四種糖的測(cè)定方法

1、4種糖的測(cè)定方法總結(jié)：1、 直接滴定法。原理為 糖還原天藍(lán)色的氫氧化銅為紅色的氧化亞銅。缺點(diǎn)：水樣中的還原性物質(zhì)能對(duì)糖的測(cè)定造成影響。2、 高錳酸鉀滴定法。所用原理同直接滴定法。缺點(diǎn)：水樣中的還原性物質(zhì)能對(duì)糖的測(cè)定造成影響，過程較為復(fù)雜，誤差大。3、硫酸苯酚法。糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長(zhǎng)下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長(zhǎng)下測(cè)定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測(cè)定，方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上。缺點(diǎn)：如果水樣呈

2、橙紅色（大部分水樣為黃色），會(huì)對(duì)比色法造成較大的干擾。4、蒽酮法糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的測(cè)定。缺點(diǎn)：，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺。綜合比較；采用蒽酮法能將最為準(zhǔn)確地測(cè)定尾水中糖的含量。（一） 直接滴定法（本法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法）    中華人民共和國(guó)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(果汁總糖的測(cè)定直接滴定法)      &#

3、160;                     SB/T 10203-1994、原理 v 一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀，這種沉淀很快與酒石酸鈉反應(yīng)，生成深藍(lán)色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱條件下，以次甲基藍(lán)作為指示劑，用標(biāo)液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，生成紅色的氧化亞銅沉淀，待二價(jià)銅全部被還原后，稍過量的還原糖把

4、次甲基藍(lán)還原，溶液由藍(lán)色變?yōu)闊o色，即為滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液消耗量可計(jì)算出還原糖含量。樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，在加熱條件下，以次甲基藍(lán)做指示劑，滴定標(biāo)定過的堿性酒石酸銅溶液（用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液），根據(jù)樣品溶液消耗體積計(jì)算還原糖量。 、儀器和試劑 1儀器 酸式滴定管，可調(diào)電爐（帶石棉板），250ml容量瓶。 2試劑1. 鹽酸。2. 堿性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至1000mL。3. 堿性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全

5、溶解后，用水稀釋至1000 ml，貯存于橡膠塞玻璃瓶?jī)?nèi)。4. 乙酸鋅溶液：稱取21.9 g乙酸鋅，加3ml冰乙酸，加水溶解并稀釋至100ml。5. 亞鐵氰化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氰化鉀，用水溶解并稀釋至100ml。6. 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取1.0000g經(jīng)過96±2干燥2h的純葡萄糖，加水溶解后加入5ml鹽酸，并以水稀釋至1000L。此溶液相當(dāng)于1mg/ml葡萄糖（注：加鹽酸的目的是防腐，標(biāo)準(zhǔn)溶液也可用飽和苯甲酸溶液配制）。7. 果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：按操作，配制每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于1mg的果糖。8. 乳糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：按操作，配制每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于1mg的乳糖。9. 轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：

6、準(zhǔn)確稱取1.0526g純蔗糖，用100ml水溶解，置于具塞三角瓶中加5ml鹽酸（1+1），在6870水浴中加熱15min，放置至室溫定容至1000ml，每ml標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于1.0mg轉(zhuǎn)化糖。、實(shí)驗(yàn)步驟 1樣品處理  乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品：稱取約2.505.00g固體樣品（吸取2550ml液體樣品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30 min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等，使它們形成沉淀，經(jīng)過濾除去。如果鈣離子過多時(shí)，易與葡萄

7、糖、果糖生成絡(luò)合物，使滴定速度緩慢；從而結(jié)果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結(jié)合，形成沉淀并過濾。）  酒精性飲料：吸取100ml樣品，置于蒸發(fā)皿中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積1/4后，移入250ml容量瓶中，加水至刻度。  含多量淀粉的食品：稱取10.0020.00g樣品，置于250ml容量瓶中，加200ml水，在45水浴中加熱1h，并時(shí)時(shí)振搖（注意：此步驟是使還原糖溶于水中，切忌溫度過高，因?yàn)榈矸墼诟邷貤l件下可糊化、水解，影響檢測(cè)結(jié)果。）。冷后加水至刻度，混勻，靜置，沉淀。吸取200ml上清液于另一250ml容量瓶中，慢慢加入5ml乙酸

8、鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉淀，靜置30 min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，濾液備用。  汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取100ml樣品置于蒸發(fā)皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250ml容量瓶中，并用水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后備用。（注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應(yīng)接近于葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。） 2. 標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液：吸取5.0ml堿性酒石酸銅甲液及5.0ml乙液，置于150ml錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉淀，應(yīng)將甲液加入乙液，使開始生成的氧化亞銅沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴

9、加約9 ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液或其他還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液蘭色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄消耗的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液或其他還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計(jì)算每10 ml（甲、乙液各5 ml）堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量或其他還原糖的質(zhì)量（mg）。（注意：還原的次甲基藍(lán)易被空氣中的氧氧化，恢復(fù)成原來的藍(lán)色，所以滴定過程中必須保持溶液成沸騰狀態(tài)，并且避免滴定時(shí)間過長(zhǎng)。） 3. 樣品溶液預(yù)測(cè)：吸取5.0 ml堿性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶

10、液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以每?jī)擅?滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色褪去，出現(xiàn)亮黃色為終點(diǎn)。如果樣品液顏色較深，滴定終點(diǎn)則為蘭色褪去出現(xiàn)明亮顏色（如亮紅），記錄消耗樣液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺后復(fù)又變深，說明滴定過量，需重新滴定。） 當(dāng)試樣溶液中還原糖濃度過高時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋，再進(jìn)行正式測(cè)定，使每次滴定消耗試樣溶液的體積控制在與標(biāo)定堿性酒石酸酮溶液時(shí)所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近，約在10ml左右。當(dāng)濃度過低時(shí)則采取直接加入10ml樣品溶液，免去加水10ml，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差相當(dāng)于10ml試樣溶液中所含還原糖的量。4.

11、樣品溶液測(cè)定：吸取5.0 ml堿性酒石酸銅甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml錐形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 min內(nèi)加熱至沸，快速從滴定管中滴加比預(yù)測(cè)體積少1 ml的樣品溶液，然后趁沸繼續(xù)以每?jī)擅?滴的速度滴定直至終點(diǎn)。記錄消耗樣液的總體積，同法平行操作兩至三份，得出平均消耗體積。 5. 計(jì)算 樣品中還原糖的含量（以某種還原糖計(jì)）按下式計(jì)算。 X=A/(m×V/250×1000)×100式中：X-樣品中還原糖的含量(以某種還原糖計(jì))，單位 g/100g； A堿性酒石酸銅溶液（甲、乙液各半）相當(dāng)于某種還原

12、糖的質(zhì)量，單位 mg； m-樣品質(zhì)量，單位 g； V-測(cè)定時(shí)平均消耗樣品溶液的體積，單位 ml； 計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后一位。 注意：滴定結(jié)束，錐形瓶離開熱源后，由于空氣中氧的氧化，使溶液又重新變藍(lán)，此時(shí)不應(yīng)再滴定。（二）高錳酸鉀滴定法v 原理 將樣液與一定量過量的堿性酒石酸銅溶液反應(yīng)，還原糖將二價(jià)銅還原為氧化亞銅，經(jīng)過濾，得到氧化亞銅沉淀，加入過量的酸性硫酸鐵溶液將其氧化溶解，而三價(jià)鐵鹽被定量地還原為亞鐵鹽，用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定所生成的亞鐵鹽，根據(jù)高錳酸鉀溶液消耗量可計(jì)算出氧化亞銅的量，再從檢索表中查出氧化亞銅量相當(dāng)?shù)倪€原糖量，即可計(jì)算出樣品中還原糖含

13、量。 （三）硫酸苯酚法、原理糖在濃硫酸作用下，脫水形成的糠醛和羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在10-100mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長(zhǎng)下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長(zhǎng)下測(cè)定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測(cè)定，方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上。多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測(cè)定。、試劑 1 濃硫酸：分析純，95.5% 2 80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長(zhǎng)期儲(chǔ)存。 3 6%苯酚：臨

14、用前以80%苯酚配制。（每次測(cè)定均需現(xiàn)配） 4 標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖。 5 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。 6 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。 7 6mol/L 氫氧化鈉：120克分析純氫氧化鈉溶于500ml水。 8 6mol/L 鹽酸、操作。 1制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補(bǔ)至2.0ml，然后加入6

15、%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鐘以后于490nm測(cè)光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2樣品含量測(cè)定： 取樣品1克（濕樣）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少許5TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升離心管中，再加少許5TCA溶液研磨，倒上清液，重復(fù)3次。最后一次將殘?jiān)黄鸬饺腚x心管。注意：總的溶液不要超出10毫升。（既不要超出離心管的容量）。 離心，轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分鐘，共三次。第一次15分鐘，取上清液。后兩次各5分鐘取上清液到25毫升錐形比色管中。最后濾液保持18毫升左右。（測(cè)肝胰腺樣品時(shí)，每次取上清液

16、時(shí)應(yīng)過濾。因?yàn)槠渲竞看笕菀讑A帶殘?jiān)＃?水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 鹽酸之后搖勻，在96水浴鍋中水浴2小時(shí)。 定容取樣。水浴后，用流水冷卻后加入2毫升6mol/L 氫氧化鈉搖勻。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的樣品液，以蒸餾補(bǔ)至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置20分鐘以后于490nm測(cè)光密度。每次測(cè)定取雙樣對(duì)照。以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量。、注意 （1）此法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、重復(fù)性好，對(duì)每種糖僅制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，顏色持久。 （2）制作標(biāo)準(zhǔn)線宜用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)多糖，如用葡萄糖，應(yīng)以校正系數(shù)0.9校正g數(shù)。 （3）對(duì)雜多糖，分析結(jié)果可

17、根據(jù)各單糖的組成比及主要組分單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線的校正系數(shù)加以校正計(jì)算。 （4）測(cè)定時(shí)根據(jù)光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.10.3之間。比如：小于0.1之下可以考慮取樣品時(shí)取2克，仍取0.2ml樣品液，如大于0.3可以減半取0.1ml的樣品液測(cè)定。（四）蒽酮法、實(shí)驗(yàn)原理糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛和羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的測(cè)定。該法的特點(diǎn)是幾乎可以測(cè)定所有的碳水化合物，不但可以測(cè)定戊糖和己糖，而且可以測(cè)所有的寡糖類和多糖類，其中包括淀粉、纖維素等（因反應(yīng)液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)。所以，用蒽酮法測(cè)出的碳水化合物含量，實(shí)際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細(xì)致劃分各種碳水