粗糙鏈孢霉的四分子分析

1、粗糙鏈孢霉的四分子分析粗糙鏈孢霉的四分子分析 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解粗糙鏈孢霉的雜交方法；、了解粗糙鏈孢霉的雜交方法；2、通過(guò)、通過(guò)Lys和和Lys雜交后代表現(xiàn)型的分析，雜交后代表現(xiàn)型的分析，了解順序四分子的基因作圖方法；了解順序四分子的基因作圖方法；3、加深分離和交換定律的理解，了解基因轉(zhuǎn)變、加深分離和交換定律的理解，了解基因轉(zhuǎn)變現(xiàn)象?，F(xiàn)象。 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理u粗糙鏈孢霉粗糙鏈孢霉 ( Neurosporocrassa ) 屬真菌的子囊菌屬真菌的子囊菌綱。兩種不同接合型菌株的結(jié)合受一對(duì)等位基因綱。兩種不同接合型菌株的結(jié)合受一對(duì)等位基因控制，可驗(yàn)證分離規(guī)律?？刂疲沈?yàn)證分離規(guī)

2、律。u利用粗糙孢霉利用粗糙孢霉Lys和和Lys雜交，野生型孢子成熟雜交，野生型孢子成熟較早，缺陷型子囊孢子成熟較遲的特點(diǎn)，觀察雜較早，缺陷型子囊孢子成熟較遲的特點(diǎn)，觀察雜交后代的表型并進(jìn)行分析交后代的表型并進(jìn)行分析 ，可用于著絲粒作圖。，可用于著絲粒作圖。粗糙鏈孢霉的生活周期粗糙鏈孢霉的生活周期（接合型與高等動(dòng)植物中性別的不同）（接合型與高等動(dòng)植物中性別的不同）四分子分析用于驗(yàn)證基因分離規(guī)律四分子分析用于驗(yàn)證基因分離規(guī)律（Lys+Lys+） （Lys-Lys-） 合子（合子（+/-+/-） 子囊孢子子囊孢子1 1：1 1分離：分離：4 4個(gè)黑色（個(gè)黑色（+ +） 4 4個(gè)灰色（個(gè)灰色（- -）

3、順序四分子分析用于著絲粒作圖順序四分子分析用于著絲粒作圖目的基因與著絲粒之間發(fā)生重組目的基因與著絲粒之間發(fā)生重組1、著絲粒為、著絲粒為M1分離分離2、目的基因的分離、目的基因的分離 M1分離：目的基因與著絲粒之間未發(fā)生重組，分離：目的基因與著絲粒之間未發(fā)生重組，產(chǎn)生非重組型子囊產(chǎn)生非重組型子囊M2分離：目的基因與著絲粒之間發(fā)生重組，產(chǎn)分離：目的基因與著絲粒之間發(fā)生重組，產(chǎn)生重組型子囊生重組型子囊lys C交換型子囊與非交換型子囊的形成交換型子囊與非交換型子囊的形成非交換型子囊非交換型子囊 M1交換型子囊交換型子囊 M2目的基因在目的基因在M1分離，產(chǎn)生非重組型子囊分離，產(chǎn)生非重組型子囊目的基因

4、在目的基因在M2分離，產(chǎn)生重組型子囊分離，產(chǎn)生重組型子囊 + + + + - - - -+ + - - + + - - - + + - - + + - - + + + + - -+ + - - - - + + 非正常分離子囊非正常分離子囊基因轉(zhuǎn)換：一個(gè)基因在聯(lián)會(huì)過(guò)基因轉(zhuǎn)換：一個(gè)基因在聯(lián)會(huì)過(guò)程中受到等位基因的影響而發(fā)程中受到等位基因的影響而發(fā)生變化?；蜣D(zhuǎn)換總是伴隨著生變化。基因轉(zhuǎn)換總是伴隨著染色體之間的交換染色體之間的交換M后分離：后分離：基因轉(zhuǎn)換基因轉(zhuǎn)換產(chǎn)生不正常分離子囊產(chǎn)生不正常分離子囊著絲粒和基因之間的重組值的計(jì)算著絲粒和基因之間的重組值的計(jì)算 基因與著絲粒之間的圖距為去掉的重組值基因與

5、著絲粒之間的圖距為去掉的重組值M2分裂分離子囊數(shù)分裂分離子囊數(shù)子囊總數(shù)子囊總數(shù)1/2100%三、實(shí)驗(yàn)用品三、實(shí)驗(yàn)用品1、材料：粗糙鏈孢霉野生型菌株，、材料：粗糙鏈孢霉野生型菌株，Lys+。 粗糙鏈孢霉賴氨酸缺陷型菌株，粗糙鏈孢霉賴氨酸缺陷型菌株，Lys-。2、藥品：、藥品：瓊脂、蔗糖、玉米粒、土豆、瓊脂、蔗糖、玉米粒、土豆、 5次次氯酸鈉（氯酸鈉（NaClO）、）、5石碳酸。石碳酸。3、器具：顯微鏡、鑷子、解剖針、接種針、載玻片、器具：顯微鏡、鑷子、解剖針、接種針、載玻片、試管、培養(yǎng)皿試管、培養(yǎng)皿 、 恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、濾恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、濾紙、三角瓶、水浴鍋。紙、三角瓶、水浴鍋。

6、四、實(shí)驗(yàn)操作流程四、實(shí)驗(yàn)操作流程1、菌種活化、菌種活化 ：將：將Lys和和Lys菌株分別接種在完全培養(yǎng)基上，菌株分別接種在完全培養(yǎng)基上，28培養(yǎng)培養(yǎng)5d左右。左右。2、雜交、雜交 ：將兩種親本菌株分生孢子或菌絲接種到雜交培養(yǎng)基：將兩種親本菌株分生孢子或菌絲接種到雜交培養(yǎng)基上，培養(yǎng)上，培養(yǎng)57d，形成黑色子囊果。，形成黑色子囊果。3、子囊果處理：在有子囊果的試管中加少量無(wú)菌水，搖動(dòng)片、子囊果處理：在有子囊果的試管中加少量無(wú)菌水，搖動(dòng)片刻，把水倒入三角瓶中，小組集中煮沸，防止孢子飛揚(yáng)。刻，把水倒入三角瓶中，小組集中煮沸，防止孢子飛揚(yáng)。4、顯微觀察：取一載玻片，加、顯微觀察：取一載玻片，加12滴滴5

7、次氯酸鈉，用接種次氯酸鈉，用接種環(huán)挑出子囊果，放在載玻片上，用另一載玻片蓋上，用手環(huán)挑出子囊果，放在載玻片上，用另一載玻片蓋上，用手指壓片，壓破子囊果，在低倍鏡下觀察。指壓片，壓破子囊果，在低倍鏡下觀察。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1、觀察一定數(shù)目的子囊果，記錄每個(gè)完整子囊的類型，計(jì)算、觀察一定數(shù)目的子囊果，記錄每個(gè)完整子囊的類型，計(jì)算Lys基因與著絲粒距離?；蚺c著絲粒距離。 2、記錄你所觀察到的基因轉(zhuǎn)變現(xiàn)象。、記錄你所觀察到的基因轉(zhuǎn)變現(xiàn)象。思考題：思考題：1 1、用圖表示第六種子囊類型的形成。、用圖表示第六種子囊類型的形成。2、假設(shè)在基因與著絲點(diǎn)之間發(fā)生了雙交換，你的數(shù)據(jù)和計(jì)算假設(shè)

8、在基因與著絲點(diǎn)之間發(fā)生了雙交換，你的數(shù)據(jù)和計(jì)算結(jié)果會(huì)發(fā)生怎樣的偏差？結(jié)果會(huì)發(fā)生怎樣的偏差？實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果子囊類型子囊類型觀察數(shù)量觀察數(shù)量 （5:3） （3:5） （6:2） （2:6） （4:4不正常）不正常）（糞殼菌子囊孢子顏色遺傳）糞殼菌子囊孢子顏色遺傳）0.060.050.0085:36:2不規(guī)則 4:4正常正常 4 : 4 98.825:35:3、3:53:5或或6:26:2、2:62:6或或3:13:1、1:31:3都都屬于不規(guī)則，屬于不規(guī)則，說(shuō)說(shuō)明減數(shù)分裂的明減數(shù)分裂的4個(gè)個(gè)產(chǎn)物中，一個(gè)基產(chǎn)物中，一個(gè)基因轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪坏纫蜣D(zhuǎn)變?yōu)榱硪坏任换蛭换蚧蜣D(zhuǎn)變現(xiàn)象。 rare except

9、ions有時(shí)出現(xiàn)如圖結(jié)果有時(shí)出現(xiàn)如圖結(jié)果參考結(jié)果參考結(jié)果六、注意事項(xiàng)六、注意事項(xiàng)1、菌種活化及雜交要注意無(wú)菌操作。、菌種活化及雜交要注意無(wú)菌操作。 2、賴氨酸缺陷型接種在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不好，、賴氨酸缺陷型接種在完全培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不好，需要加適量賴氨酸。需要加適量賴氨酸。3、雜交后培養(yǎng)溫度要控制在、雜交后培養(yǎng)溫度要控制在25；30以上抑制以上抑制原子囊果的形成。原子囊果的形成。4、用過(guò)的載玻片、鑷子和解剖針等物都需放入用過(guò)的載玻片、鑷子和解剖針等物都需放入5 5的石碳酸中浸泡后取出洗凈，以防止污染實(shí)驗(yàn)室。的石碳酸中浸泡后取出洗凈，以防止污染實(shí)驗(yàn)室。 5、注意觀察選擇的時(shí)間、注意觀察選擇的時(shí)間 L

10、ys子囊孢子成熟較遲，當(dāng)子囊孢子成熟較遲，當(dāng)Lys子囊孢子已子囊孢子已成熟呈黑色時(shí)，成熟呈黑色時(shí)， Lys子囊孢子還呈灰色，如果觀子囊孢子還呈灰色，如果觀察時(shí)間過(guò)早，所有的子囊孢子都未成熟，全為灰察時(shí)間過(guò)早，所有的子囊孢子都未成熟，全為灰色；觀察過(guò)遲，色；觀察過(guò)遲， Lys子囊孢子也已成熟，全為黑子囊孢子也已成熟，全為黑色，就不能分清各種子囊類型。色，就不能分清各種子囊類型。6、注意基因轉(zhuǎn)變現(xiàn)象、注意基因轉(zhuǎn)變現(xiàn)象 偶爾觀察到偶爾觀察到6 2、2 6、5 3、3 5或異?；虍惓５牡? ：4等分離比，是基因轉(zhuǎn)變?cè)斐傻??；蜣D(zhuǎn)變等分離比，是基因轉(zhuǎn)變?cè)斐傻??；蜣D(zhuǎn)變的頻率一般在的頻率一般在1%左右。左右。 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制 馬鈴薯培養(yǎng)基（基本培養(yǎng)基）：馬鈴薯培養(yǎng)基（基本培養(yǎng)基）：也可以代替完全培也可以代替完全培養(yǎng)基。將馬鈴薯洗凈去皮，切碎，取養(yǎng)基。將馬鈴薯洗凈去皮，切碎，取200g，加水，加水1000ml，煮熟，然后用紗布過(guò)濾，棄去殘?jiān)瑸V下的汁加煮熟，然后用紗布過(guò)濾，棄去殘?jiān)?，濾下的汁加2瓊瓊脂，脂，20g蔗糖，煮融，分裝到試管中?；?qū)ⅠR鈴薯切成蔗糖，煮融，分裝到試管中?；?qū)ⅠR鈴薯切成黃豆大小的碎塊，每支試管放黃豆大小的碎塊，每支試管放3-4粒，再加入融化好的瓊粒，再加入融化好的瓊脂、蔗糖。消毒后取出