AYLS 藥物敏感性試驗標準操作規(guī)程

1、編寫者：沈繼錄審核者： 批準人： 文件發(fā)放范圍：微生物組文件年度審核審核者：審核者：審核者：審核者：日期：日期：日期：日期：藥物敏感性試驗標準操作規(guī)程1. 目的規(guī)范藥物敏感性試驗標準操作程序，確保藥敏結果準確。2原理將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后會不斷地向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)待檢菌的生長被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度(MIC)呈負相關，即抑菌圈愈大，MIC愈小。3試劑M-H培養(yǎng)基、無菌生理鹽水、藥敏紙片、無菌棉簽、35

2、孵育箱、標準比濁管或比濁儀。4質(zhì)控4.1 常用細菌藥敏質(zhì)控標準菌株參見CLSI規(guī)定。4.2 質(zhì)控菌株每日隨臨床標本一起進行藥敏試驗，測定質(zhì)控菌株的抑菌環(huán)。質(zhì)控菌株的抑菌環(huán)在允許范圍之內(nèi)，說明結果可信。4.3 質(zhì)控的頻率 由于紙片法藥敏試驗是很穩(wěn)定的，在不失控的時候，可以每周作12次質(zhì)控菌株的測定。如果發(fā)現(xiàn)有失控的情況，就必須每日作1次，尋找失控的原因并予以糾正。如果連續(xù)30日失控<3次的，可以恢復每周1次。5操作步驟5.1 挑取45個純培養(yǎng)菌落，接種于35mlM-H肉湯(05麥氏單位)中，經(jīng)35培養(yǎng)68 h。5.2 用無菌生理鹽水或M-H肉湯校正菌液濁度，使其與標準比濁管的濃度相同。5.

3、3 用無菌棉拭蘸取校正過的菌液，在試管壁上擠壓幾次，壓去多余的菌液，涂布整個M-H平板表面，再重復兩次，每次旋轉平板60°，使整個平板涂布均勻，最后用棉拭涂布平板四周邊緣一圈。5.4 涂布菌液的平板于室溫中干燥35分鐘后，用紙片分配器或無菌鑷子取藥敏紙片，貼于平板表面，并用鑷尖輕壓一下紙片，使其貼平。每張紙片的間距不小于24 mm，紙片的中心距平扳的邊緣不小于15 mm，直徑90 mm的平板宜貼6張藥敏紙片。5.5 將貼好紙片的平板置35孵育1824小時后，用卡尺量取抑菌圈直徑。個別菌孵育溫度、時間及條件應按照CLSI規(guī)定。6結果判斷根據(jù)CLSIMl00最新標準將所測抑菌圈的大小，報告為敏感(S)、中介中敏(I)或耐藥(R)。7.注意事項8.1 測試鏈球菌時應測量生長受抑制區(qū)域而不是溶血受抑制區(qū)域。8.2 如抑菌圈內(nèi)有獨立生長的菌落,則提示可能有雜菌,需要重新分離鑒定和藥敏實驗。此菌落也可能為高頻突變耐藥株。8.3 某些細菌的黃胺類藥抑菌圈內(nèi)有微量的細菌生長，可忽略不計，應以外圈為準。8. 臨床意義測定細菌對