M膽堿受體和H1受體激動藥對離題豚鼠回腸的作用

1、M膽堿受體和H1受體激動藥對離題豚鼠回腸的作用實驗步驟i 實驗裝置準(zhǔn)備和儀器參數(shù)設(shè)置(1 )離體腸管描記裝置的準(zhǔn)備見圖7-15-1，麥?zhǔn)显〔壑屑庸潭康呐_氏液，調(diào)節(jié)超級恒溫器的溫度，使麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)溫度穩(wěn)定在37士 0.5 C。通氣管接 95%0即5%CO2混合氣體管道。用螺絲夾調(diào)節(jié)氣體管道的氣體流量，調(diào)節(jié)至浴槽中氣泡一個個逸出為止。(2)張力換能器固定于鐵支柱上，換能器輸出線接微機生物信號處理系統(tǒng)，儀器參數(shù)設(shè)置：RM6240系統(tǒng)：點擊“實驗”菜單，“自定義實驗項目菜單中的“腸肌記錄”。系統(tǒng)進入該實驗信號記錄狀態(tài)。儀器參數(shù)：通道時間常數(shù)為直流，濾波頻率10Hz,靈敏度3g，采樣頻率200Hz，掃描

2、速度 1s/div 。XlhE) MO MKQOMOD BMa1cm2. 標(biāo)本準(zhǔn)備（1）取豚鼠一只，用木槌擊其頭部致昏死，立即剖開腹腔，找到回盲部，然后，在離回盲部處剪斷，取岀回腸約 10cm左右一段，置于氧飽和的臺氏液培養(yǎng)皿中，沿腸壁除去腸系膜，然后將回腸剪成數(shù)小段（約 11.5cm ），用5ml注射器吸取臺氏液將腸內(nèi)容物沖洗干凈，換以新鮮臺氏液備用注意操作時勿牽拉腸段以免影響收縮功能。（2）取一小段腸管置于盛有臺氏液的培養(yǎng)皿中，在其兩端對角壁處，分別用縫針穿線，并打結(jié)。注意保持腸管通暢，勿使其封閉。腸管一端連線系于浴槽固定鉤上，然后放入37C麥?zhǔn)显〔壑?。再將腸管的另一端系結(jié)在張力換能器的懸

3、臂梁上，調(diào)節(jié)肌張力至23g （圖7-15-1 ）?！居^察項目】1待離體回腸穩(wěn)定1030分鐘后，記錄一段正常收縮曲線后，依次向麥?zhǔn)显〔壑械渭酉铝?藥物。加入一種藥液后，觀察23分鐘，并連續(xù)記錄腸管收縮曲線，然后用臺氏液連續(xù)沖洗二次，待基線恢復(fù)到用藥前的水平，隨后記錄一段基線。再加入第二種藥液。浴槽液體的容 量應(yīng)相等。2 .加入10-2 g/L ACh 0.2ml，觀察并記錄其收縮曲線，23分鐘后換液。3. 重復(fù)以上Ach劑量，待收縮達最高點時， 加入1g/L atropine 0.2ml，觀察并記錄其收縮曲 線。不換液，待曲線降至基線或基本穩(wěn)定后，再加入相同濃度的ACh,觀察并記錄其收縮曲線。4

4、 .加入10-2 g/L histamine 0.3ml，待作用明顯時（12分鐘），迅速換液。使腸肌張力恢復(fù)正 常。5 .加入10-3 g/L chlorpheniramine溶液0.2ml 5分鐘后（不換液），加入同量 histamine，觀察 并記錄其收縮曲線。6.加入10g/L BaCl2溶液1ml，觀察其反應(yīng)，當(dāng)作用達最高點，腸段持續(xù)于痙攣收縮狀態(tài)時， 加入1g/L atropine溶液0.2ml（或更大劑量），觀察并記錄其收縮曲線收縮曲線基線離體回腸10-2 g/L ACh 0.2mlAch收縮最高值加入1g/L atrop ine 0.2mlAch收縮最高值加入1g/L atrop

5、ine 0.2ml穩(wěn)定后加入 1g/L Ach0.2ml10-3 g/L chlorpheniramine 5min后加入同量 histamine10g/L BaCl2 溶液 1ml，作用 達最高點，1g/L atropine溶 液0.2ml（或更大劑量）問題1.5個關(guān)鍵詞小鼠M膽堿受體 H1受體 離體豚鼠回腸 單因素方差分析2. 哺乳類消化道平滑肌細胞膜上受體B8受體,M3受體,H1、H2、H3受體小腸：雖然 M3是調(diào)節(jié)環(huán)肌收縮的主要受體，M3和M2兩者都參與縱肌的收縮，除m2和m3夕卜，ml和m4也可在鼠和兔回腸中檢測到。大腸：Maeda et al在豬和鼠大腸組織曾檢測到m2和m3兩類受

6、體 mRNA有表達.M2和M3兩型受體可能都參與結(jié)腸環(huán)肌的收縮，但 M3的成分更大M膽堿能受體激動劑毛果蕓香堿、新斯的明、碘解磷定M膽堿能受體拮抗劑阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、筒箭毒堿、3. M膽堿能受體激動對消化道平滑肌有何影響膽堿受體激動藥(cholinoceptor agonists )與膽堿受體結(jié)合，激動受體，產(chǎn)生與遞質(zhì)乙酰膽堿相似的作用 按其對不同膽堿受體亞型的選擇性，可分：M，N膽堿受體激動藥；M膽堿受體激動藥； N膽堿受體激動藥。許多器官是由膽堿能和去甲腎上腺素能神經(jīng)雙 重支配的，通常是其中一 占優(yōu)勢。例如，在胃腸道、膀胱平滑肌和 腺體是以膽堿能神經(jīng)占 優(yōu)勢，而心肌收縮和小血管方

7、面則以去甲腎上腺素能神經(jīng)占優(yōu)勢。靜脈注射小劑量Ach即能激動M膽堿受體，產(chǎn)生與興奮膽堿能神經(jīng)節(jié)后纖維相似的作用，引起心率減慢、血管舒張、血壓下降，支氣管和胃腸道平滑肌興奮，瞳孔括約肌和睫狀肌收縮以及腺體分泌增加等興奮平滑肌，使其收縮M膽堿受體拮抗劑對乙酰膽堿的效應(yīng)影響M抗膽堿藥物阻斷 M3受體組胺H1受體激動對消化道平滑肌影響激活H1受體，通過三磷酸肌醇、二脂酰甘油介導(dǎo)，興奮支氣管和胃腸道平滑肌，增加毛細 血管通透性和擴張部分血管H1受體阻斷劑撲爾敏對組胺效應(yīng)的影響氯苯吡胺品是最強的抗組胺藥之一，鎮(zhèn)靜作用較異丙嗪弱，也有一定的抗膽堿作用。它與苯海拉明相似，但中樞抑制作用較輕?？烧T發(fā)癲癇，禁用于

8、癲癇患者。抑制平滑肌收縮M受體細胞內(nèi)信息傳遞機制M3受體的細胞內(nèi)信息傳遞機制M3受體主要激活 Gq蛋白(又稱Gp蛋白)1 , 19, Gq蛋白與磷脂酶C(PLC相聯(lián)系，磷脂酶 C則可使膜上4, 5-二磷酸肌醇磷脂(PIP2)水解，而產(chǎn)生三 磷酸肌醇(IP3)和 1, 2-二?；视?DG)在小腸平滑肌組織或單個細胞，M3受體一旦激活，胞內(nèi)IP3水平在10s15s內(nèi)即達高峰 伸加5倍)，而DG水平在30s內(nèi)超過對照值的2倍.iP3 水平的升高可使肌漿網(wǎng)內(nèi)貯存Ca2+釋放，胞漿內(nèi)Ca2+曽多后觸發(fā)平滑肌收縮13 . dG水平的升高可激活蛋白激酶C(PKC)而使其發(fā)生重分布至胞膜，產(chǎn)生磷酸化功能1

9、具體機制雖尚不明了，但蛋白激酶C重分布可能使胞膜上受體介導(dǎo)的Ca2+通道激活，促使 Ca2+內(nèi)流；也可能使胞漿內(nèi)腺苷酸環(huán)化酶的活性降低而使cAMP水平降低；也可直接磷酸化收縮蛋白而激活收縮機制M2受體的細胞內(nèi)信息傳遞機制如將m2基因轉(zhuǎn)化至不含 M受體的哺乳類動物細胞， 并讓其表達m2受體蛋白后，發(fā)現(xiàn) m2受體與許多細胞內(nèi)信息傳遞通路相聯(lián)系18,其中最為顯著和肯定的是其降低細胞內(nèi)cAMP水平的作用，這被許多實驗所證實1, 11 與心肌的M2受體一樣，當(dāng)細胞外配體如乙酰膽堿或其他類似物興奮消化道平滑肌M2受體，便激活Gi蛋白，Gi蛋白則降低腺苷酸環(huán)化酶的活性，使胞內(nèi) cAMP含量減少，促使平滑肌收

10、縮，有趣的是，M2這種間接加強收縮的作用只發(fā)生在肌肉事先被腎上腺素能3受體激動劑所致的舒張狀態(tài)。 M2 受體不論在正?；蜓装Y時均參與小腸縱肌的收縮，而幾乎不參與正常狀態(tài) 的環(huán)肌收縮，但可部分參與炎癥時的環(huán)肌收縮.m2受體加強胃腸道平滑肌收縮的作用在正常情況下可能被 M3 受體直接產(chǎn)生收縮的效應(yīng)所掩蓋而不甚明顯，但在應(yīng)激情況下如炎癥等， M2 受體加強收縮的作用則明顯表現(xiàn)出來 .離體腸段如何與檢測系統(tǒng)連接 取一小段腸管置于盛有臺氏液的培養(yǎng)皿中，在其兩端對角壁處， 分別用縫針穿線，并打結(jié)。 注意 保持腸管通暢，勿使其封閉。腸管一端連線系于浴槽固定鉤上，然后放入37 C麥?zhǔn)显〔壑小Ｔ賹⒛c管的另一端系

11、結(jié)在張力換能器的懸臂梁上，調(diào)節(jié)肌張力至23g維持離體腸段收縮需要條件 需要將離體的平滑肌進入生理鹽水中，來保證細胞的形態(tài)正常。 需要將溶液中放入極微量的鈣離子，來保證肌肉收縮的機能正常。 需要保證離體平滑肌結(jié)構(gòu)的完整性，使整個反射弧暢通。需要一定的電刺激 臺氏液組成成分 臺氏液配制 1000ml 臺氏液含： NaCl 8.0g 、10% KCL 2.0ml(0.2g) 、10% MgSO4.7H2O 2.6ml(0.26g) 、5% NaH2PO4 .2 H2O 1.3ml(0.065g) 、NaHCO3 1.0g 、1M CaCL2 1.8ml ( 0.2g )、葡萄糖 1.0g。Leage

12、ne 改良 Tyrodes solution 也屬于平衡鹽溶液的一種，主要由氯化鈉、磷酸鹽、 氯化 鈣、葡萄糖等組成，含HEPES經(jīng)常用于哺乳動物離體腸肌實驗并維持離體腸肌的正常生理功能、肌體灌流、清洗組織，緩沖能力較常規(guī) Tyrodes solution(DF0011) 強 為何臺氏液可以維持離體腸段活性 提供所需離子，能量，緩沖作用RM6240 多通道信號采集處理系統(tǒng)的參數(shù)如何設(shè)置RM6240系統(tǒng)：點擊“實驗”菜單，“自定義實驗項目菜單中的“腸肌記錄”。系統(tǒng)進入該實驗信號記錄狀態(tài)。儀器參數(shù)：通道時間常數(shù)為直流，濾波頻率10Hz，靈敏度3g,采樣頻率200Hz,掃描速度 1s/div。改變標(biāo)

13、本與張力換能器之間連線的張力會對實驗結(jié)果產(chǎn)生何種影響 過緊影響腸道平滑肌正常生理狀態(tài)，過松對張力變化不敏感 腸段標(biāo)本與張力換能器之間的連線要與水平面保持垂直， 松緊適當(dāng)， 并且使之不與浴槽壁相 摩擦。 觀察腸段運動方向和計算機屏幕上的記錄曲線是否一致，即收縮時，曲線上升； 舒張時，曲線下降。否則，可將張力換能器旋轉(zhuǎn)180組胺、乙酰膽堿、氯化鋇三試劑被隨機貼上 A/B/C 瓶標(biāo)，利用離體豚鼠回腸實驗方法和工 具阿托品、撲爾敏設(shè)計實驗，鑒別上述藥物 乙酰膽堿為膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)， 可明顯興奮兔腸平滑肌的 M 受體，使其收縮幅度、 張力、 蠕 動增加； 氯化鋇不作用于受體， 而是直接作用于腸管， 使腸管

14、受到鋇離子的刺激后產(chǎn)生收縮 痙攣；阿托 品為阻斷 M 膽堿受體的抗膽堿藥，能拮抗乙酰膽堿對平滑肌的M 樣作用，但不能拮抗氯化鋇對離體 兔腸的收縮作用 回腸，置盛有冷臺氏液的培養(yǎng)皿中保存，將 腸管剪成數(shù)段。 2、取離體兔腸一小段，置于浴 槽內(nèi)與張力換能器連接，在電腦中觀察曲線變化。3、鑒定藥物(每次取 0.2ml 滴入浴槽中)依次往浴槽中滴入 A、B、C三種藥物，每次只滴入一種藥物， 觀察張力曲線變化。 注意每次加 入新藥物前要清洗兔腸。 借助已經(jīng)鑒定的藥物繼續(xù)鑒別，驗證剩余藥物。 對離體腸段的觀察項目收縮曲線，處理前后收縮幅度的原始數(shù)據(jù)、頻率、幅度和張力 向臺氏液中滴加試劑注意問題滴藥時，不要

15、碰觸連接線，不要把藥滴在管壁上， 不要滴加在回腸上。 換液迅速 在加藥前， 必須先準(zhǔn)備好更換用的 38 C臺氏液。每次加藥出現(xiàn)效果后， 必須立即更換浴槽內(nèi)的臺氏液， 待腸段恢復(fù)正?；顒雍笤儆^察下一個 項目。如果一次滴加時沒有明顯結(jié)果，可以適當(dāng)追加一部分試劑 為保持離體腸段的收縮活性，操作注意問題1） 每做一個離子或試劑對腸道的影響實驗時， 都要更換臺氏液， 并清洗干凈保持腸道活 性 正常。 2） 所加的試劑的量不要過大，防止腸道受到不可恢復(fù)的破壞。3）浴槽內(nèi)臺氏液要保持一定高度 4）加藥前必須準(zhǔn)備好更換用的 38 C臺氏液5）標(biāo)本安裝好后，應(yīng)在新鮮 38C臺氏液中穩(wěn) 定510min ,有收縮活動時即可開始實驗6）游離及取出腸段時，動作要快，但要避免過度牽拉或使組織干燥而影響其活性。 整個過程應(yīng)保持營養(yǎng)液恒溫和通入O2。實驗結(jié)果屬于何種數(shù)據(jù)類型計量資料 實驗數(shù)據(jù)適合何種統(tǒng)計分析方法雙側(cè)t-檢驗？離體腸段灌流實驗影響因素有哪些實驗室的溫度、 空氣狀況，操作的熟練程度，灌流液的配置情況，豚鼠本身的生理狀態(tài) 與整體實驗相比，離體實驗有何優(yōu)點離體實驗室將器官或細胞從體內(nèi)分離出來，在一定條件下進行的研究。離體實驗具有以下特點：條件易于控制；操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確；節(jié)約時間，提高實驗 效率。離體實驗三要素：溫度，38+/-0.5 C；營養(yǎng)液；氣體：氧氣，二氧化碳