微生物知識總結(jié)

1、微生物學(xué)實驗復(fù)習(xí)1、培養(yǎng)基的種類及用途：標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多菌種分離、鑒定、計數(shù)半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少菌種保存液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)、連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)合成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn)半合成培養(yǎng)基部分天然物質(zhì)和部分化學(xué)試劑配制而成兼有天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)目的用途加富培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)僅適合一種或一類微生物能使某種微生物的生長、繁殖比其他微生物更加迅速、逐漸淘汰其他微生物鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥劑菌種的鑒別選擇培養(yǎng)基添加(或缺少)某種化學(xué)成分菌種的分離2、培養(yǎng)基中

2、的營養(yǎng)物質(zhì)：營養(yǎng)要素含義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質(zhì)構(gòu)成生物體細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機(jī)化合物：CO2、NaHCO3；有機(jī)化合物：糖類、脂肪酸、花生餅粉、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機(jī)化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽；有機(jī)化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長因子生長必不可少的微量有機(jī)物酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等水在生物體內(nèi)含量很高，在低等生物體內(nèi)含量更高不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定 無機(jī)鹽為微生物提供除碳、氮元素以外的各種重要元素，包括某些大量元素細(xì)胞內(nèi)的組成成分，生理

3、調(diào)節(jié)物質(zhì)，某些化能自養(yǎng)菌的能源，酶的激活劑 3、培養(yǎng)基的配置原則：(1)目的要明確(根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等)，如培養(yǎng)基可由簡單的無機(jī)物組成，生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)，而分類、鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學(xué)成分的物質(zhì)。(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：各種微生物適宜生長的pH范圍不同，如細(xì)菌、放線菌和真菌的最適pH分別為：6.57.5、7.58.5和5.06.0。4、滅菌與消毒：項目概念常用方法應(yīng)用的范圍消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體上絕大多數(shù)微生物(包括病原微生物和有害微生物的營養(yǎng)細(xì)胞)煮沸消毒法：在100 煮沸5

4、6 min一般物品巴氏消毒法：7075 煮30 min或在80 煮15 min一些不耐高溫的液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等紫外線消毒法：30 W紫外燈照射30 min接種室項目概念常用方法應(yīng)用的范圍滅菌使用強(qiáng)烈的物理或化學(xué)方法使物體內(nèi)外所有的微生物永遠(yuǎn)喪失其生長繁殖能力灼燒滅菌：酒精燈火焰接種工具的滅菌干熱滅菌：160170 下滅菌12 h玻璃器皿、金屬工具的滅菌高壓蒸汽滅菌：121 條件下，滅菌1530 min培養(yǎng)基及容器滅菌5、細(xì)菌培養(yǎng)基的配制過程？答：配制培養(yǎng)液調(diào)節(jié)PH分裝包扎滅菌擱置斜面（擱置斜面的長度不超過試管總長的1/2）【問題與探究】（1）培養(yǎng)基滅菌

5、后，為什么需要冷卻到50 左右時，才能用來擱置斜面或倒平板？你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？【提示】瓊脂的凝固點(diǎn)為40 ，溫度太高易使培養(yǎng)皿破裂，低于40 ，培養(yǎng)基已凝固，倒不出，所以培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻到50 左右時才能用來倒平板，可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的試管，感覺試管的溫度下降到剛剛不燙手時就可以進(jìn)行倒平板了。（2）為什么需要使試管口通過火焰？【提示】通過灼燒滅菌，防止試管口的微生物污染培養(yǎng)基。（3）為了能徹底滅菌，在操作過程中應(yīng)注意哪些事項？【提示】使用高壓蒸汽滅菌鍋時，加壓之前一定要把原先的空氣排盡，注意恒溫滅菌，同時要注意高壓蒸汽滅菌鍋的壓力(100 kPa)、溫度(121 )和滅菌

6、時間(20 min)。6、無菌操作和接種技術(shù)(1)接種概念：在_無 菌 條件下將微生物接入 培養(yǎng)基_的操作過程。工具：玻璃刮鏟、接種針和接種環(huán)。方法：穿刺接種、斜面劃線接種和平板劃線接種、涂抹平板等。（2）無菌操作微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵培養(yǎng)微生物用的試管、培養(yǎng)皿和微生物培養(yǎng)基等，在接種之前都需要 滅菌_。通常接種操作要在_酒精燈火焰_的附近進(jìn)行。【想一想】 在微生物的培養(yǎng)過程中為什么要進(jìn)行無菌操作？提示：無菌操作的目的是防止受到空氣中的雜菌污染。7、微生物的分離（1）原理：根據(jù)微生物對_營養(yǎng)成分、氧氣、pH等要求的不同，通過只提供目的微生物生長的必需條件，或加入某些抑制劑使非目的微生物不能生長，

7、從而達(dá)到 選擇分離 微生物的目的。(2)方法據(jù)菌落形態(tài)特征初步分離涂抹平板法常用方法平板分離法平板劃線法分類目的：在培養(yǎng)基上得到目的微生物的 單個 菌落【歸納】無菌技術(shù)的具體內(nèi)容(1)對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。(3)實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。(4)實驗操作時應(yīng)避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸。（5）在微生物的實驗室培養(yǎng)中，無菌技術(shù)的核心是防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。8、平板分離法原理：大多數(shù)細(xì)菌、許多真菌和單細(xì)胞藻類能在固體培養(yǎng)基上形成孤立的菌落。平板分離法能將單個微

8、生物分離和固定在固體培養(yǎng)基表面或里面，每個孤立的活微生物體經(jīng)過生長、繁殖均可形成便于移植的菌落。常用培養(yǎng)基：最常用的分離、培養(yǎng)微生物的固體培養(yǎng)基是瓊脂固體培養(yǎng)基。.方法：(1)涂抹平板法：分離材料進(jìn)行10倍系列稀釋，取一定稀釋度樣品倒入預(yù)先準(zhǔn)備好的瓊脂平板，用無菌玻璃刮鏟將樣品涂布均勻，細(xì)菌菌落常僅在平板表面生長。(2)混合平板法：分離材料進(jìn)行10倍系列稀釋，取一定稀釋度樣品與溶化的瓊脂混合，將與樣品混合的瓊脂倒入無菌平皿，細(xì)菌菌落出現(xiàn)在平板表面及內(nèi)部。(3)平板劃線法：有扇形劃線、連續(xù)劃線、方格劃線等。4.目的：通過采用各種平板分離法在培養(yǎng)基上得到目的微生物的單個菌落。(1)滅菌后的接種環(huán)須

9、冷卻后再挑取菌種，否則會殺死菌種。(2)整個操作過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。(3)劃線時用力大小要適當(dāng)，防止用力過大使培養(yǎng)基劃破。9、菌落數(shù)目的統(tǒng)計方法(1)顯微鏡直接計數(shù)法原理：此法利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。方法：用計數(shù)板計數(shù)。計數(shù)板是特制的載玻片，其上有特定的面積為1 mm2，高為0.1 mm的計數(shù)室，一個計數(shù)室又被分成25個(或16個)中格，每個中格再被劃分成16個(或25個)小格，每個計數(shù)室都由400個小格組成。操作：將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計數(shù)45個中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小格所含細(xì)菌的平均

10、數(shù)，再按計算公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。計算公式每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。操作設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實驗的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實值，可將同一稀釋度

11、菌液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數(shù)。2.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實驗。(3)濾膜法實例：測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目。過程：將已知體積的水過濾后，將濾膜放于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)綠色，并帶有金屬光澤可根據(jù)培養(yǎng)基上綠色的菌落數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量?！咎貏e提醒】統(tǒng)計菌落數(shù)目的注意事項：一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計數(shù)。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)表示。設(shè)置對照，目的是排除實驗組中無關(guān)因素對實驗結(jié)果

12、的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。實驗探究：微生物的分離【操作與實踐】微生物的分離包括樣品稀釋、劃線或涂布及培養(yǎng)三個步驟。1.稀釋用1 mL無菌吸管吸取1 mL大腸桿菌培養(yǎng)液，加入到盛有9 mL無菌水的大試管中，充分混勻，然后用無菌吸管從此試管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL無菌水的試管中，混合均勻，依次類推制成101、102、103、104、105、106系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。2.劃線或涂布(1)平板劃線分離法在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液在平板上劃線，常用的劃線方法有平行劃線和連續(xù)劃線兩種(如圖)。平行劃線時，每轉(zhuǎn)一個角度燒一次接種環(huán)。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿

13、蓋，做好標(biāo)記。特別提醒平板劃線法中的注意事項 取菌種之前及每次劃線之前都需要將接種環(huán)灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表： 取菌種之前每次劃線之前劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線后菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者從第二次以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加逐漸減少，最終得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。(2)涂布分離法取3個平板，底面分別用記號筆寫上104、105和106三種稀釋度，然后用無菌吸管分別吸取相應(yīng)

14、稀釋度的稀釋液各0.1 mL，放入已標(biāo)記好的平板上，用無菌玻璃刮鏟在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，室溫下靜置510 min，使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng)基(如圖)。特別提醒將玻璃刮鏟末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒杯中。取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的玻璃刮鏟在火焰上引燃。操作中一定要注意防火，不要將過熱的玻璃刮鏟放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。3.培養(yǎng)將劃線或涂布接種的平板倒置于37 培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1624 h，即可長出單菌落?！締栴}與探究】1.在涂布平板操作中，如何避免雜菌污染？【提示】(1)酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要適中。(2)接種環(huán)、玻璃刮鏟不能接觸任何物體。(3)接種環(huán)要