痰抗酸桿菌的熒光染色法

1、.抗酸桿菌的熒光染色檢查法 .抗酸桿菌的熒光染色檢查法 主要內容 1.原理 2.操作程序 3.舜宇EX30熒光顯微鏡的操作使用 4.質量控制.抗酸桿菌熒光染色的原理 抗酸桿菌是無色半透明的有陰電荷和很微弱的固有熒光的微生物，而熒光素金胺O是一種含有自由氨基的金黃色堿性染料，它的離子帶有陽電荷，因此金胺O能和帶陰電荷的抗酸桿菌結合而使其著熒光色素，當其遇到紫外線或青色線時，即可激發(fā)出桔黃色熒光。.抗酸桿菌熒光染色檢查操作程序 （一）涂片 取經95%乙醇擦拭脫脂過的干燥、清潔、無油污、無劃痕的新玻片，于玻片磨砂端用鉛筆在背面左端1/3標注實驗編號和序號； 在生物安全柜內，小心打開標本容器，用折斷的

2、竹簽（需事先準備好）茬端挑取痰標本的膿樣、干酪樣部分，于玻片右側2/3處均勻涂抹成1020mm卵圓形痰膜，待自然干燥。.抗酸桿菌熒光染色檢查操作程序 （二）染色 1把痰片放在染色架上，痰片間距應大于10mm，火焰固定(5秒鐘火焰在玻片下方通過4次)；2.滴加0.1%金胺染液，蓋滿痰膜，保持染色 15分鐘。染色時應始終保持痰膜被染色液覆蓋，必要時可續(xù)加染色液。.抗酸桿菌熒光染色檢查操作程序 （二）染色 3流水自玻片上端輕緩沖洗，洗去染色液后傾斜玻片瀝去殘余水； 4滴加脫色液（3%鹽酸乙醇），脫色3分鐘或至痰膜無色； 5.流水自玻片上端輕洗，如果脫色不徹底，重復脫色操作；.抗酸桿菌熒光染色檢查操作

3、程序 （二）染色 6瀝去殘余水； 7滴加0.5%高錳酸鉀復染液，保持染色14分鐘（根據試劑說明書或經驗）； 流水自玻片上端輕洗，洗去復染液，瀝去殘余水，待自然干燥。.抗酸桿菌熒光染色檢查操作程序 （三）鏡檢和報告 使用汞光源燈或LED光源的熒光顯微鏡，用10目鏡，20物鏡觀察，發(fā)現疑似抗酸菌的桿狀物，轉用40物鏡確認。在黑暗背景下，抗酸桿菌呈黃色綠熒光，桿狀略彎曲。按下列標準報告結果： 1.抗酸桿菌陰性：連續(xù)觀察50個視野，未發(fā)現抗酸桿菌。.抗酸桿菌熒光染色檢查操作程序 （三）鏡檢和報告 2.抗酸桿菌（19條）：19條抗酸桿菌/50個視野（報告抗酸桿菌數）。 3.抗酸桿菌陽性（1）：1049條

4、抗酸桿菌/50個視野。 4.抗酸桿菌陽性（2）：19條抗酸桿菌/每視野。.抗酸桿菌熒光染色檢查操作程序 （三）鏡檢和報告 5.抗酸桿菌陽性（3）：1099條抗酸桿菌/每視野。 6.抗酸桿菌陽性（4）：100條抗酸桿菌/每視野。 鏡檢結果應及時記錄在“結核病細菌學實驗室登記本”和檢驗報告單上。.抗酸桿菌熒光染色檢查操作程序 （四）痰片保存 熒光染色的痰涂片，在存放過程中抗酸桿菌的熒光會隨時間的延長而衰減，因此，熒光染色的標本片必須盡快放置到避光環(huán)境、4冰箱保存，一般可保存半年。 注意:熒光染色的痰涂片必須避光低溫存放，否則陽性標本因熒光衰退，可導致抽查復檢時呈假陰性!.舜宇EX30顯微鏡熒光鏡操

5、作 簡要程序 1. 接通電源之前，確認熒光器組的調光手輪是斷開（OFF）狀態(tài)； 2. 把外接電源變壓器輸出接口（直流6V）插入LED熒光照明器組的電源插口，然后把另一端直接插到供電插座上； 3. 緩緩順時針方向開啟熒光器組件的調光手輪，不必開到最大； 4.將熒光濾光塊箭頭切換到指向Flourescence標志.舜宇EX30顯微鏡熒光鏡操作 簡要程序 5.把熒光染色并已干燥的痰片裝入載物臺，目鏡10配合物鏡20尋找熒光物，在黑暗背景中尋找到熒光鏡象，發(fā)現形似抗酸桿菌的熒光物時，轉用40物鏡確認。 6.鏡檢完畢，逆時針方向旋轉熒光器組件的調光手輪至關斷（OFF）位置，最后關斷電源插座開關或撥出顯微

6、鏡變壓器供電端的插頭。 (鏡檢后的標本置于標本盒內，放4冰箱避光保存). 萋尼氏法與熒光法的主要區(qū)別： .抗酸桿菌熒光染色檢查質量控制 主要包括：標本收集、試劑、涂片、染色操作、顯微鏡維護、鏡檢和結果登記及痰片的保存。 1.標本收集：用密封有蓋盒收集痰標本，容器應標明病姓名、送檢日期及門診號。標本性質：應為深咳痰液，痰性狀類別：膿樣痰、干酪樣痰、血性樣痰、膿性粘液痰和水樣痰。.抗酸桿菌熒光染色檢查質量控制 2.試劑：染液外觀無沉淀、無懸浮物（金胺O非常穩(wěn)定，一般不產生沉淀），貯存環(huán)境避光通風、避免高溫，每次使用后及時蓋緊，已開瓶的試劑的使用，一般控制在6個月內用完或棄去。 3.涂片：應當取痰的

7、膿樣、干酪樣部分，于玻片右側2/3均勻涂成1020mm痰膜，自然干燥，染色前固定。.抗酸桿菌熒光染色檢查質量控制 4.染色：初染15分鐘要避免染液干燥，可續(xù)加染液；脫色符合要求，復染操作根據試劑說明書或經驗控制好時間，時間過長可導致熒光亮度消失。初染、脫色、復染的水洗后，都要瀝去玻片上的殘余水。 5.顯微鏡維護：防塵、防潮、防震、避免陽光直射，按操作規(guī)范使用，定期清掃灰塵。為延長光源燈的使用壽命，一般不把光源調到最強，并且注意使用后及時關閉光源燈開關和變壓器電源。.抗酸桿菌熒光染色檢查質量控制 6.鏡檢：鏡頭清晰，無霉菌，視野清晰，物鏡20尋找黑暗背景中的熒光鏡象，發(fā)現形似抗酸桿菌的時，用40物鏡確