GB坂崎腸桿菌檢驗

1、GB坂崎腸桿菌檢驗2022-3-32 Enterobacter sakazakii(ES)Enterobacter sakazakii(ES)2022-3-33內內容容第一部分：一般特征第一部分：一般特征第二部分：流行病學特征第二部分：流行病學特征第三部分：第三部分：ESES的檢驗的檢驗2022-3-34第一部分：一般特征第一部分：一般特征命名命名培養(yǎng)特征培養(yǎng)特征生化反應生化反應抵抗力抵抗力增殖能力增殖能力致病性致病性2022-3-35 1980 1980年之前一直被稱為年之前一直被稱為黃色陰溝腸桿菌黃色陰溝腸桿菌。 DNA-DNADNA-DNA雜交雜交 生化反應生化反應 黃色素黃色素 抗生素

2、敏感性抗生素敏感性 一、命名2022-3-36二、二、培養(yǎng)特征培養(yǎng)特征 G G無芽孢桿菌，兼性厭氧，在無芽孢桿菌，兼性厭氧，在6-476-47范范圍內均可生長，適溫圍內均可生長，適溫35-3735-37 營養(yǎng)要求不高：營養(yǎng)要求不高： VRBGAVRBGA、TSATSA、NANA、MACMAC、EMBEMB、其他、其他與其他常見腸桿菌相似與其他常見腸桿菌相似2022-3-37三、生化反應三、生化反應 生化反應結果D-山梨醇-產生吐溫80脂酶+細胞外Dnase+氧化酶試驗-黃色菌落 +-葡萄糖苷酶 +8ES及親緣關系較近的腸桿菌生化反應比較試驗生化反應1阪崎腸桿菌陰溝腸桿菌產氣腸桿菌成團腸桿菌日勾

3、維腸桿菌賴氨酸脫羧酶精氨酸雙水解酶鳥氨酸脫羧酶KCN生長v發(fā)酵:蔗糖()衛(wèi)矛醇()()核糖醇()棉子糖vD-山梨醇v-甲基-葡萄糖甙()D-阿拉伯糖醇()黃色素()注： ：90-100；() ：75-89%； V ：25-74；()：10 -24； ：0-9第三部分第三部分食品衛(wèi)生微生物學檢驗食品衛(wèi)生微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗阪崎腸桿菌檢驗2022-3-310主要內容主要內容一、制訂的主要依據(jù)一、制訂的主要依據(jù)二、二、食品衛(wèi)生微生物學檢驗食品衛(wèi)生微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢阪崎腸桿菌檢驗驗制訂的主要依據(jù)制訂的主要依據(jù) ISO 2006年“乳和乳制品中阪崎腸桿菌的檢測”（Milk and milk

4、 productsDetection of Enterobacter sakazakii）方法； 美國FDA 2002年頒布的“嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌的分離和計數(shù)”（Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula）方法； 2004年荷蘭乳及乳制品控制中心對各種阪崎腸桿菌檢測方法的比較研究； 雀巢研究中心2005年環(huán)境樣品中阪崎腸桿菌快速檢測方法； 阪崎腸桿菌快速檢測培養(yǎng)基DFI研究資料。 SN第一部分：分離與計數(shù)方法 第二部分：PCR方法 第三部分：熒光PCR

5、方法2022-3-313常見選擇性培養(yǎng)基常見選擇性培養(yǎng)基 DFI (Oxoid, UK)DFI (Oxoid, UK) ESIA (AES, France)ESIA (AES, France) R RF F（R&F LaboratoriesR&F Laboratories，SwitzerlandSwitzerland） OK mediumOK medium 其他：國內阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、其他：國內阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、CES (Merck, CES (Merck, Germany)Germany)，NA+ NA+ -MUG-MUG2022-3-314顯色培養(yǎng)基的特點顯色培養(yǎng)基

6、的特點 -葡萄糖苷酶活性葡萄糖苷酶活性指示劑：指示劑：5-溴溴-4-氯氯-3-吲哚吲哚- - ，D-D-吡喃葡糖甙（吡喃葡糖甙（X X GlcGlc）4-4-甲基傘形酮甲基傘形酮- - -D-D-葡糖苷（葡糖苷（ -MUG-MUG）1.1.4-4-鄰硝基苯鄰硝基苯- - -D-D-吡喃葡糖甙吡喃葡糖甙 2022-3-3152022-3-316選擇性培養(yǎng)基的選擇選擇性培養(yǎng)基的選擇1 1. . FDAFDA方法使用方法使用VRBGAVRBGA，ISO ISO 方法中使用方法中使用ESIAESIA，本方，本方法中我們選用法中我們選用DFIDFI。和和DFIDFI的基本原理相似，二者都是根據(jù)的基本原理

7、相似，二者都是根據(jù)ESES能產生能產生-葡萄糖苷酶，分解底物葡萄糖苷酶，分解底物XaGlcXaGlc產生有色菌落。產生有色菌落。對對ESES的選擇性差，的選擇性差，ESES、陰溝腸桿菌和成團腸桿菌等、陰溝腸桿菌和成團腸桿菌等多種腸道菌都可以在該平板上生長并產生粉紫色多種腸道菌都可以在該平板上生長并產生粉紫色菌落，膽汁酸沉淀形成紫色暈圈。菌落，膽汁酸沉淀形成紫色暈圈。即：不能觀察到即：不能觀察到ESES的特征性菌落。的特征性菌落。2022-3-3顯色培養(yǎng)基的選擇性較好顯色培養(yǎng)基的選擇性較好 DFIDFI對對ESES的選擇性較好，的選擇性較好，ESES形成的藍綠色特征性菌落易形成的藍綠色特征性菌落

8、易于辨認，而且：于辨認，而且： 硫化氫指示劑可以區(qū)分硫化氫指示劑可以區(qū)分ESES和產生少量和產生少量-葡萄糖苷酶但葡萄糖苷酶但H H2 2S S陽陽性菌株（如普通變形桿菌）。性菌株（如普通變形桿菌）。 ESES都可以在都可以在DFIDFI平板上生長并產生藍綠色菌落平板上生長并產生藍綠色菌落 其他常見菌在其他常見菌在DFIDFI平板的菌落顏色平板的菌落顏色白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏菌、泛菌屬的多種菌等菌、泛菌屬的多種菌等黃色菌落：赫氏埃希氏菌黃色菌落：赫氏埃希氏菌黑褐色、粉色或中心藍綠菌落：少量菌種黑褐色、粉色或中心藍綠菌落：

9、少量菌種 ESIA:ESIA:藍藍色，色，1-3mm1-3mm172022-3-3選擇性增菌肉湯的選擇選擇性增菌肉湯的選擇 FDAFDA方法選擇方法選擇EEEE肉湯，肉湯，ISOISO方法選擇方法選擇mLST-VmmLST-Vm，即在，即在LSTLST中加入中加入NaclNacl和和VmVm。本標準使用。本標準使用mLST-VmmLST-Vm。 EEEE肉湯適合所有腸道菌群的生長繁殖，這就可能肉湯適合所有腸道菌群的生長繁殖，這就可能對對ESES的生長產生競爭性抑制作用，降低檢出率。的生長產生競爭性抑制作用，降低檢出率。 研究證明與其他腸桿菌科細菌（如沙門氏菌，大研究證明與其他腸桿菌科細菌（如沙

10、門氏菌，大腸埃希氏菌等）相比，腸埃希氏菌等）相比，ESES具有較高的耐滲透壓能具有較高的耐滲透壓能力。加入的力。加入的NaclNacl在保證在保證ESES良好生長的同時，可以良好生長的同時，可以有效地抑制上述其他細菌的生長。有效地抑制上述其他細菌的生長。 VmVm可有效地抑制可有效地抑制G+G+菌的生長。而較高的生長溫度菌的生長。而較高的生長溫度可以進一步抑制其他細菌的生長?？梢赃M一步抑制其他細菌的生長。2022-3-319二、食品衛(wèi)生微生物學檢驗二、食品衛(wèi)生微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗阪崎腸桿菌檢驗2022-3-320本標準修改采用本標準修改采用 ISO/TS 22964 （ 1st edit

11、ion 2006-02-01 ）Milk and milk products Detection of Enterobacter sakazakii FDA July 2002; Revised August 2002 Isolation and Enumeration of Enterobacter sakazakii from Dehydrated Powdered Infant Formula 2022-3-321第一法：阪崎腸桿菌的檢驗第一法：阪崎腸桿菌的檢驗第二法：阪崎腸桿菌的計數(shù)第二法：阪崎腸桿菌的計數(shù)2022-3-322第一法第一法 阪崎腸桿菌的檢驗阪崎腸桿菌的檢驗阪崎腸桿菌檢驗

12、程序阪崎腸桿菌檢驗程序 報 告TSA251，48h4h生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂361，24 h2h挑取藍綠色菌落1mL + mLST-Vm 10mL440.5，24 h2h檢樣100 g（mL）+BPW稀釋液 900 mL361，18 h2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生 化 鑒 定100 g（ mL ）2022-3-3245.1 5.1 前增菌和增菌前增菌和增菌 左圖：未混合；左圖：未混合； 右圖：混合后。右圖：混合后。加樣入已預熱到44的BP中2022-3-3255.2 分離分離DFIDFI36361124 h24 h2h2h2022-3-326TSATSA： 25 25 培養(yǎng)后培養(yǎng)后

13、典型典型ESES：黃色：黃色陰性對照陰性對照E. coli E. coli ATCC 25922ATCC 25922：白色菌落：白色菌落黃色素黃色素2022-3-3275.3 鑒定（生化反應）鑒定（生化反應）生化試驗特征黃色素產生氧化酶L-賴氨酸脫羧酶L-鳥氨酸脫羧酶（）L-精氨酸雙水解酶檸檬酸水解()發(fā)酵：D-山梨醇（）L-鼠李糖D-蔗糖D-蜜二糖苦杏仁甙注：99%陽性；99%陰性；（）90%99%陽性；（）90%-99%陰性。2022-3-328商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應用商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應用 推薦使用的推薦使用的ESES生化鑒定方法有很多，主要有生化鑒定方法有很多，主要有API API 20

14、E20E，ID 32EID 32E，Biolog GN2 MicroPlateBiolog GN2 MicroPlate，VITEK VITEK GNI+GNI+等。等。上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國家和組上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國家和組織的標準采用?？椀臉藴什捎?。 在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是API 20EAPI 20E和和Vitek GNI+Vitek GNI+。2022-3-329API 20EAPI 20E生化鑒定板典型生化反應圖示生化鑒定板典型生化反應圖示 API 20E反應編碼API 20E結果評價3345 373Excellent identification3305 173Excellent identification3305 363Very good identification3305 373Good iden