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)通過(guò)核孔到達(dá)細(xì)胞核（裝配）一一運(yùn)回細(xì)胞質(zhì)一一進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。如：RNA,DNA聚合酶，組蛋白，拓?fù)洚悩?gòu)酶等42）信號(hào)肽的結(jié)構(gòu)特征及功能答：結(jié)構(gòu)特征1、一般帶有1015個(gè)疏水氨基酸，位于蛋白質(zhì)的N端；2、在靠近N端有一個(gè)或數(shù)個(gè)帶正電荷的氨基酸；3、C端有一個(gè)能被信號(hào)肽識(shí)別的位點(diǎn)；4、沒(méi)有嚴(yán)格的專一性；5、信號(hào)肽可能是一種環(huán)狀結(jié)構(gòu)，而非是

19、以一種直線通過(guò)雙脂層膜；（6、在C端靠近蛋白酶切點(diǎn)處常有數(shù)個(gè)極性氨基酸，離切割位點(diǎn)最近的那個(gè)氨基酸往往帶有很短的側(cè)鏈；7、廣義上的信號(hào)肽是初生蛋白質(zhì)穿過(guò)膜必須的疏水性肽段，它位于蛋白質(zhì)各部位。）功能：1、保證蛋白質(zhì)順利轉(zhuǎn)運(yùn)；2、延伸功能；3、能和新生的分泌蛋白的信號(hào)肽相結(jié)合；4、能和位于膜上的蛋白受體相結(jié)合。44）原核與真核生物蛋白質(zhì)合成起始的差別答：1、原核生物的起始tRNA是fMettRNAfMet,真核生物是MettRNAMet<2、原核生物中30s小亞基先與mRNA模板相結(jié)合，最后與50s大亞基結(jié)合；而在真核生物中，40s小亞基首先與MettRNAfMet結(jié)合，再與模板mRNA結(jié)

20、合,最后與60s大亞基結(jié)合生成80s?mRNA?MettRNAfMet起始復(fù)合物。4、正調(diào)控和負(fù)調(diào)控的主要不同是什么？答：負(fù)調(diào)控時(shí)，調(diào)節(jié)基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物是基因活性的一種阻遏物，而在正調(diào)控時(shí)，調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是一種激活物。6、解釋為什么操縱子和啟動(dòng)子是反式隱性、順式顯性的，而編碼阻礙蛋白的基因既是反式顯性又是順式顯性。答：操縱基因和啟動(dòng)子突變只影響順式基因的表達(dá)（反式隱性的），這是因?yàn)樗鼈兪钦{(diào)控序列，僅僅調(diào)節(jié)相同DNA分子上的相鄰基因的表達(dá)。阻遏物基因編碼可以擴(kuò)散的基因產(chǎn)物，因此既能影響順式又能影響反式基因的表達(dá)。7、哪三個(gè)序列對(duì)原核生物mRNA的精確轉(zhuǎn)錄是必不可少的？答：-35（RNA聚合酶結(jié)合

21、位點(diǎn)卜-10（RNA榮合酶起始位點(diǎn)）啟動(dòng)子序列和終止子10、葡萄糖是如何影響涉及糖代謝的操縱子（葡萄糖敏感型操縱子）的表達(dá)？答：在缺乏葡萄糖時(shí)，cAMP的水平升高，CAP蛋白同每一個(gè)葡萄糖敏感操縱子中啟動(dòng)子內(nèi)的CAP位點(diǎn)結(jié)合，轉(zhuǎn)錄作用協(xié)同起始。如果有葡萄糖，cAMP的.水平下降，CAP蛋白不再結(jié)合，轉(zhuǎn)錄的速率協(xié)同下降。1、闡述原核生物的轉(zhuǎn)錄終止。（1）轉(zhuǎn)錄終止的兩種主要的機(jī)制是什么？（2）描述翻譯怎樣能調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄終止。（3）為什么在細(xì)菌轉(zhuǎn)錄終止中很少涉及到Rho因子？怎樣能阻止轉(zhuǎn)錄的終止？答：原核生物中的轉(zhuǎn)錄終止作用概要如下：（1）原核生物中兩種不同的轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制：在某一位點(diǎn)不需要其他因子協(xié)助僅

22、依賴于內(nèi)在終止子的終止機(jī)制；依賴于肋因子的終止機(jī)制。（2）翻譯可通過(guò)弱化作用調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄終止，例如發(fā)生在氨基酸生物合成基因的表達(dá)中。前導(dǎo)肽的翻譯可以調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)基因下游的轉(zhuǎn)錄。這種調(diào)節(jié)的重要性充分體現(xiàn)在氨基酸的生物合成中（例如色氨酸）。原核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄和翻譯是同時(shí)發(fā)生的，正在翻譯的核糖體就像在追趕正在轉(zhuǎn)錄的RNA聚合酶。具有所需氨酰tRNA時(shí),核糖體可將前導(dǎo)序列翻譯成前導(dǎo)肽，而在前導(dǎo)開(kāi)放讀碼框的終止密碼子處終止翻譯。新生的mRNA自由形成3-4莖環(huán)（完全配對(duì)）終止結(jié)構(gòu)，所以阻礙了DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶的前進(jìn)，結(jié)構(gòu)基因的下游轉(zhuǎn)錄終止，即發(fā)生弱化現(xiàn)象。若某種氨基酸短缺，則會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的氨酰tRNA短缺，核糖

23、體終止在前導(dǎo)可讀框中所短缺的氨基酸密碼子上。2-3莖環(huán)形成抗終止子，這一莖環(huán)不是聚合酶的終止信號(hào)，它可以防止3-4莖環(huán)的形成，使結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行下去。（3）在原核生物中、轉(zhuǎn)錄與翻譯是同時(shí)進(jìn)行的，意味著核糖體追趕著DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶。Rho因子是一個(gè)依賴于RNA的ATP水解酶，能夠在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中將在轉(zhuǎn)錄泡中的RNA-DNA雜合體分開(kāi)。因此它順著轉(zhuǎn)錄的方向（5'-3'）追趕DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶。若核糖體正好妨礙了它的前進(jìn)，則依賴于肋6因子的終止反應(yīng)不會(huì)發(fā)生。（4）最為常見(jiàn)的機(jī)制是抗終止（參見(jiàn)噬菌體遺傳學(xué)）?？菇K止于是一種能識(shí)別終止序列上游抗終止序列（例如入噬菌體的nut位

24、點(diǎn)）的蛋白質(zhì)，它幫助抗終止子所利用的底物（如入噬菌體基因表達(dá)中的Nus蛋白）與依賴DNA的RNA聚合酶的相互作用，通讀下游的終止子序列。3、區(qū)別可誘導(dǎo)和可阻遏的基因調(diào)控。答：在可誘導(dǎo)的系統(tǒng)中，操縱子只有在誘導(dǎo)物存在時(shí)才開(kāi)放，沒(méi)有誘導(dǎo)物時(shí)阻礙物結(jié)合在操縱子上阻止結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。存在誘導(dǎo)物時(shí)，它與阻遏物結(jié)合，使之變構(gòu)不再與操縱子結(jié)合，打開(kāi)操縱子。酶的誘導(dǎo)是分解途徑特有的，誘導(dǎo)物就是酶的底物或者底物的類似物。在可阻礙系統(tǒng)中操縱子被終產(chǎn)物所關(guān)閉。不存在終產(chǎn)物時(shí)，阻礙物不能結(jié)合到操縱子上，因此操縱子開(kāi)放；存在終產(chǎn)物時(shí)，它結(jié)合到阻礙物上，改變后者的構(gòu)象，使其能結(jié)合到操縱子上，關(guān)閉操縱子。酶阻礙是合成代謝的

25、特點(diǎn)。2、簡(jiǎn)述真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制？答：真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過(guò)反式作用因子、順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來(lái)完成的，主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過(guò)程。A、轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成：真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過(guò)程為：TFHD結(jié)合TATA盒；RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合TFHD-DNA復(fù)合物形成一個(gè)閉合的復(fù)合物；其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié)合形成一個(gè)開(kāi)放復(fù)合物。在這個(gè)過(guò)程中，反式作用因子的作

26、用是：促進(jìn)或抑制TFHD與TATA盒結(jié)合；促進(jìn)或抑制RNA聚合酶與TFHD-DNA復(fù)合物的結(jié)合；促進(jìn)或抑制轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成。B、反式作用因子：一般具有三個(gè)功能域（DNA識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié)合其他蛋白結(jié)合域）；能識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作用元件；對(duì)基因的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。3、轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控：反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：A.表達(dá)式調(diào)節(jié)一一反式作用因子合成出來(lái)就具有活性；B.共價(jià)修飾一一磷酸化和去磷酸化，糖基化；C.配體結(jié)合一一許多激素受體是反式作用因子；D.蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用一一蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離與形成。反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合：反式作用因子被激活后，即可識(shí)別

27、并結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)表作用。反式作用因子的作用方式一一成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、Oozingo反式作用因子的組合式調(diào)控作用：每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對(duì)基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。3、簡(jiǎn)述真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制？答：（1）、5,端加帽和3,端多聚腺甘酸化的調(diào)控意義：5,端加帽和3,端多聚腺甘酸化是保持mRNA穩(wěn)定的一個(gè)重要因素，它至少保證mRNA在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中不被降解。（2）、mRNA選擇性剪接對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的作用（3）、mRNA運(yùn)輸?shù)目刂?1、PCR的基本原理？、答：PCR是

28、在試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)，基本原理是依據(jù)細(xì)胞內(nèi)DNA半保留復(fù)制的機(jī)理，以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，人為地控制體外合成系統(tǒng)的溫度，以促使雙鏈DNA變成單鏈，單鏈DNA與人工合成的引物退火，然后耐熱DNA聚合酶以dNTP為原料使引物沿著單鏈模板延伸為雙鏈DNA。PCR全過(guò)程每一步的轉(zhuǎn)換是通過(guò)溫度的改變來(lái)控制的。需要重復(fù)進(jìn)行DNA模板解鏈、引物與模板DNA結(jié)合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即高溫變性、低溫退火、中溫延伸3個(gè)步驟構(gòu)成PCR反應(yīng)的一個(gè)循環(huán)，此循環(huán)的反復(fù)進(jìn)行，就可使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。DNA模板變性：模板雙鏈DNA?單鏈DNA,94C。退火：引物+單鏈DNA?雜交鏈，引物的Tm值。引物的延伸：溫度至70C左右，TaqDNA聚合酶以4種dNTP為原料，以目的DNA為模板，催化以引物3'末端為起點(diǎn)的5'-3'DNA鏈延伸反應(yīng)，形成新生DNA鏈。新合成的引物延伸鏈經(jīng)過(guò)變性后又可作為下一輪循環(huán)反應(yīng)的模板PCR,就是如此反復(fù)循環(huán)，使目的DNA得到高效快速擴(kuò)增。1.參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些？它們