生化檢驗項目校準

1、LUZHOU PEOPLES HOSPITAL生化檢驗項目校準LUZHOU PEOPLES HOSPITAL 校準：在規(guī)定條件下，為確定測量儀器校準：在規(guī)定條件下，為確定測量儀器( (或或測量系統(tǒng)測量系統(tǒng)) )所指示的量值，或?qū)嵨锪烤咚甘镜牧恐?，或?qū)嵨锪烤? (或參考或參考物質(zhì)物質(zhì)) )所代表的值，與對應(yīng)的由標準所復(fù)現(xiàn)的量所代表的值，與對應(yīng)的由標準所復(fù)現(xiàn)的量值之間關(guān)系的一組操作。值之間關(guān)系的一組操作。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL儀器的性能驗證：儀器的性能驗證： 零點漂移零點漂移 波長準確度及重復(fù)性波長準確度及重復(fù)性 雜散光雜散光 吸光度正確度吸光度正確度 吸光度重復(fù)性吸光度

2、重復(fù)性 吸光度線性誤差吸光度線性誤差 交叉污染率交叉污染率 溫度正確度溫度正確度 比色杯間差距比色杯間差距檢測項目校準檢測項目校準LUZHOU PEOPLES HOSPITALLUZHOU PEOPLES HOSPITAL項目校準主要涉及內(nèi)容項目校準主要涉及內(nèi)容 校準方法的選擇校準方法的選擇 校準品的選擇及準備校準品的選擇及準備 校準頻率的選擇校準頻率的選擇 校準后的驗證校準后的驗證 問題討論問題討論LUZHOU PEOPLES HOSPITAL校準方法的選擇校準方法的選擇LUZHOU PEOPLES HOSPITALK K因子法（因子法（+ -+ -）：）：理論理論k k值：根據(jù)理論摩爾消光

3、系數(shù)來計算。通常試值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)來計算。通常試劑生產(chǎn)廠家給出的劑生產(chǎn)廠家給出的k k值都屬于。值都屬于。實測實測K K值：是根據(jù)儀器實測的摩爾消光系數(shù)來設(shè)置值：是根據(jù)儀器實測的摩爾消光系數(shù)來設(shè)置K K值值校準校準k k值：是根據(jù)儀器當前的實際狀態(tài)，試劑的穩(wěn)值：是根據(jù)儀器當前的實際狀態(tài)，試劑的穩(wěn)定性等通過校準品校準后得到的定性等通過校準品校準后得到的K K值。值。 K K因數(shù)法適用的分析方法有一點終點法，兩點因數(shù)法適用的分析方法有一點終點法，兩點終點法，兩點速率法，多點速率法。終點法，兩點速率法，多點速率法。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL線性校準（線性校準（Linear

4、Linear）：其反應(yīng)為線性（直線）：其反應(yīng)為線性（直線），一般只需一個校準品進行校準。，一般只需一個校準品進行校準。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL非線性法：又稱非直線性校準法非線性法：又稱非直線性校準法 非線性法包非線性法包括括logit-loglogit-log法、指數(shù)函數(shù)法、樣條函數(shù)法等法、指數(shù)函數(shù)法、樣條函數(shù)法等方法方法Logit-log3pLogit-log3p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。P P表表示參數(shù)之意，由示參數(shù)之意，由3 3個參數(shù)（個參數(shù)（S1AbsS1Abs、

5、k k、a a）參與）參與計算。計算。S1AbsS1Abs表示試劑空白，表示試劑空白，K K表示校準所得斜表示校準所得斜率，率，a a表示近似常數(shù)。表示近似常數(shù)。LUZHOU PEOPLES HOSPITALlogit-log4plogit-log4p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL 樣條函數(shù)法（樣條函數(shù)法（splinespline）：是將每一標準液測定的）：是將每一標準液測定的吸光度連接起來（點對點），形成一個完整曲線吸光度連接起來（點對點），形成一個

6、完整曲線，即為曲線擬合。該曲線擬合優(yōu)于折線法校準。，即為曲線擬合。該曲線擬合優(yōu)于折線法校準。LUZHOU PEOPLES HOSPITALlogit-logXplogit-logXp與樣條函數(shù)法與樣條函數(shù)法拋物線型拋物線型( (左下圖左下圖) )，則多考慮用，則多考慮用logiclogic方法擬合。方法擬合。曲線類型不確定時，或校準曲線類型如圖曲線類型不確定時，或校準曲線類型如圖12-3712-37所示所示的的S S型非線性校準類型，則多考慮型非線性校準類型，則多考慮SplainSplain方法擬合。方法擬合。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL校準品的選擇及準備校準品的選擇及準備校

7、準品：含有已知量的欲測物，用以校準該測定方法的數(shù)值，它與該方法、試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)性誤差。l最好為人血清基質(zhì)，減少基質(zhì)效應(yīng)l儀器、試劑、校準品的配套性l如有可能校準品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)l要有明確的不確定度LUZHOU PEOPLES HOSPITALl冰凍產(chǎn)品的處理步驟冰凍產(chǎn)品的處理步驟：從從-70-70或或-20-20冰箱中取出冰箱中取出樣本，置室溫（樣本，置室溫（18-2518-25）下平衡，使之完全融化下平衡，使之完全融化，溫和混勻。，溫和混勻。l凍干產(chǎn)品的復(fù)溶步驟：凍干產(chǎn)品的復(fù)溶步驟： 從冰箱中取出樣本，置室從冰箱中取出樣本

8、，置室溫（溫（18-2518-25）下平衡，并放置在水平桌面上，輕下平衡，并放置在水平桌面上，輕拍小瓶，以確保所有物質(zhì)已沉淀在該小瓶底部，小拍小瓶，以確保所有物質(zhì)已沉淀在該小瓶底部，小心拔開膠塞，采用心拔開膠塞，采用已校準的移液管已校準的移液管沿瓶壁緩慢精確沿瓶壁緩慢精確加入規(guī)定體積的去離子水，壓膠塞到原位后置室溫加入規(guī)定體積的去離子水，壓膠塞到原位后置室溫下使之完全溶解，溫和混勻。下使之完全溶解，溫和混勻。 應(yīng)按廠家提供說明書操作應(yīng)按廠家提供說明書操作。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL 校準品濃度水平及個數(shù)選擇校準品濃度水平及個數(shù)選擇 校準至少包含你需要報告結(jié)果的內(nèi)容校準至少包

9、含你需要報告結(jié)果的內(nèi)容/ /范圍。范圍。 校準范圍也定義為分析方法的工作范圍。校準范圍也定義為分析方法的工作范圍。 個數(shù)要與儀器要求相匹配個數(shù)要與儀器要求相匹配LUZHOU PEOPLES HOSPITAL案例分析案例分析一、現(xiàn)象：一、現(xiàn)象：某品牌某品牌HCYHCY試劑（儀器：雅培試劑（儀器：雅培 C8000 C8000），校準無法通過），校準無法通過，出現(xiàn)，出現(xiàn)“校準失敗校準失敗”的報警。的報警。試劑參數(shù)為：試劑參數(shù)為：Primary wavelengthPrimary wavelength：340nm340nm； Secondary wavelengthSecondary waveleng

10、th：700nm700nm； Main read time Main read time：31-3331-33； Blank read time Blank read time：26-2826-28； Sample volume Sample volume：10ul10ul； R1 reagent volume R1 reagent volume：185ul185ul； R2 reagent volume R2 reagent volume：50ul50ul； Calibration method Calibration method：SplineSpline； 校準品個數(shù)設(shè)置：校準品個數(shù)設(shè)置

11、：3 3； 濃度分別設(shè)置為：濃度分別設(shè)置為：0 0、1010、33umol/L33umol/L。 LUZHOU PEOPLES HOSPITAL二、了解情況：二、了解情況： 查看校準結(jié)果，發(fā)現(xiàn)其每個濃度的吸光度實查看校準結(jié)果，發(fā)現(xiàn)其每個濃度的吸光度實際在該儀器上已做出測定，分別為：際在該儀器上已做出測定，分別為：0 0：-0.0027 -0.0027 1010：-0.0344 33-0.0344 33：-0.0738-0.0738，但參與最終結(jié)果，但參與最終結(jié)果計算的計算的Cal FactorCal Factor（校準因數(shù)）卻顯示為（校準因數(shù)）卻顯示為0 0，說，說明該儀器并未通過所測定的吸光

12、度進行曲線擬合明該儀器并未通過所測定的吸光度進行曲線擬合，故出現(xiàn)，故出現(xiàn)“校準失敗校準失敗”報警。報警。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL三、處理三、處理：分別對分別對10umol/L10umol/L、33umol/L33umol/L的校準品進行對倍的校準品進行對倍稀釋，得到稀釋，得到5umol/L5umol/L、16.5umol/L16.5umol/L濃度的校準濃度的校準；把參數(shù)中校準品個數(shù)修改為：把參數(shù)中校準品個數(shù)修改為：5 5；濃度設(shè)置修改為濃度設(shè)置修改為0 0、5 5、1010、16.516.5、33umol/L33umol/L。1.1. 仍采用仍采用SplineSplin

13、e定標模式重新進行校準，后校準定標模式重新進行校準，后校準順利通過，結(jié)果如下：順利通過，結(jié)果如下： 0 umol/L0 umol/L5 umol/L5 umol/L10 umol/L10 umol/L16.5 16.5 umol/Lumol/L33 umol/L33 umol/LCal Cal FactorFactor -87.2-87.2-213.5-213.5-279.6-279.6-365.3-365.3吸光度吸光度-0.0032-0.0032-0.0195-0.0195-0.0366-0.0366-0.0558-0.0558-0.0744-0.0744LUZHOU PEOPLES HO

14、SPITAL5 5、之后校準顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準成功、之后校準顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準成功四、分析四、分析：全自動生化分析儀的校準模式設(shè)置中均有線性或全自動生化分析儀的校準模式設(shè)置中均有線性或非線性的選擇。當我們對其進行設(shè)置時，會根據(jù)非線性的選擇。當我們對其進行設(shè)置時，會根據(jù)試劑盒的反應(yīng)原理選擇合適的校準模式。試劑盒的反應(yīng)原理選擇合適的校準模式。通常情況下，常規(guī)的生化項目我們會選擇線性模通常情況下，常規(guī)的生化項目我們會選擇線性模式校準，而免疫比濁項目我們會選擇非線性模式式校準，而免疫比濁項目我們會選擇非線性模式校準。校準。若選擇線性校準，往往我們只需帶一個校準品進若選擇線性校準，往

15、往我們只需帶一個校準品進行兩點校準即可行兩點校準即可。1.1. 若選擇非線性校準時，我們會帶多個濃度校準品若選擇非線性校準時，我們會帶多個濃度校準品進行多點校準。進行多點校準。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL5.5.不同的儀器，在做非線性校準時所要求的校準品不同的儀器，在做非線性校準時所要求的校準品個數(shù)是不同的。個數(shù)是不同的。例如：例如： 日立、奧林巴斯等儀器，要求至少帶三個濃度的日立、奧林巴斯等儀器，要求至少帶三個濃度的校準品即可進行非線性擬合；校準品即可進行非線性擬合； 貝克曼、東芝等儀器，則要求至少帶四個濃度的貝克曼、東芝等儀器，則要求至少帶四個濃度的校準品才進行非線性擬合

16、。校準品才進行非線性擬合。五、總結(jié)五、總結(jié)： 我們在進行新項目實驗前，除了選擇正確的校我們在進行新項目實驗前，除了選擇正確的校準模式外，還要根據(jù)該儀器的性能特點，選擇符準模式外，還要根據(jù)該儀器的性能特點，選擇符合要求的校準品個數(shù)，以保證實驗的順利進行。合要求的校準品個數(shù)，以保證實驗的順利進行。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL校準頻率的選擇校準頻率的選擇理想狀況下進行每批次檢測前都應(yīng)進行理想狀況下進行每批次檢測前都應(yīng)進行l(wèi)試劑改變了種類或更換了批號試劑改變了種類或更換了批號l儀器進行了大的維護維修或更換了重要的配件，儀器進行了大的維護維修或更換了重要的配件，如光源燈、濾光片等如光源

17、燈、濾光片等l室內(nèi)質(zhì)控出現(xiàn)了趨勢性變化或飄移（系統(tǒng)性誤室內(nèi)質(zhì)控出現(xiàn)了趨勢性變化或飄移（系統(tǒng)性誤差）；或者超出了實驗室規(guī)定接受限，采取了一差）；或者超出了實驗室規(guī)定接受限，采取了一般性糾正措施后，不能識別和糾正問題時般性糾正措施后，不能識別和糾正問題時l廠家試劑有明確校準時限規(guī)定的廠家試劑有明確校準時限規(guī)定的LUZHOU PEOPLES HOSPITAL校準后的驗證校準后的驗證校準后用校準品當樣本進行測試，看其值與定值之間的差異測定室內(nèi)質(zhì)控，看結(jié)果是否在控。參加室間質(zhì)評或返測已知濃度的室間質(zhì)評樣本。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL記錄每次校準結(jié)果，與之前的校正結(jié)果進行比較。記錄每次校準結(jié)果，與之前的校正結(jié)果進行比較。LUZHOU PEOPLES HOSPITAL問題討論問題討論 定值質(zhì)控品是否可以替代校準品？定值質(zhì)控品是否可以替代校準品？ 空白校準的選擇？空白校準的選擇？ K K值究竟