針灸對(duì)老年癡呆模型小鼠防治作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、實(shí)驗(yàn)研究針灸對(duì)老年癡呆模型小鼠防治作用的實(shí)驗(yàn)研究成都中醫(yī)藥大學(xué) 99博士生 (610075 張衛(wèi)陜西延安衛(wèi)校 (716000 劉來(lái)虎指導(dǎo)教師 :殷克敬摘要 :本實(shí)驗(yàn)采用皮下注射東莨菪堿造成小鼠阿茨海默氏病 (AD 模型 , 通過(guò)針刺百 會(huì) 、 水溝 , 艾灸命門 , 觀察針灸對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及生化指標(biāo)的影響 。結(jié)果表 明 :針灸能明顯改善模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力 , 增強(qiáng)腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶活性 , 提高大腦乙酰膽堿含量 。 提示針灸對(duì) AD 有顯著的防治作用 。主題詞 :癡呆 , 老年性 針灸療法百會(huì)水溝命門動(dòng)物 , 實(shí)驗(yàn)阿茨海默氏病 (A lzhei m ers disease AD 俗稱老年

2、性 癡呆 , 是指老年前期或進(jìn)入老年后大腦功能進(jìn)行性退化 , 某些神經(jīng)遞質(zhì)的改變 (主要為乙酰膽堿及其酶類 引起的 智力進(jìn)行性下降 , 并伴有情感障礙的大腦器質(zhì)性疾病 。據(jù) 世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì) , 在老年癡呆患者中 AD 約占 50 60%1?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病病因 、 發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)仍不太清楚 。 雖經(jīng)多年探索出多種藥物 , 但均存在療效欠佳 、 服藥時(shí)間 長(zhǎng) 、 毒副作用大等弊端 。 中醫(yī)雖無(wú) AD 病名 , 據(jù)其臨床表現(xiàn) 可歸為 “癡呆” 、 “善忘” 、 “神疑” 等病范疇 , 并對(duì)其病因 、 病 機(jī)及治療做了一些論述 , 但實(shí)驗(yàn)研究尚不多見 。本實(shí)驗(yàn)旨 在觀察針灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性 AD 小鼠的學(xué)習(xí)

3、記憶能力 、 腦內(nèi)乙酰 膽堿 (A ch 含量 、 乙酰膽堿酯酶 (A chE 活性的影響 , 從而 為臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù) , 并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行初步探討 。 1材料與方法 1. 1實(shí)驗(yàn)材料 :1. 1. 1動(dòng)物及分組 :選用昆明種健康 10月齡小鼠 45只 , 均為雌性 , 體重 37. 5±2. 5g 。 由西安醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 。 小鼠適應(yīng)性 飼養(yǎng) 1周后 , 按每組 15只隨機(jī)分為模型組 (A 組 , 模型加 針灸組 (B 組 , 模型加西藥對(duì)照組 (C 組 。1. 1. 2主要藥品及試劑 :氫溴酸東莨菪堿注射液 :0. 3m g m l (上海禾豐制藥有限公司 , 批

4、號(hào) :970906 , 腦復(fù)康 片 :0. 4g 片 (西安醫(yī)科大學(xué)制藥廠 , 批號(hào) :970811 , 氯化乙 酰膽堿 :1. 0g 支 (北京東環(huán)聯(lián)合化工廠 , 批號(hào) :970508 , 乙 酰膽堿酯酶 (A chE 活性試劑盒 :(北京中生生物工程技術(shù) 公司 , 批號(hào) :970905 。1. 1. 3主要儀器 :Y 型迷路 , 按陳奇 3方法制作 ; 721分光光度計(jì) , 上海第三分析儀器廠 。1. 2實(shí)驗(yàn)方法 :1. 2. 1造模及處理方法 :A 組按每天 1m g kg 體重皮下注射東莨菪堿計(jì)算 , 每鼠腹部皮下每天 注射 0. 12m l , 后模擬抓取固定 。 連續(xù) 10d (為

5、第 1療程 , 休 息 3d 再連續(xù)注射 10d (為第 2療程 。 B 組處理同 A 組 , 并 于每次東莨菪堿注射后抓取固定行針灸治療 。C 組處理同 A 組 , 并于每次東莨菪堿注射后灌胃腦 復(fù)康 0. 4m l (按 5m g kg 研末加 2倍量水稀釋 。1. 2. 2針灸方法 :選穴 :根據(jù)文獻(xiàn)論述選取 “百會(huì)” 、 “水溝” 、 “命門” 。參考 中國(guó)獸醫(yī)針灸學(xué) 并結(jié)合人體穴位 而定位 , 于動(dòng)物頭部正中兩耳間取 “百會(huì)” , 鼻唇溝上 1 3取 “水溝” , 第 2腰椎脊突下取 “命門” 。 穴位及針具用 75%酒精消毒 , 采用 30號(hào) 、 0. 5寸不銹鋼毫針 , “百會(huì)”

6、 平刺 1 2mm ; “水溝” 向鼻端斜刺 12mm , 行捻轉(zhuǎn)法 , 角度 360度 左右 , 頻率 150次 m in , 行針 1m in ; “命門” 采用艾條懸灸 法 , 距穴位 3c m , 以有溫?zé)岣卸鴦?dòng)物不煩躁為度 , 每次 3m in 。 每日針灸 1次 , 10次為 1療程 , 間歇 3天后進(jìn)行第 2療程 。1. 2. 3標(biāo)本采集及指標(biāo)檢測(cè) : 指標(biāo)采集 :去處死亡 及不合格小鼠 , 每組選取 10只小鼠用于指標(biāo)檢測(cè) 。 行 為指標(biāo)觀測(cè) :按陳奇方法以 Y 型水迷宮觀測(cè) , 分別以小鼠 連續(xù) 5次正確達(dá)到安全平臺(tái)前錯(cuò)誤次數(shù)為指標(biāo) 。 大腦 A chE 活性測(cè)定 :取左側(cè)大

7、腦精確稱重后置于玻璃勻漿器 中 , 按腦組織 10m g 與緩沖液 1. 0m l 的比例加入冰冷的 0. 1mo l L , PH 7. 4PBS 制成勻漿 , 放置 1h 后 3000r m in 離 心 10m in 取上清液 , 按試劑盒要求 , 比色法進(jìn)行檢測(cè) 3。 大腦 A ch 含量測(cè)定 :取右半側(cè)大腦精確稱重 , 置于 玻璃勻漿器 中 與 10倍 量 0. 01N HC l 勻 漿 , 放 置 1h 后 3000r m in 離心 10m in , 取上清液按生物鑒定法進(jìn)行檢 測(cè) 4。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 :各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (X ±S 表示 , 每組樣本

8、均數(shù)組間比較采用 t 檢驗(yàn) 。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2. 1小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試結(jié)果見表 1。 表 1各組小鼠記憶能力測(cè)試結(jié)果 (次 , x ±S 組別 n 治療前 第 1療程后 第 2療程后 ABC1010106. 53±1. 306. 51±1. 306. 56±1. 216. 64±1. 783. 36±1. 2333. 31±0. 8536. 92±1. 38 4. 00±1. 0933 2. 19±1. 1733備注 :3示與 A 比較 P <0. 05, 33示與 A 比較 P <

9、; 0. 01由表 1知治療前 A 、 B 、 C 三組間連續(xù) 5次正確達(dá)到 安全平臺(tái)前錯(cuò)誤次數(shù)無(wú)顯著差異 , 經(jīng)第 1療程后 B 和 C 組表現(xiàn)出與 A 組的差異 , 其錯(cuò)誤次數(shù)明顯少于 A 組 (P < 0. 05 , 第 2療程后 B 和 C 組與 A 組的差別更加顯著 (P 336陜西中醫(yī) 2001年第 22卷第 10期<0. 01 。2. 2各組動(dòng)物大腦 A chE 活性及 A ch 含量的檢測(cè) 結(jié)果見表 2。表 2各組動(dòng)物大腦生化指標(biāo)比較 (x ±S 組別 n A chE 活性 (u g A ch 含量 (ug g A B C 10101092. 91

10、7;43. 32139. 30±16. 9733134. 82±14. 75332. 83±0. 76 5. 87±1. 0233# 4. 81±0. 6633備注 :#與 C 組比較 P 0. 05由表 2可知經(jīng)治療后 B 組和 C 組與 A 組比較在大腦 A chE 活性及大腦 A ch 含量 方面均有顯著升高 (P <0. 01, P <0. 01 , 且 B 組大腦 A ch 含量也明顯高于 C 組 (P <0. 05 。3討論 3. 1選穴依據(jù) :中醫(yī)學(xué)認(rèn)為 AD 其病位 在腦 , 辨證以腎精不足 , 髓?？仗摓楸?

11、, 痰瘀蒙蔽清竅為 標(biāo) , 治療應(yīng)以補(bǔ)腎益精為主 , 開竅醒神為輔 。命門穴屬督脈 , 有補(bǔ)腎填精的作用 , 為治療腎虛 、 腦 髓不足的要穴 。百會(huì)位于巔頂 , 古稱 “三陽(yáng)五會(huì)” , 督脈 、 膀 胱經(jīng) 、 肝經(jīng)在此入絡(luò)于腦 。 靈樞海論 記載 :“腦為髓 海 , 其輸上在于其蓋” , 針刺此穴可直通腦竅 , 具醒神開竅 之功 。 水溝穴則為開竅醒神的要穴 。 此三穴均屬督脈與腦 緊密相連 , 對(duì)于腦部疾患有良好效果 。3. 2針 灸 治 療 AD 的 機(jī) 理 探 討 :自 1974年 D ranchm an 研究指出腦內(nèi)乙酰膽堿與記憶 、 認(rèn)識(shí)有密切 關(guān)系以來(lái) , 二十多年的研究結(jié)果使人

12、們認(rèn)識(shí)到了中樞膽 堿能神經(jīng)系統(tǒng)學(xué)習(xí) 、 記憶及情感方面具有特殊的作用 。 1976年后通過(guò)大量的研究表明 AD 患者最具特征的神經(jīng) 生化方面的改變?yōu)榇竽X皮質(zhì) 、 海馬中 A ch 含量的顯著減 少 , 膽堿乙?；?(ChA T 及 A chE 活性的顯著降低 , 降 幅可達(dá) 60 90%。 腦內(nèi)乙酰膽堿代謝過(guò)程如下 :膽堿 +乙 酰輔酶 A +ChA T A ch +輔酶 A ; A ch +H 2O +A chE 膽堿 +乙酸 。 ChA T 是 A ch 的生物合成酶 , 僅存在于膽堿 能神經(jīng)元中 , 是衡量膽堿能神經(jīng)元的指標(biāo) 。 A chE 是 A ch 的水解酶 , 為觀察膽堿能神經(jīng)

13、元的另一重要指標(biāo) 。此二者 相輔相成共同維持腦內(nèi) A ch 含量的動(dòng)態(tài)平衡 , 并且它們 的改變程度與構(gòu)成 AD 病理改變的腦組織老年斑 、 神經(jīng)原 纖維纏結(jié)的嚴(yán)重程度也密切相關(guān) 。 本實(shí)驗(yàn)表明針灸可顯 著提高 AD 模型小鼠腦組織 A ch 含量及 A chE 活性 , 并由 此推知針灸可提高 AD 小鼠腦組織中 ChA T 活性 。 針灸 治療可使 AD 模型小鼠腦組織 A ch 含量及 ChA T 、 A chE 活性均明顯升高 , 表明針灸可使 AD 小鼠中樞膽堿能神經(jīng) 系統(tǒng)處于積極活動(dòng)狀態(tài) 。 腦組織 A ch 含量的增加是在既 提高腦組織 A ch 合成又加快 A ch 釋放降解的

14、情況下達(dá)到 的新的動(dòng)態(tài)平衡 , 是在 A ch 利用率加快的情況下得以實(shí) 現(xiàn)的 。參考文獻(xiàn)1丁銘臣 . 老年性癡呆 . 實(shí)用內(nèi)科雜志 , 1993; 13(6 3262陳奇 . 中藥藥理研究方法學(xué) . 北京 :人民衛(wèi)生出 版社 , 1994; 8953陳勤 . 抗衰老研究實(shí)驗(yàn)方法 . 北京 :中國(guó)醫(yī)藥科 技出版社 , 1996; 1084黃俊華 . 乙酰膽堿的微量生物測(cè)定 . 針刺研究 , 1981; 6(1 72(收稿 2000211220 阿膠與偽品的性狀鑒別寧夏石嘴山市第二人民醫(yī)院 (753000 侯桂霞王惠霞阿膠系一種名貴常用的中藥材 , 其性平 、 味甘 , 主要 功能為滋陰潤(rùn)燥 、

15、 補(bǔ)血 、 止血 。 人們常以此入藥或保健補(bǔ) 品 , 現(xiàn)在市場(chǎng)上有假阿膠出售 , 服用后影響疾病治療 , 達(dá) 不到治病強(qiáng)身作用 。 現(xiàn)將識(shí)別方法介紹如下 :阿膠的性狀鑒別 :阿膠為脊索動(dòng)物門哺乳綱馬科動(dòng) 物驢的皮 , 經(jīng)煎熬 , 濃縮而成干燥的膠塊 。 呈長(zhǎng)方形或方 形膠塊 。 常用簡(jiǎn)單檢查方法 :外觀直視檢查 :呈黑褐色 或棕黑色 , 平滑而有光澤 , 碎片對(duì)光照視顯琥珀色半透明 狀 , 質(zhì)堅(jiān)脆易碎 , 不發(fā)軟粘合 。以色勻 、 質(zhì)脆 、 半透明 、 斷面 光亮 、 無(wú)腥氣者為佳 。 水試法 :阿膠 1520g , 置燒杯中 , 加適量水 , 加熱溶化 , 溶液呈紅茶色 , 透明 , 清而不濁 。 口嘗 :取阿膠熱水溶液口嘗 , 微帶腥味 , 味甜 。偽品阿膠性狀鑒別 :現(xiàn)在市場(chǎng)上有一種 “新阿膠” 是 用豬皮熬制所得的 , 呈方塊狀 , 表面棕褐棕色 , 對(duì)光照視 不透明 , 斷面不光亮 。 于水中加熱熔化 , 液面有一層脂膠 油 , 具肉皮湯味 。成分與阿膠相似 , 可以代替阿膠 。另外 , 有