BJS201706食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定

1、附件2食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定BJS201706i范圍本方法規(guī)定了食品中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本方法適用于包裝飲用水、液體乳、大米、胡蘿卜、哈密瓜、豬肉、魚肉、茶葉、嬰幼兒配方乳粉（不包括特殊醫(yī)學用途的嬰幼兒配方乳粉）中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定。2原理-串聯(lián)質(zhì)譜測定，內(nèi)標法定量。試樣經(jīng)提取、離心后，上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，用液相色譜3試劑和材料3.1 試劑乙睛（CH3CN）:色譜純。3.1.1 甲醇（CH3OH）:色譜純。3.1.2 甲酸（HCOOH）:色譜純。3.1.3 甲酸鏤（HCOONH4）:液質(zhì)聯(lián)用級。3.1.4 超純水（H2O）:電阻率為18.2M-cm

2、注：以上試劑在使用前均應做本底測試。3.2 試劑配制含0.1%甲酸的水溶液：量取1.0mL甲酸（3.1.3）至1000mL容量瓶，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，混勻。3.2.1 20mmol/L甲酸鏤溶液：稱取0.63g甲酸鏤（3.1.4）,用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至500mL,混勻。3.2.2 甲酸鏤甲醇溶液：取100mL甲酸鏤溶液（3.2.2）,加入200mL甲醇（3.1.2）,混勻。3.3 標準品氯酸鈉標準品：采用具有證書的標準品或高純試劑，純度99%。中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量詳見表1。高氯鈉鹽標準品：采用具有證書的標準品或高純試劑，純度99%。中

3、文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量詳見表1。表1氯酸鹽和高氯酸鹽的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量同位素內(nèi)標中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子量氯酸鈉Sodiumchlorate7775-09-9NaClO3106.44高氯酸鈉Sodiumperchlorate7601-89-0NaClO4122.45氯酸鹽同位素內(nèi)標：氯酸鹽-18O3（200科g/mL以氯酸根-18O3離子計，北京振祥提供，EURL-SRMLotNo:024）,4c保存。高氯酸鹽同位素內(nèi)標：高氯酸鹽-18O4（100科g/mL以高氯酸根-18O4離子計，美國劍橋提供，CILOLM-

4、7310-1.2）,4c保存。3.4標準溶液的配制氯酸鹽標準儲備液（1mg/mL,以氯酸根計）：精密稱取氯酸鈉0.128g（精確至0.0001g）,置于100mL容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1mg/mL標準儲備液，4c保存。高氯酸鹽標準儲備液（1mg/mL,以高氯酸根計）：精密稱取高氯酸鈉0.123g（精確至0.0001g）,置于100mL容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1mg/mL標準儲備液，4c保存?；旌蠘藴手虚g液：分別準確量取0.2mL氯酸鹽標準儲備液（3.5.1）、0.1mL高氯酸鹽標準儲備液（3.5.2）,置于同

5、一100mL容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、高氯酸鹽濃度分別為2.0g/mL、1.0©mL的混合標準中間液，4c保存?；旌贤凰貎?nèi)標液：分別準確量取75人氯酸鹽同位素內(nèi)標（3.4.1）、20人高氯酸鹽同位素內(nèi)標（3.4.2）置于同一10.0mL容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽-18。3、高氯酸鹽-18O4濃度分別為1500ng/mL、200ng/mL的混合同位素內(nèi)標液，4c保存?；旌蠘藴使ぷ魅芤海悍至?J準確量取混合標準中間液（3.5.3）0U10255075科L、100科L、250科1>5007501000及混合同位素

6、內(nèi)標液（3.5.4）100I,用甲酸俊甲醇溶液（3.2.3）稀釋并定容至10mL,作為混合標準工作溶液S0、S1S9。氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、2.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、200ng/mL,高氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、1.00ng/mL、2.50ng/mL、5.00ng/mL、7.50ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、75.0ng/mL、100ng/mL,混合標準工作液中氯酸鹽-18。3、高氯酸鹽-18O4

7、濃度分別為15.0ng/mL、2.0ng/mL,或依需要配制適當濃度的混合標準工作液。臨用新制。4儀器和設備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI源）。4.1 渦旋振蕩器。4.2 組織搗碎機。4.3 均質(zhì)器。4.4 離心機：轉(zhuǎn)速R10000r/min。4.5 電子天平：感量分別為0.0001g和0.001g。4.6 超聲波恒溫水浴振蕩器。4.7 具塞離心管：50mL。4.8 PRiMEHLB固相萃取柱：3cc,150mm,或性能相當者。注：4.8、4.9的耗材在使用前均應做本底測試。5試樣制備與保存包裝飲用水充分混勻，直接取用。5.1 液體乳：充分搖勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份

8、，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于4c避光保存。5.2 豬肉、魚肉：取適量有代表性的可食部分試樣，切成小塊，組織搗碎機搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于-18C避光保存。5.3 胡蘿卜、哈密瓜：取適量有代表性的試樣，去皮去籽，切成小塊，組織搗碎機搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于-18C避光保存。5.4 嬰兒配方乳粉：充分混勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于常溫避光保存。5.5 大米、茶葉：取適量有代表性的試樣，粉碎機粉碎后過40目篩，均分成兩份，作為試樣

9、和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標記，于常溫避光保存。6測定步驟提取包裝飲用水：準確移取1.0mL試樣，加入10.0山混合同位素內(nèi)標液（3.5.4）,渦旋震蕩10s,經(jīng)0.22g再生纖維素濾膜過濾后，取續(xù)濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。胡蘿卜、哈密瓜、茶葉：準確稱取1g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200dL混合同位素內(nèi)標液（3.5.4）,準確加入7.0mL超純水（3.1.5）,渦旋振蕩5min,再準確加入13.0mL甲醇（3.1.2）,混勻，振蕩超聲提取30min,10000r/min常溫離心10min,取上清液待凈化。大米：準確稱取2g（精確至0.00

10、1g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200dL混合同位素內(nèi)標液（3.5.4）,準確加入7.0mL超純水（3.1.5）,渦旋振蕩5min,再準確加入13.0mL甲醇（3.1.2）,混勻，振蕩超聲提取30min,10000r/min常溫離心10min,取上清液待凈化。嬰兒配方乳粉：準確稱取2g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150dL混合同位素內(nèi)標液（3.5.4）,準確加入5.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1）,迅速混勻，置于45c水浴超聲20min,渦旋振蕩5min,再準確加入10.0mL甲醇（3.1.2）,混勻，10000r/min常溫離心1

11、0min,取上清液待凈化。液體乳：準確稱取5g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150dL混合同位素內(nèi)標液（3.5.4）,加入1.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1）,9.0mL甲醇（3.1.2）,渦旋振蕩5min,10000r/min常溫離心10min,取上清液待凈化。豬肉、魚肉：準確稱取2g（精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200dL混合同位素內(nèi)標液（3.5.4）,準確加入7.0mL超純水（3.1.5）,13.0mL甲醇（3.1.2）,10000r/min土勻質(zhì)30s,10000r/min常溫離心10min,取上清液待凈化。

12、6.1 凈化吸取約3.0mL上述上清液（6.1.26.1.6）,按W錄人中的圖A.1方式過固相萃取柱（4.9）及0.22叩再生纖維素濾膜，棄去約1mL流出液，收集續(xù)濾液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。6.2 色譜測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測6.2.1.1 參考液相色譜條件a）色譜柱：AcclaimTRINITYPI復合離子交換柱（50mm<2.1mm,3（im;100mnix2.1mm,3（im）,或性能相當者。b）流動相：A為乙睛，B為20mmol/L甲酸俊溶液。梯度洗脫程序見表2。c）樣品系列運行完后，按表3的色譜柱清洗梯度程序?qū)ιV柱進行清洗。d）流速：0.5mL/min。e）柱溫：3

13、5Cof）進樣量：3山。表2梯度洗脫程序50mnK2.1mm,3Vm規(guī)格色譜柱100mm<2.1mm,3Vm規(guī)格色譜柱時間(min)流動相A（%）流動相B（%）時間(min)流動相A（%）流動相B（%）Initial3565Initial70300.535650.270304.065353.090105.090107.090107.090108.070308.0356510.07030表3色譜柱清洗梯度程序50mnX2.1mm,3Vm規(guī)格色譜柱100mm<2.1mm,3Vm規(guī)格色譜柱時間(min)流速(mL/min)流動相A（%）流動相B（%）時間(min)流速(mL/min)流動

14、相A（%）流動相B（%）Initial0.53565Initial0.5703010.00.15901015.00.159010100.00.159010150.00.159010注：色譜柱按該程序清洗后保存，有助于延長色譜柱壽命。6.2.1.2 參考質(zhì)譜條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b）檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM）。c）掃描方式：負離子模式掃描。d）毛細管電壓：200V。e）錐孔電壓：60V。f）脫溶劑溫度：500C。g）脫溶劑氣流量：1000L/h。h）錐孔氣流量：150L/h。i）采用多反應監(jiān)測（MRM）模式采集數(shù)據(jù)，質(zhì)譜參數(shù)見表4。表4氯酸鹽和高氯酸鹽定性、定量離子對和質(zhì)

15、譜分析參數(shù)定量離子對?；衔锬鸽x子（m/z）子離子（m/z）錐孔電壓（V）碰撞能量（eV）氯酸根83.067.0*601585.069.06015高氯酸根99.083.0*6018101.085.06018氯酸根內(nèi)標89.071.0*6016高氯酸根內(nèi)標107.089.0*6018注：6.3.1.2的質(zhì)譜條件僅供參考，當采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。標準工作曲線制作將混合標準工作溶液（3.5.5）按儀器參考條件（6.3.1）進行測定。以混合標準工作溶液的濃度為橫坐標，以內(nèi)標校正后的響應值為縱坐標繪制標準工作曲線。定性測定在相同試驗條件下測定試樣和混合標

16、準工作溶液，記錄試樣和混合標準工作液中氯酸鹽、高氯酸鹽的色譜保留時間，以相對于最強離子豐度的百分比作為定性離子的相對離子豐度。若試樣中檢出與混合標準工作液（3.5.5）中氯酸鹽、高氯酸鹽保留時間一致的色譜峰，且其定性離子與濃度相當?shù)臉藴嗜芤褐邢鄳亩ㄐ噪x子的相對豐度相比，偏差不超過表5規(guī)定的范圍，則可以確定試樣中檢出相應的氯酸鹽、高氯酸鹽。表5定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（%）>50>2050>1020<10允許的相對偏差（%）士20士25士30士50定量測定若試樣檢出與混合標準工作液（3.5.5）一致的氯酸鹽、高氯酸鹽，根據(jù)標準工作曲線按內(nèi)標法以內(nèi)

17、標校正后的響應值計算得到其含量?？瞻讟悠芳訕嗽嚇訁⒖忌V圖見附錄B中的圖B.1、B.2。6.3 空白試驗除不加試樣外，均按試樣同法操作。7結(jié)果計算結(jié)果按式（1）計算:式中：X一試樣中各待測組分的含量，包裝飲用水單位為微克每升（聞/L）,其他樣品單位為微克每千克（聞/kg）;c一從標準工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）;V一試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）;f一試樣制備過程中的稀釋倍數(shù)；m一稱樣量，包裝飲用水單位為毫升（mL）,其他樣品單位為克（g）。計算結(jié)果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8檢測方法的

18、靈敏度、準確度、精密度靈敏度當試樣量為1.0mL時，包裝飲用水中氯酸鹽的檢出限為0.6g/L定量限為2.0科g/L高氯酸鹽的檢出限為0.4科/L、定量限為1.0g/L當試樣量為1g（精確至0.001g）、定容體積為20.0mL時，胡蘿卜、哈密瓜、茶葉中氯酸鹽的檢出限為12.0g/kg定量限為40.0科g/kg高氯酸鹽的檢出限為8.0科g/kg定量限為20.0科g/kg當試樣量為2g（精確至0.001g）、定容體積為20.0mL時，豬肉、魚肉、大米中氯酸鹽的檢出限為6.0g/kg定量限為20.0科g/kg高氯酸鹽的檢出限為4.0科g/kg定量限為10.0科g/kg當試樣量為5g（精確至0.001

19、g）、定容體積為15.0mL時，液體乳中氯酸鹽的檢出限為1.8g/kg定量限為6.0g/kg高氯酸鹽的檢出限為1.2科g/kg定量限為3.0科g/kg當試樣量為2g（精確至0.001g）、定容體積為15.0mL時，嬰兒配方乳粉中氯酸鹽的檢出限為4.5g/kg定量限為15.0科g/kg高氯酸鹽的檢出限為3.0科g/kg定量限為7.5科g/kg準確度本方法在5800的/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為80%110%。8.1 精密度20%。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術平均值的附錄A凈化方式示意圖附錄B氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖10.00高氯酸鹽碎片離子85.0/69.0高氯酸鹽-18O4碎片離子