紫外-可見分光光度計的校正

1、實驗一 紫外-可見分光光度計的校正及使用分光光度計定性分析一、 實驗?zāi)康?. 了解紫外和可見光光度計的構(gòu)造；2. 學(xué)會分光光度計的波長準(zhǔn)確度和吸收池配套性檢驗方法；3. 了解紫外和可見光光度計的校正基本方法；4. 掌握利用分光光度計對物質(zhì)進行定性分析。二、實驗學(xué)時 3學(xué)時三、儀器與試劑1、儀器 紫外-可見分光光度計； 鐠釹濾過片； 容量瓶（50mL）； 天平； 燒杯（200mL）； 2、試劑 去離子水； 95%乙醇； 防曬霜； 苯；質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.006000%重鉻酸鉀的0.001mol/L高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取已經(jīng)干燥過的重鉻酸鉀60.00mg，移入1L容量瓶中，用蒸餾水溶解，加入1mL的1.0m

2、ol/L高氯酸，再用蒸餾水稀釋溶液質(zhì)量為1000.0g，避光密封保存。四、實驗原理 紫外吸收光譜主要產(chǎn)生于分子價電子在電子能級間的躍遷，是研究物質(zhì)電子光譜的分析方法。通過測定分子對紫外光的吸收，可以對物質(zhì)進行定性和定量測定。 利用紫外分光光度法對物質(zhì)進行定性分析：選擇合適的溶劑（非極性），使用有足夠純度單色光的分光光度計，在相同的條件下測定相近濃度的待測試樣和標(biāo)準(zhǔn)品的溶液的吸收光譜，然后比較二者吸收光譜特征：吸收峰數(shù)目及位置、吸收谷及肩峰所在的位置等；分子結(jié)構(gòu)相同的化合物應(yīng)有完全相同的吸收光譜。 紫外-可見分光光度計的主要部件包括光源、波長選擇器、吸收池、檢測器及測量系統(tǒng)等。1. 光源：能發(fā)射

3、所需波長范圍的光的器件?？梢姽庠闯Ｓ面u絲燈(或碘鎢燈)，波長范圍約為3202500nm；紫外光源常用氫燈(或氘燈)，波長范圍約為200350nm。2. 波長選擇器：能從光源輻射光中分離出一定波長范圍光的器件。通常為濾光片、棱鏡或光柵。固定波長選擇器常用濾光片，連續(xù)變化波長選擇器常用棱鏡或光柵。3. 吸收池：盛放待測樣品溶液的容器。該容器應(yīng)具有兩面互相平行、透光且有精確厚度的平面。按材質(zhì)可分為玻璃和石英兩種。玻璃吸收池用于可見光波長范圍的測定；石英吸收池用于紫外光及可見光波長范圍的測定。4. 檢測器：能把光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕钠骷ǔ楣怆姽芑蚬怆姳对龉艿取?. 測量系統(tǒng)：能放大電信號并將其轉(zhuǎn)變

4、為用百分透射率或吸光度顯示的器件。由放大器及指示器等組成。紫外-可見分光光度計是單光束手工操作儀器，備有鎢燈及氫燈兩種光源，可用于可見及紫外光區(qū)。它是具有色散能力較高的單色器，狹縫可調(diào)，可得到較純的單色光，適用于定性鑒別和定量分析。 新儀器啟用前或儀器修理后或長期使用后均需對儀器的性能進行檢定。儀器的性能主要是波長準(zhǔn)確度與重現(xiàn)性、單色器的分辨能力、吸光度的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性及雜散光等。5、 實驗步驟1、儀器調(diào)校1.1 開機檢查及預(yù)熱檢查儀器，連接電源，打開儀器電源開關(guān)，開啟吸收池樣品室蓋，取出樣品室內(nèi)的遮光物，預(yù)熱20min。1.2 儀器波長準(zhǔn)確度檢查和校正（1）可見光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查和校正校驗波

5、長是否準(zhǔn)確，可用譜線校正法。在吸收池中置一白紙擋住光路，轉(zhuǎn)動波長從720nm向420nm方向轉(zhuǎn)動，遮光觀察白紙上色斑的顏色。根據(jù)調(diào)整的波長范圍觀察所得到的相應(yīng)顏色，并進行對比核對，判斷波長的準(zhǔn)確性。（486nm附近，白紙上為藍(lán)色斑；580nm附近，白紙上為黃色斑）吸收光顏色紫藍(lán)綠藍(lán)藍(lán)綠綠黃綠黃橙紅波長/nm400-450450-480480-490490-500500-560560-580580-610610-650650-760（2）紫外光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查和校正在吸收池滴一滴液體苯，蓋上吸收池蓋，待苯揮發(fā)充滿整個吸收池后，就可以測繪苯蒸氣的吸收光譜，觀察實測結(jié)果與苯的標(biāo)準(zhǔn)光譜曲線是否一致。1

6、.3 吸收池的配套性檢查 儀器所附的同一光徑洗手池中，裝蒸餾水于220nm（石英吸收池）、440nm（玻璃吸收池）處，將一個吸收池的透射比調(diào)至100%，測量其他各池的透射比值，其差值即為吸收池的配套性。透射比的偏差小于0.5%的吸收池可配成一套。2、防曬霜中紫外吸收劑的定性檢測2.1 試樣的制備稱取0.1g試樣于100mL燒杯內(nèi)，加95%乙醇100mL溶解、攪拌，靜止片刻，取清液作為待測試樣。根據(jù)試樣中防曬劑含量的大小，選擇稀釋倍數(shù)。2.2 測定步驟調(diào)節(jié)紫外分光光度計波長于280-400nm，以95%乙醇作為空白。 取待測試樣清液倒入比色皿內(nèi)，用擦鏡紙把比色皿表面擦干，進行掃描。儀器在此波長范

7、圍內(nèi)有吸收峰則該樣品含紫外吸收劑，無吸收峰則該樣品不含紫外吸收劑。2.3 結(jié)束工作 工作完畢后，關(guān)閉電源。取出吸收池，清洗后晾干入盒保存，在樣品室內(nèi)放入干燥劑，蓋好樣品室蓋，罩好儀器防塵罩。六、數(shù)據(jù)記錄1、可見光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查和校正波長/nm400-450450-480480-490490-500500-560560-580580-610610-650650-760吸收光顏色2、紫外光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查和校正 苯蒸氣的紫外吸收光譜紫外光區(qū)波長準(zhǔn)確度檢查所得圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對比結(jié)果： 3、吸收池的配套性檢查 波長（nm）透射比（%）配套誤差（%）池號1池號2池號3池號4220100440100 4、防曬霜檢測紫外吸收峰：七、測量注意事項 1、玻璃吸收池只適用于320nm以上及可見光區(qū)；石英吸收池適用于紫外光和可見光區(qū)。 2、石英吸收池毛玻璃面上方有箭頭表示方向。每次測定時，樣品吸收池與空白吸收池的方向應(yīng)保持一致。