疏肝健脾方藥對(duì)非酒精性脂肪性肝病大鼠肝組織LXRα mRNA及蛋白表達(dá)的影響

1、疏肝健脾方藥對(duì)非酒精性脂肪性肝病大鼠肝組織LXR mRNA及蛋白表達(dá)的影響來(lái)源：創(chuàng)新醫(yī)學(xué)網(wǎng)作者：楊欽河,王文晶,馮高飛,何秀敏,張玉佩作者單位：暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510632【摘要】目的探討疏肝健脾方藥對(duì)非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝組織LXR mRNA及蛋白表達(dá)的影響。方法選用SD大鼠55只，隨機(jī)分為正常組、模型組、疏肝組(灌服3.2 gkg-1d-1劑量的柴胡疏肝散)、健脾組(灌服10.0 gkg-1d-1劑量的參苓白術(shù)散)、綜合組(灌服11.9 gkg-1d-1劑量的柴胡疏肝散和參苓白術(shù)散合方)，模型組15只，其余各組10只。采用灌飼高脂肪乳劑(10 ml/kg)的方法

2、復(fù)制大鼠NAFLD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，給藥8 w后處死動(dòng)物，腹主動(dòng)脈采血，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血脂及肝功;常規(guī)HE染色觀察肝組織病理變化;RT-PCR方法檢測(cè)肝組織LXR mRNA的表達(dá);免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肝組織LXR蛋白的表達(dá)。結(jié)果 與正常組相比，模型組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性明顯，血脂及肝功均有不同程度的升高(P0.05，P0.01)，大鼠肝組織LXR mRNA及蛋白表達(dá)明顯升高(P0.01);各給藥組血脂及肝功和肝組織LXR mRNA及蛋白的表達(dá)均較模型組顯著降低(P0.05，P0.01)，其中以健脾組下降最為明顯。結(jié)論 疏肝健脾方藥對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠NAFLD有較好的治療作用，其機(jī)制可能與其

3、下調(diào)肝臟LXR的表達(dá)有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】 非酒精性脂肪性肝病;疏肝健脾方藥;肝X受體基因;大鼠【Abstract】 Objective To investigate the effects of soothing liver and invigorating spleen recipes on the expression of LXR mRNA and protein in hepatic tissue of rats with non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). Methods 55 male SD rats were randomly div

4、ided into 5 groups: normal, model, soothing liver (receiving gavage of Chaihu Shugan Powder 3.2 gkg-1d-1), invigorating spleen (receiving gavage of Shen Ling Baizhu Powder 10.0 gkg-1d-1) and integrated groups (receiving gavage of Chaihu Shugan Powder and Shen Ling Baizhu Powder combination recipes11

5、.9 gkg-1d-1). 15 rats were in model group and 10 rats were in each of the other groups. Except the normal group, the rats in other groups were fed with high-fat emulsion by gastric perfusion (10 ml/kg) besides basic diet to induce NAFLD. After treatment for 8 weeks, the rats were executed to obtain

6、blood samples from aortaventralis. The contents of TC, TG, ALT, AST in the serum, as well as TC, TG in the hepatic homogenate were detected by automatic biochemical analyzer. The histopathological changes of hepatic tissue were observed by HE staining. The expression levels of LXR mRNA in liver tiss

7、ue were analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). The expression of protein LXR in the hepatic tissue was examined by immunohistochemistry. Results Compared with normal group, there were revealed medium fatty degeneration in hepatocytes in model group;the serum TC, TG, AL

8、T, AST levels and the liver levels of TC and TG in model group were increased in different degree (P0.05, P0.01);the expression of LXR mRNA and protein in the hepatic tissue were dramatically increased (P0.01). Compared with the normal group, the serum TC, TG, ALT, AST levels and the liver levels of

9、 TC, TG and the expression of LXR mRNA and protein in each treatment group were decreased in different degree (P0.05, P0.01), especially in the invigorating spleen group. Conclusions Soothing liver and invigorating spleen methods and recipes show certain therapeutic effect on rats with NAFLD, which

10、may be due to down-regulating expression of the liver LXR mRNA and protein in hepatocyte.【Key words】 Non-alcoholic fatty liver disease; Soothing liver and invigorating spleen methods and recipes; Liver X receptor ; Rats非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)作為一種遺傳-環(huán)境-代謝應(yīng)激相關(guān)性肝病，其發(fā)病率及檢出率日益增高，并呈現(xiàn)低齡化趨勢(shì)，在我國(guó)亦已成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病1，

11、2。各種原因引起脂質(zhì)代謝自穩(wěn)的破壞造成脂質(zhì)在肝內(nèi)大量異常蓄積是NAFLD發(fā)病機(jī)制中最關(guān)鍵、最基礎(chǔ)的環(huán)節(jié)之一。肝臟脂質(zhì)代謝的調(diào)控機(jī)制十分復(fù)雜，近年來(lái)研究表明3，4，LXR在肝臟中表達(dá)最多，參與了肝臟中脂肪的形成，膽固醇的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝，血糖水平及炎性因子的調(diào)節(jié)，是脂質(zhì)代謝通路的關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子,其調(diào)控功能異常可能成為多種代謝性相關(guān)疾病的共同病理生理基礎(chǔ)5，因此研究LXR在NAFLD脂質(zhì)代謝紊亂中的作用進(jìn)而揭示NAFLD的發(fā)病機(jī)制頗有意義。以往的研究發(fā)現(xiàn)，疏肝健脾方藥對(duì)NAFLD有良好的防治作用69，本實(shí)驗(yàn)從脂質(zhì)代謝的角度入手，研究LXR在NAFLD發(fā)病中的作用，旨在進(jìn)一步探討疏肝健脾方藥治療N

12、AFLD的分子機(jī)制,為NAFLD的中醫(yī)藥治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)健康雄性SD大鼠55只，體質(zhì)量(18015)g，購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(粵)2008-0002;粵監(jiān)證字：2008A020。分籠飼養(yǎng)于室溫2226，相對(duì)濕度60%80%，明暗各12 h的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。1.1.2 實(shí)驗(yàn)用藥疏肝方(柴胡疏肝散:柴胡6 g,川芎5 g,枳殼5 g,陳皮6 g,白芍5 g,香附5 g,炙甘草3 g);健脾方(參苓白術(shù)散:人參15 g,白術(shù)15 g,茯苓15 g,薏苡仁9 g,砂仁6 g,山藥15 g,桔梗6 g,白扁豆12 g

13、,蓮子9 g,炙甘草9 g);綜合方(柴胡疏肝散與參苓白術(shù)散合方)。上述藥物均為深圳華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司中藥配方顆粒劑，購(gòu)自暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥房。疏肝方及健脾方組成、劑量均參考第六版方劑學(xué)教材10，綜合方乃柴胡疏肝散與參苓白術(shù)散的合方。1.1.3 主要試劑Trizol試劑為美國(guó)Invitrogen公司產(chǎn)品;RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit為美國(guó)Fermentas公司產(chǎn)品;LXR引物和GAPDH引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)并合成;Taq DNA聚合酶、2000bp DNA Ladder、SYBE GREEN 1和DEPC處理水

14、均為廣州達(dá)暉生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;LXR一抗為山羊抗大鼠多克隆抗體為美國(guó)Santa Cruz公司的產(chǎn)品;免疫組化染色SABC試劑盒為武漢博士德生物工程有限公司的產(chǎn)品內(nèi)含5%BSA封閉液;二抗工作液：親和純化抗體，標(biāo)記長(zhǎng)臂生物素(山羊抗大鼠IgG);SABC：鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物;濃縮型DAB試劑是武漢博士德生物工程有限公司的產(chǎn)品;多聚賴氨酸是廣州普博儀器有限公司的產(chǎn)品;乙醇、氯仿、異丙醇均為國(guó)產(chǎn)分析純，及多聚甲醛、蘇木素、伊紅、二甲苯等常規(guī)試劑以及所用形態(tài)學(xué)玻片均購(gòu)于暨南大學(xué)設(shè)備資源管理處。1.2 方法1.2.1 高脂肪乳劑的配制11配制方法：取玉米油400 g置于2 000

15、ml的燒杯里，放在磁力攪拌器上加熱，待溫度升到100時(shí)，加入100 g膽固醇溶化，充分?jǐn)噭?，然后加?6.4 g(32 ml)吐溫-80，制成油相。同時(shí)在另一燒杯中加入蒸餾水300 ml、蔗糖150 g、全脂奶粉80 g，食鹽10 g和丙二醇31.1 g(3.2 ml)，放在磁力攪拌器上加熱至60，加入10 g脫氧膽酸鈉，充分?jǐn)嚢柚敝镣耆芙?，制成水相。然后將水相倒入油相中，充分混勻。待冷卻至約40左右加入復(fù)合維生素2.5 g，復(fù)合微量元素1.5 g充分?jǐn)噭颍粗瞥芍救閯?.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模及給藥方法按照隨機(jī)數(shù)字表將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為:正常組、模型組、疏肝組、健脾組、綜合組。模型組15只

16、，其余各組10只。正常組以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，其余各組除基礎(chǔ)飼料外，每天8:00AM灌飼高脂肪乳劑10 ml/kg 1次。所有動(dòng)物自由進(jìn)食飼料和飲清水，連續(xù)8 w。各藥物干預(yù)組大鼠在施以造模因素的同時(shí),按體重10 ml/kg給予相應(yīng)藥物,給藥劑量按人和動(dòng)物體表面積折算，其中疏肝組灌服柴胡疏肝散(含生藥量0.32 g/ml),健脾組灌服參苓白術(shù)散(含生藥量1.00 g/ml),綜合組灌服柴胡疏肝散和參苓白術(shù)散的合方(含生藥量1.19 g/ml)，正常組和模型組灌服同樣劑量的蒸餾水,每天下午1次。分別于飼養(yǎng)第6、8周，從模型組中隨機(jī)抽取2只，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，處死取肝臟進(jìn)行病理檢測(cè)，觀察于第8

17、周時(shí)可見中度脂肪變性，提示造模成功。1.3 指標(biāo)檢測(cè)各組動(dòng)物于末次給藥后，禁食不禁水12 h，所有大鼠以3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(0.1 ml/100 g)，腹主動(dòng)脈采血，取血后迅速摘取肝臟，距離肝邊緣0.5 cm處取相同部位肝右葉組織，用于相關(guān)檢測(cè)。1.3.1 肝組織病理染色距離肝邊緣0.5 cm處取相同部位肝右葉約2 cm2 cm0.3 cm組織小塊,以體積分?jǐn)?shù)10%甲醛固定標(biāo)本,常規(guī)石蠟包埋,作5 m連續(xù)切片,HE染色。1.3.2 脂質(zhì)及肝功檢測(cè)腹主動(dòng)脈采血，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST、TC、TG的含量。取肝組織0.1 g加入0.9 ml異丙醇中，勻漿，離心(4，3 000

18、r/min，10 min)，提取上清液，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝組織勻漿中TC、TG的含量。1.3.3 RT-PCR方法檢測(cè)肝組織LXR mRNA肝臟總RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):50mg肝組織液氮中研磨,利用RNA提取試劑盒提取總RNA,在波長(zhǎng)260 nm處紫外檢測(cè)RNA量,并計(jì)算濃度。采用Oligo(dT)逆轉(zhuǎn)錄法，依照RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas)說明書操作，將RNA通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA。引物設(shè)計(jì)：從Genebank中查找大鼠LXR基因序列，以大鼠GAPDH作為內(nèi)參照，用Primer5.0軟件系統(tǒng)對(duì)引物進(jìn)行

19、設(shè)計(jì)和分析，由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成，引物序列：LXR上游 5-ATTTCAGTTACAACCGGGAAGAC-3下游 5-ACCCAACCCTTTGACTCTCTTTA-3擴(kuò)增產(chǎn)物 540 bp;GAPDH上游 5-GCCAAAAGGGTCATCATCTC-3 下游 5-ACCTGGTCCTCAGTGTAGCC-3擴(kuò)增產(chǎn)物 497 bp。PCR擴(kuò)增：采用50 l體系進(jìn)行，取0.2 ml PCR反應(yīng)管，在冰盒上依次加入以下各試劑：5RT-Buffer 10 l，上游引物 0.5 l，下游引物 0.5 l，dNTP Mixture(各10 mM)0.5 l，Taq酶1 l，Rnase Fr

20、ee H2O 32.5 l，模板cDNA 5 l。反應(yīng)條件:預(yù)變性93 4 min,變性94 30 s,退火54 30 s,延伸72 1 min,35個(gè)循環(huán);延伸72 10 min,4終止反應(yīng)。采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳，將各組PCR產(chǎn)物和上樣緩沖液以51比例上樣,100 V、1 h電泳,顯示DNA條帶。應(yīng)用Image-Master VDS圖像掃描分析系統(tǒng)測(cè)定目的條帶與內(nèi)參條帶的吸光度值，LXRmRNA表達(dá)量用GAPDH內(nèi)參進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果用LXR條帶的光密度值/GAPDH條帶的光密度值表示。1.3.4 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肝組織LXR蛋白取距離肝邊緣0.5 cm處相同部位肝左葉組織小塊,大小

21、約2 cm2 cm0.3 cm,經(jīng)4%多聚甲醛溶液固定,常規(guī)脫水、石蠟包埋,作5 m連續(xù)切片,免疫組化SABC法染色，DAB顯色。采用SABC法檢測(cè)LXR蛋白表達(dá)水平。觀察LXR免疫組化染色部位，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷以細(xì)胞核或胞漿出現(xiàn)淡黃至深棕色顆粒，染色強(qiáng)度高于背景非特異性染色者為陽(yáng)性表達(dá)。用PBS液替代一抗作為陰性對(duì)照，每個(gè)標(biāo)本高倍鏡下取20個(gè)不同視野，經(jīng)暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室圖像分析中心的Leica Qwin V3圖象軟件進(jìn)行分析處理，體視學(xué)圖像分析顯示出各自的平均灰度值、著色面積區(qū)域百分比。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以xs表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較用單因素方差分析，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件

22、進(jìn)行分析。2 結(jié) 果2.1 肝臟病理染色常規(guī)HE染色顯示,對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)規(guī)則,細(xì)胞索排列整齊,肝竇正常，肝細(xì)胞呈多邊形,邊界清，無(wú)明顯病變，核圓結(jié)構(gòu)清晰，位于細(xì)胞中央，胞漿豐富紅染，細(xì)胞質(zhì)均勻,肝細(xì)胞內(nèi)無(wú)脂滴沉積。模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)明顯紊亂，肝細(xì)胞腫脹,胞質(zhì)中出現(xiàn)大小不等的脂滴空泡,以大泡性脂肪滴為主,核居邊,細(xì)胞界限不清。各藥物干預(yù)組脂滴空泡有所減少，肝細(xì)胞脂肪變性較模型組有不同程度改善(圖1)。圖1 大鼠肝組織病理變化(HE,200)2.2 脂質(zhì)及肝功檢測(cè)與正常組比較，模型組大鼠血清ALT、AST、TC、TG及肝組織中TC、TG含量明顯升高(P0.01、P0.05);與模型組比較，疏肝

23、組、健脾組及綜合組AST水平明顯降低(P0.05)，其中各藥物干預(yù)組組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各藥物干預(yù)組大鼠血清TC、TG 含量均明顯下降(P0.01、P0.05);各用藥組大鼠肝組織TC含量明顯降低(P0.05)，其中，以疏肝組下降趨勢(shì)更為明顯，健脾組、疏肝組大鼠肝組織TG含量明顯下降(P0.05)。見表1，表2。2.3 肝組織LXR mRNA的表達(dá)各組大鼠肝組織LXR mRNA均有不同程度的表達(dá)，模型組表達(dá)最高，與正常組比較有顯著性差異(P0.01);與模型組比較，各藥物干預(yù)組大鼠肝組織LXR mRNA表達(dá)水平顯著下降(P0.01或P0.05);各藥物組組間比較，LXR

24、mRNA表達(dá)水平由低到高依次為：健脾組疏肝組綜合組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3、圖2。表1 各組大鼠血清ALT、AST、TC、TG含量的比較2.4 肝組織LXR蛋白的表達(dá)LXR蛋白在各組動(dòng)物中均有表達(dá)，正常組大鼠肝組織內(nèi)僅有少量棕黃色顆粒散在分布;模型組肝組織內(nèi)棕黃色顆粒明顯增多,以肝竇周圍及匯管區(qū)明顯;各藥物干預(yù)組肝組織內(nèi)棕黃色顆粒較模型組不同程度減少且表達(dá)強(qiáng)度降低。圖像分析結(jié)果統(tǒng)計(jì)顯示：與正常組比較，模型組大鼠肝組織LXR蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01);與模型組比較，各藥物干預(yù)組大鼠肝組織LXR蛋白表達(dá)均有明顯下降(P0.05)，但兩者與綜合組比較均明顯降低(P0.05)。提示高脂肪乳劑可

25、誘導(dǎo)大鼠肝組織LXR蛋白表達(dá)升高;疏肝健脾方藥能下調(diào)NAFLD大鼠肝組織LXR蛋白表達(dá)水平，以健脾組表達(dá)最低，健脾方可能發(fā)揮了更為明顯的作用。見表3，圖3。表2 各組大鼠肝組織TC、TG含量的比較表3 各組大鼠肝組織LXR mRNA及蛋白的表達(dá)1：正常組;2：模型組;3：疏肝組;4：健脾組;5：綜合組圖2 各組大鼠肝組織LXR mRNA的表達(dá)圖3 各組大鼠肝組織LXR蛋白免疫組化圖片(DAB，200)3 討 論NAFLD 的典型特征是肝臟脂肪積聚，各種原因引起肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝自穩(wěn)的破壞致使脂質(zhì)在肝內(nèi)異常沉積，是肝脂肪變性的共同機(jī)制，也是NAFLD發(fā)病機(jī)制中最基礎(chǔ)、最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)之一12。肝X受體(

26、LXRs)是孤核受體家族的成員,因在肝臟表達(dá)豐富而命名。LXRs分為L(zhǎng)XR及LXR兩種亞型,均能被內(nèi)源性配體氧化固醇或人工合成配體激活后,與類視黃醇X受體(RXR)結(jié)合形成異二聚體，LXRs/RXR異二聚體通過與靶基因中稱為L(zhǎng)XR反應(yīng)元件(LXRE)的特定核苷酸序列結(jié)合而調(diào)節(jié)該基因的轉(zhuǎn)錄，從而影響機(jī)體的生理活動(dòng)3。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)LXR在肝臟中表達(dá)最為豐富，可以感知肝細(xì)胞內(nèi)氧化甾醇的含量,是調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝的重要核轉(zhuǎn)錄因子，也是目前為國(guó)內(nèi)外學(xué)者所關(guān)注的脂代謝通路的關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，與NAFLD密切相關(guān)13。另有研究發(fā)現(xiàn)，LXR在脂肪的生成、氧化、分泌、脂質(zhì)過氧化及炎癥因子的生成等多環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，

27、并且在同一環(huán)節(jié)中，由于其結(jié)合于不同的靶基因上，可能表現(xiàn)為相反的結(jié)果。LXR是一把雙刃劍，一方面，通過上調(diào)固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)、碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(ChREBP)等基因的表達(dá)，促進(jìn)脂肪酸的從頭合成及抑制脂酸的氧化，從而使TG在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積和增加ROS產(chǎn)生，導(dǎo)致NAFLD的形成與進(jìn)展14;另一方面，通過上調(diào)脂蛋白脂肪酶(LPL)、磷脂轉(zhuǎn)移蛋白(PLTP)、膽固醇-7羥基(CYP7A1)等基因的表達(dá)和拮抗NF-B炎癥信號(hào)通路，促進(jìn)脂肪酸的氧化、VLDL合成與分泌和抑制炎癥因子的生成，防止NAFLD的發(fā)生和發(fā)展15。LXR究竟在對(duì)NAFLD起著

28、保護(hù)作用，還是作為惡化因素推動(dòng)疾病的進(jìn)展尚未明確。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果說明高脂乳劑可能在蛋白和基因兩個(gè)水平上調(diào)肝臟LXR的表達(dá)，這與相關(guān)研究結(jié)果相一致16。進(jìn)一步提示了LXR可能在促進(jìn)NAFLD的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用和意義。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脂質(zhì)屬于精微物質(zhì)的范疇，為人體新陳代謝所必需，這種精微物質(zhì)來(lái)源于飲食水谷，而飲食物的消化吸收、水谷精微的輸布代謝，有賴于脾之運(yùn)化功能與肝之疏泄功能，二者相互協(xié)調(diào)、相互為用維持動(dòng)態(tài)平衡，即脂質(zhì)代謝自穩(wěn)態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)6，從初期到中期的NAFLD患者多為肝郁脾虛證,以疏肝、健脾法作為基本治法,運(yùn)用經(jīng)典方柴胡疏肝散及參苓白術(shù)散加減治療NAFLD收到了較好的效果。本實(shí)驗(yàn)證明疏

29、肝健脾方藥能調(diào)節(jié)NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝,降低大鼠血清及肝組織 TC、TG的含量,改善肝臟病理受損;目前，肝功能檢查主要是指反映肝細(xì)胞損傷項(xiàng)目的血清酶學(xué)檢測(cè)，藥物組血清ALT、AST降低，提示疏肝健脾方能夠改善大鼠NAFLD肝郁、脾虛癥狀，對(duì)肝細(xì)胞膜、線粒體膜有保護(hù)、修復(fù)和穩(wěn)定作用，能夠促進(jìn)NAFLD大鼠肝細(xì)胞的恢復(fù)。與模型組比較，各藥物組LXR mRNA及蛋白表達(dá)均有顯著降低，其中以健脾組最為顯著，表明疏肝健脾方藥可能是通過下調(diào)LXR mRNA及蛋白的表達(dá)水平而改善NAFLD大鼠肝臟脂質(zhì)代謝異常狀態(tài)，發(fā)揮了較好的防治NAFLD的作用。提示肝郁脾虛在 NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中可能具有重要的作用，

30、LXR可能是疏肝健脾方藥發(fā)揮作用的重要靶點(diǎn)之一，其詳細(xì)機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。【參考文獻(xiàn)】1 Fan JG，F(xiàn)arrell GC.Epidemiology of non-alcoholic fatty liver disease in ChinaJ.J Hepatol,2009;50(1):204-10.2 Manco M，Bottazzo G，Devito R，et al.Nonalcoholic fatty liver disease in childrenJ.J Am Coll Nutr,2008;27(6):667-76.3 Oosterveer MH，Grefhorst A,et al.

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