指紋圖譜在中藥中的應(yīng)用分享

1、真誠為您提供優(yōu)質(zhì)參考資料，若有不當(dāng)之處，請指正。指紋圖譜在中藥中的應(yīng)用張傳力 揚州大學(xué) 醫(yī)學(xué)院摘要：本文通過對文獻的研究、整理,總結(jié)了中藥指紋圖譜的近年來研究進展,為中藥指紋圖譜的進一步深入研究提供了線索和依據(jù)。關(guān)鍵詞：指紋圖譜、GC、TLC、HPLC、NMR中藥成分復(fù)雜，以某一成分作為控制指標(biāo)已經(jīng)不適合中藥質(zhì)量控制的要求 中藥指紋圖譜1是中藥材經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段和儀器檢測得到的，能夠顯示該中藥及其制劑中的各種組分群體特性的共有峰的圖譜 它可以評判中藥材的真?zhèn)闻c優(yōu)劣，也可以判斷中成藥的質(zhì)量及制備工藝的合理性 與單一成分作為控制指標(biāo)的質(zhì)量方法相比，指紋圖譜具有全面性，可以很好地適應(yīng)

2、目前中藥有效成分大多不明確這一特點。中藥指紋圖譜是運用現(xiàn)代分析技術(shù)對中藥化學(xué)信息以圖形的方式進行表征并加以描述2，是一種綜合分析多種成分的有效手段。其具有系統(tǒng)性、特征性和重復(fù)性，顯示中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的整體性與模糊性2，更具有科學(xué)性，因而受到國際上的認可。從中藥材到中成藥的生產(chǎn)過程中，每一步都有明確的控制指標(biāo)，而指紋圖譜就是將這些指標(biāo)圖形化、信息化，為生產(chǎn)者提供一雙明亮的“眼睛”，保證中藥生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的質(zhì)量，為中藥現(xiàn)代化保駕護航。DNA指紋圖譜DNA 指紋圖譜多運用聚合酶鏈反 應(yīng)（PCR）從不同生物樣品中人工合成 DNA 片斷，這種 DNA 片斷大小數(shù)目因不同生物而異，因而稱之為 DNA 指紋圖譜

3、 由于 DNA 分子標(biāo)記技術(shù)直接分析的是生物遺傳因子而非表現(xiàn)型，所以結(jié)果可不受環(huán)境因素樣品狀態(tài)和材料來源等外界條件的影響，因此為中藥品種鑒定中極為可靠的手段 其中隨機擴增多態(tài) DNA（RAPD）標(biāo)記可在特異 DNA 序列不是很清楚的情況下檢測 DNA 的多態(tài)性，近年來得到廣泛應(yīng)用 于燕莉3等應(yīng)用 RAPD 標(biāo)記方法對金銀花兩品系（大毛花 雞爪花）的 DNA 指紋圖譜進行分析，從 DNA 分子水平上為兩品系的中藥材鑒 別 提 供 依 據(jù) 實 驗 隨 機 選 了 10-mer Opcron Primer 35 個，對兩個金銀花品種的 DNA 進行 PCR 擴增后，產(chǎn)生 RAPD 擴增引物，有 3

4、個引物擴增出譜帶大花金銀花共擴增 DNA 譜帶 24 條：OPJ 14 為 9 條、OPJ 16 為 9 條 OPJ 20 為 6 條；小花金銀花共擴增金銀花譜帶 26 條：OPJ 14 為 8 條 OPJ 16 為 12 條 OPJ20 為 6 條 結(jié)果表明，RAPD 技術(shù)可有效用于中藥材的分類與鑒別。光譜法 利用被測物質(zhì)對光的吸收而被用于有機化合物分子的結(jié)構(gòu)鑒定和對中藥有效成分的定性、定量分析。光譜法是近幾十年發(fā)展起來的科學(xué)技術(shù)，已成為中藥材真?zhèn)舞b別及質(zhì)量控制的重要參考手段。以紫外光譜（UV）法、紅外光譜（IR）法和近紅外光譜（NIR）法最為常用。UV法：用于化合物結(jié)構(gòu)的鑒別和含量的測定。

5、其光譜是電子光譜，形狀變化不大，不具備指紋特征，但可依據(jù)吸收峰的數(shù)目及峰的相對位置來鑒別中藥。邢旺興等4測定7 種紅曲藥材甲醇提取液的UV光譜，并結(jié)合一階導(dǎo)數(shù)光譜，根據(jù)峰位置差異能夠鑒別不同品種的紅曲。IR法：是鑒別化合物和確定物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的常用手段。其以宏觀的、非線性的分析理念和質(zhì)量控制模式評價中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣，具有無損鑒別、儀器通用等優(yōu)點。成則豐等5測定不同產(chǎn)地野生、種植天麻與偽品芭蕉芋、芋及馬鈴薯的水平衰減全反射- 傅里葉變換紅外光譜，并轉(zhuǎn)化為傅里葉自解卷積光譜，在4 000650 cm-1內(nèi)能簡便、準(zhǔn)確地識別天麻及其偽品。而Fourier 轉(zhuǎn)換紅外光譜法聯(lián)合二次衍射光譜及二維紅外光譜鑒定

6、藥材，具有快速、易操作與很好的重現(xiàn)性6。色譜法氣相色譜：利用中藥藥用化學(xué)成分的色譜指紋圖譜可以對不同藥材種屬進行鑒別，對同種藥材質(zhì)量優(yōu)劣進行評價。錢浩泉7等用GC法建立高良姜揮發(fā)油的指紋圖譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)道地藥材高良姜及不同地區(qū)收集的市場商品具有相當(dāng)穩(wěn)定的 相似程度很高的指紋圖譜，與混淆品有明顯區(qū)別。崔京8采用GC法建立肉桂藥材中揮發(fā)油及其-環(huán)糊精-包合物指紋圖譜，并分析兩個圖譜的相關(guān)性，為肉桂藥材及其揮發(fā)油制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。郭雪清9等建立了北柴胡揮發(fā)油的特征GC指紋圖譜分析方法，分析7個不同產(chǎn)地的柴胡藥材，以其指紋圖譜為特征，相似度分析處理，所建立的方法可用來對柴胡的質(zhì)量進行評價。 高效液

7、相色譜（HPLC）是一種具有高靈敏度、高選擇性、高效、快速的分離分析技術(shù)，藥典鑒別項下越來越多使用此法。它給出的是高分辨率的輪廓圖譜，重現(xiàn)性好、操作相對容易，而且相比于 TLC 色譜是封閉系統(tǒng)色譜，在線操作外界影響因素小色譜穩(wěn)定性好，在線檢測設(shè)備可選擇性大，適合指紋圖譜的實驗研究和應(yīng)用。王嗣岑等10報道川芎藥材活性部位的指紋圖譜，為其定性鑒別提供依據(jù)。川芎藥材經(jīng)乙醇超聲提取后，用醋酸乙酯萃取，采用 ODS 柱為分析柱，以甲醇水冰醋酸(30 ：70 ：0.5)為流動相，在276 nm條件下進行分析，建立其指紋圖譜 并對 7 種不同來源的川芎藥材進行高效液相色譜指紋圖譜定性分析比較。本研究建立的分

8、析方法的精密度 重現(xiàn)性較好，以阿魏酸峰計，RSD 分別為 1.68%和 1.04%；不同川芎藥材指紋圖譜中主要峰群的整體圖貌基本一致，但各成分含量的相對比值有所不同，不同來源的川芎藥材共有峰面積的比值及共有峰面積和均有一定的差異HPLC 指紋圖譜分析法可簡便、快速地鑒別區(qū)分不同來源的川芎藥材。HPLC 色譜指紋圖譜還用于成品劑型有效成分的研究。核磁共振核磁共振氫譜(HNMR)指紋圖譜 核磁共振氫譜(HNMR)是鑒定有機化合物結(jié)構(gòu)的重要方法之一, 可以獲得化合物中包括各類質(zhì)子的化學(xué)位移、數(shù)量、偶合關(guān)系等多個結(jié)構(gòu)信息。植物類中藥的特征性化學(xué)成分的含量是相對固定的, 在規(guī)范的提取分離條件下, 植物類

9、中藥的HNMR圖譜與植物品種則存在著嚴格的對應(yīng)關(guān)系, 沒有混淆的可能性, 圖譜中的信號強弱反映了混合物中各組分的相對含量, 在對特征性提取物進一步分離得到單體后, 通過結(jié)構(gòu)鑒定和HNMR研究, 可以對指紋圖譜中的各特征譜線進行歸屬。HNMR指紋圖譜以其良好的單一性、全面性、定量性、易辨性、明顯的特征性和良好的重現(xiàn)性, 預(yù)示了其在中藥鑒定中的應(yīng)用前景。陳波等11用1HNMR分析測定35種從福建、云南、廣州、江西等地采集及購買的不同種類的茶葉。檢測出包括多種氨基酸在內(nèi)的20種物質(zhì)。所得譜圖經(jīng)主要成分分析, 實現(xiàn)了不同種類的茶葉以及鐵觀音產(chǎn)地的區(qū)分, 并且發(fā)現(xiàn)了引起區(qū)分的化學(xué)成分。聯(lián)用技術(shù)聯(lián)用圖譜技

10、術(shù)：包括液質(zhì)聯(lián)用指紋圖譜、氣質(zhì)譜聯(lián)用指紋圖譜和毛細管電泳質(zhì)譜聯(lián)用指紋圖譜等。王振中等12建立的HPLC/DAD/ESI- MS方法所得圖譜易于解析,對桂枝茯苓膠囊鑒定,重現(xiàn)性和特征性較好,可用于桂枝茯苓膠囊的指紋圖譜鑒別。黃永清等對當(dāng)歸補血湯中揮發(fā)油進行分析,建立其揮發(fā)油的GC/MS指紋圖譜,可作為當(dāng)歸補血湯揮發(fā)油穩(wěn)定性的參考。ChristopherR等通過HPLC- DAD-MS聯(lián)用鑒定和量化了黃芩根及莖組織中8種黃酮類成分,并對黃芩組織中兩種未知的黃酮,漢黃芩素- 7- O-葡萄糖苷酸及白楊素- 7- O-葡萄糖苷酸做了實驗性確認,但并未對其進行量化13。劉琳等建立了高效液相色譜-二極管陣

11、列檢測-電化學(xué)檢測聯(lián)用技術(shù)同時測定三精雙黃連口服液中的綠原酸、咖啡酸、黃芩甙和木樨草素含量的新方法14。結(jié)論 中藥建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜必須立足于中藥的特色, 即中藥的整體作用特點。這就決定了中藥指紋圖譜研究的復(fù)雜性。目前國際上已普遍認可中藥指紋圖譜作為中藥質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。美國FDA、WHO都已規(guī)定如果草藥的活性成分不明, 可以提供色譜指紋圖譜以證明產(chǎn)品質(zhì)量。在歐共體藥品申請注冊表格中植物藥制品要求對原料、中間體及成品進行標(biāo)準(zhǔn)化控制, 即要建立指紋圖譜。目前中藥指紋圖譜的研究多集中于單味藥化學(xué)成分的研究, 以后對于中藥中間體、成品藥的研究應(yīng)該加強。尤其是注射用藥物, 因其直接進入血液, 其質(zhì)量控制更

12、為重要, 應(yīng)作為主要指紋圖譜研究方向。參考文獻1 李 克,王曙東.中藥指紋圖譜研究的有關(guān)技術(shù)要點探討J.中草藥,2003, 34(11)2 周玉新主編. 中藥指紋圖譜研究技術(shù)M. 第1 版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：3-8.3 于燕莉,向鳳寧,等.DNA 序列分析在金銀花品種鑒定中應(yīng)用J.山東科學(xué),2000, 13(4):39-40;61.4 邢旺興，宓鶴鳴，程榮珍，等. 中藥紅曲的紫外光譜法鑒別J.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2000，16（3）：133.5 成則豐，徐 銳，程存歸. 傅里葉自解卷積- 紅外光譜分析法應(yīng)用于中藥天麻的鑒別研究J. 光譜學(xué)與光譜分析，2007，27（9）：1 719.

13、6 Liu HX，Sun SQ，Lv GH ，et al .Discrimination of extracted lipophilic constituents of angelica with multi-steps infra -red macro-fingerprint methodJ. Vib Spectrosc ，2006，40（2）：202.7錢浩泉，李彩君，謝培山高良姜及其近緣植物揮發(fā)油成分的氣相色譜指紋圖譜研究J中藥新藥與臨床藥理，2001，12（3）：179-182.8 崔京，霍立茹，鄭朝華，等采用 法建立肉桂藥材中揮發(fā)油及其 環(huán)糊精包合物的指紋圖譜J藥學(xué)進展，2006，3

14、0（4）：175-177.9 郭雪清，王英鋒，劉海平，等 柴荊注射液中柴胡氣相色譜指紋圖譜研究J中國實驗方劑學(xué)雜志，2008，14（2）：60-62.10王嗣岑,朱麗華,賀浪沖,等. 川芎藥材活性部位的高效液相色譜指紋圖譜定性分析方法J.西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2003,24(3):221-22 3;23611 陳波, 張巍, 康海寧, 等. 茶葉的1HNMR指紋圖譜研究J. 波譜學(xué)雜志, 2006, 23(2):1692180.12 王振中,李家春,竇霞,等.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對桂枝茯苓膠囊指紋圖譜中特征峰的鑒定J. 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2009,25(3): 194- 196.13 Christopher RH, PerryAM, Praveen KS. Identification andquantificationof eight flavonesinroot andshoot tissues of themedicinal plant Huang- qin(Scutellaria baicalensis Georgi) using