姜黃素對(duì)肝纖維化大鼠肝組織ⅠⅢⅣ型膠原的影響

1、姜黃素對(duì)肝纖維化大鼠肝組織，型膠原的影響        【摘要】  目的觀察姜黃素對(duì)肝纖維化大鼠肝組織，型膠原的影響。方法四氯化碳加酒精制備大鼠肝纖維化模型，設(shè)正常對(duì)照組、病理模型組、姜黃素小劑量組、姜黃素中劑量組、姜黃素大劑量組、-干擾素組、復(fù)方鱉甲軟肝片組。結(jié)束后肝組織作HE染色、膠原纖維染色、網(wǎng)狀纖維染色觀察肝組織纖維化程度；免疫組織化學(xué)方法（SABC法）檢測(cè)肝組織，型膠原的含量。結(jié)果和病理模型組比較，姜黃素大劑量組大鼠、姜黃素中劑量組大鼠SSS計(jì)分值明顯降低（P<0.05），肝組織，型膠原含

2、量明顯降低，有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論姜黃素能夠降低肝組織，型膠原含量，降解肝組織，型膠原，具有治療肝纖維化的作用。 【關(guān)鍵詞】  姜黃素 肝纖維化 大鼠 膠原纖維    Abstract：ObjectiveTo study the effect of Curcumin on the type , and collagens of liver tissues in rats with Liver Fibrosis.MethodsAn animal model of liver fibrosis was made by subcutaneou

3、s injection of carbon tetrachloride and ethanol orally and randomly divided into blank control group, model control group, small curcumin group, middle curcumin group, large Curcumin group, -interferon group and Compound Biejiaruangan Tablet group.The degree of liver fibrosis was detected by H.E. st

4、aining, collagen fibre and reticular fibre staining. The contents of type , and collagens of liver tissues were detected by immunocytochemistry SABC method.ResultsThe results showed that SSS scores in large and middle curcumin group were significantly lower than that of model control group (P0.05),

5、and so did the content of type , and collagens of liver tissues.ConclusionCurcumin can degrade the type , and collagens of liver tissues and promote the recovery of liver fibrosis.    Key words：Curcumin;  Liver fibrosis;  Rats;  Collagen fibre    姜黃素是從姜黃屬

6、中藥中提取的一種酚性色素，近年研究發(fā)現(xiàn)具有抗肝纖維化作用。本實(shí)驗(yàn)觀察了姜黃素對(duì)肝纖維化大鼠肝組織，型膠原的影響，以期了解姜黃素抗肝纖維化的作用機(jī)理。    1  材料    1.1  動(dòng)物   一級(jí)SD大鼠96只，雄性，體重（200±20） g，由西安大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購進(jìn)。動(dòng)物合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第08-005號(hào)。    1.2  藥物及試劑CCl4分析純，西安化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)050124。姜黃素粉，分子式C21H20O6 上海試劑三廠生產(chǎn)

7、，批號(hào)050124，25 g/瓶，用0.5%羧甲基纖維素納制成混懸液備用1，濃度分別為10，20，40 mg/ml。羧甲基纖維素鈉：上海山浦化工有限公司生產(chǎn)，500 g/瓶，批號(hào)20050118。75%乙醇，500 ml/瓶，陜西祥泰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050302。復(fù)方鱉甲軟肝片：內(nèi)蒙古福瑞中蒙藥科技股份有限公司出品，0.5 g/片，生產(chǎn)批號(hào)20041204，用蒸餾水溶解62.5 mg/ml備用。注射用重組人-干擾素（IFN-）：麗珠生物工程制藥廠出品，100 萬u/支，生產(chǎn)批號(hào)20050201，用注射用水溶為80 u/ml備用。 ，型膠原抗體，均為0.2 ml濃縮性，由武漢博士德生物制品

8、有限公司生產(chǎn)，人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)病理教研室提供，批號(hào)200510。         2  方法    2.1  動(dòng)物模型制備2及分組將實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)抽取12只作為正常對(duì)照組（A組），其余84只大鼠實(shí)驗(yàn)第1天每只皮下注射50%四氯化碳植物油溶液0.5 ml /100 g體重,以后每3天皮下注射50%四氯化碳植物油溶液0.3 ml /100 g體重造模，從造模第2周開始給大鼠用25%酒精灌胃0.5 ml/100 g體重，隔天1次，第6周起，每周末從造

9、模動(dòng)物中隨機(jī)處死1只大鼠作肝纖維化病檢查，按照2000年西安會(huì)議病毒性肝炎防治方案肝纖維化分期標(biāo)準(zhǔn)來判斷肝纖維化程度3，直到有2期以上纖維化形成，即確定肝纖維化模型復(fù)制成功，造模共12周。造模結(jié)束時(shí)大鼠死亡5只，將剩余72只大鼠隨機(jī)分為6組：病理模型組(B組)、姜黃素小劑量組(C組)、姜黃素中劑量組(D組)、姜黃素大劑量組(E組) 、-干擾素組(F組)、復(fù)方鱉甲軟肝片組(G組)，每組12只。    2.2  治療給藥從第13周起開始給藥，A組、B組用生理鹽水灌胃，2 ml/只，1次/d，連續(xù)用藥8周；C組以姜黃素100 mg/kg體重灌胃，1次/d，連續(xù)

10、用藥8周；D組以姜黃素200 mg/kg體重灌胃4，1次/d，連續(xù)用藥8周；E組以姜黃素400 mg/kg體重灌胃，1次/d，連續(xù)用藥8周；F組以-干擾素0.2 mu/kg體重肌肉注射，1次/d，連續(xù)用藥8周；G組以復(fù)方鱉甲軟肝片0.625 g/kg體重灌胃，1次/d，連續(xù)用藥8周。各治療組的給藥劑量按成人常用劑量換算所得用量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)2。    2.3  標(biāo)本的采集與制備5治療結(jié)束分別給大鼠腹腔注射10%水合氯醛0.35 ml/100 g麻醉,頸總動(dòng)脈取血，2 ml/只，分離血清備檢（肝纖維化血清指標(biāo)檢測(cè)）。與此同時(shí)開腹剖取新鮮肝組織左葉，10%甲醛固定

11、，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚5 m 。    2.4  觀測(cè)指標(biāo)及檢測(cè)方法    3  結(jié)果    3.1  動(dòng)物死亡情況  造模結(jié)束時(shí)，大鼠死亡5只，死亡率為6.5%；治療結(jié)束時(shí)，A，E，C組大鼠無死亡，死亡率為0；D組和F組各死亡1只，死亡率為8.3%；B，G組大鼠各死亡2只，死亡率為16.7%。    3.2  肝纖維化組織學(xué)半定量計(jì)分系統(tǒng)（SSS）計(jì)分結(jié)果與正常對(duì)照組比較，病理模型組計(jì)分明顯增高（P<0.01），說明

12、造模后肝組織結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯變化；姜黃素小劑量組與病理模型組無差異（P>0.05）；姜黃素大劑量、姜黃素中劑量、復(fù)方鱉甲軟肝片、-干擾素4個(gè)治療組與病理模型組比較SSS計(jì)分明顯降低，有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）；姜黃素大劑量、姜黃素中劑量、復(fù)方鱉甲軟肝片、-干擾素4個(gè)治療組之間無差異（P>0.05）；姜黃素大劑量、姜黃素中劑量、復(fù)方鱉甲軟肝片、-干擾素與姜黃素小劑量比較有差異（P<0.05）。見表2。表2  肝纖維化組織學(xué)半定量計(jì)分系統(tǒng)與正常對(duì)照組比較，P<0.01；與病理模型組比較，P<0.05，P<0.01；與姜黃素小劑量

13、組比較，P<0.051             3.3  各組大鼠肝組織，型膠原免疫組織化學(xué)指標(biāo)檢測(cè)    4  討論    肝纖維化是由于膠原和其它細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成與降解失衡，導(dǎo)致ECM在肝內(nèi)過量沉積。肝臟受損時(shí)，膠原合成逐步增多，降解逐步減少，可導(dǎo)致膠原的大量沉積，此時(shí)肝內(nèi)膠原增加5倍以上，主要為，型膠原明顯增多，其中以型膠原增生最明顯，故檢測(cè)，型膠原這3個(gè)指標(biāo)的變化對(duì)于了解肝纖維化程度

14、及藥物的治療效果具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)研究顯示，姜黃素可以改善肝纖維化時(shí)肝組織病結(jié)構(gòu)，可以降低肝組織，型膠原含量，從而能夠促進(jìn)肝內(nèi)ECM的降解，因此對(duì)肝纖維化的治療有確切的效果；姜黃素在降低肝纖維化大鼠肝組織，型膠原含量及改善肝纖維化時(shí)肝組織病理學(xué)結(jié)構(gòu)方面，其效果與復(fù)方鱉甲軟肝片和-干擾素基本相同；姜黃素對(duì)肝纖維化的治療有一定的量效范圍，大劑量、中劑量有確切的效果，小劑量則無治療作用；姜黃素對(duì)肝纖維化的治療機(jī)理可能與其降解肝組織，型膠原有關(guān)?！尽?#160; 1 尤 紅，王寶恩，馬雪梅.中藥復(fù)方861抑制肝星狀細(xì)胞NF-kappaB活性的體外研究J.中華肝臟病雜志，2001，1(9)：73.2 施新猷.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)M.北京：人民軍醫(yī)出版社，2000： 335.3 陸倫根，曾民德，萬謨彬，等.肝纖維化病理學(xué)分級(jí)分期及與非創(chuàng)傷性診斷檢測(cè)關(guān)系的初步研究J.肝臟，2000，5（4）:194.4 寧 勇，劉曉城.姜黃素對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用機(jī)制研究J.湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 200