常用緩沖液配置

1、實驗室常用緩沖液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 按下表量加入濃鹽酸調節(jié)所需要的pH值。PH值濃HCl7.4約 70ml7.6約 60ml8.0約 42ml4. 將溶液定容至1 L。5. 局溫局壓火菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個單位。2)10 HE Buffer (pH7.4,

2、 7.6, 8.0)組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于 1 L燒杯中。1M Tris HCl Buffer (PH7.4, 7.6, 8.0)100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向燒杯中加入約 800 ml的去離子水，均勻混合。3. 將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。4. 室溫保存。3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)組份濃度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3.

3、 用濃鹽酸調節(jié)pH值至8.8。4. 將溶液定容至1 L。5. 局溫局壓火菌后，室溫保存。注意：應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個單位。4)3 M 醋酸鈉(pH5.2)組份濃度：3M醋酸鈉配制量：100ml配制方法：1. 稱量40.8g NaAc 3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月 40ml的去離子水攪拌溶解2. 加入冰醋酸調節(jié) pH值至5.23. 加去離子水將溶液定容至100ml4局溫局壓火菌后，室溫保存。5)PBSuffer組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 m

4、M Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法:1.稱量下列試劑，置于 1 L燒杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2. 向燒杯中加入約 800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加濃鹽酸將pH值調節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4. 局溫局壓火菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mMMgCl2。6) 10 M醋酸鉉組份濃度：10 M醋酸俊配制量：100 ml配制方法：1. 稱量77.1 g醋酸俊置于100200 ml燒杯中，加入約30

5、 ml的去離子水攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。4. 密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸俊受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7) 苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)配制方法：1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質時常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質變性并有助于液相與有機相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24 : 1)混合均勻后，移入棕色 玻璃瓶中4C保存。8) 10% (W/V) SDS組份濃度：10% (W/V)SD

6、S配制量：100ml配制方法：1. 稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約 80ml的去離子水，68 C加入溶解2. 滴加濃鹽酸調節(jié) pH值至7.23. 將溶液定容至100ml后，室溫保存。9) 2 N NaOH組份濃度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1. 量取80 ml去離子水置于100200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱，有可能 使玻璃燒杯炸裂)。2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。4. 將溶液轉移至塑料容器中后，室溫保存。10) 2.5 N H

7、Cl組份濃度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法：1. 在78.4 ml的去離子水中加入 21.6 ml的濃鹽酸(11.6 N),均勻混合。2. 室溫保存。11) 5 M NaCl組份濃度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中，加入約 800 ml的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。3. 局溫局壓火菌后，4C保存。11) 20% (W/V) Glucose組份濃度：20% (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 稱取20 g Glucose置于100200 ml燒杯中，

8、加入約 80 ml的去離子水后，攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 局溫局壓火菌后，4C保存。12) Solution I(質粒提取用)組份濃度：25 mM Tris-HCl ( pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于 1 L燒杯中。1M Tris-HCl (PH8.0)25ml0.5M EDTA (PH8.0)20ml20% Glucose (1.11M)45mldH2O910ml2. 局溫局壓火菌后，4。保存。3. 使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNas

9、e A ( 20 mg/ml)。13) Solution II(質粒提取用)組份濃度：200mM NaOH , 1% (W/V)SDS 配制量：500ml配制方法：1. 量取下列溶液，置于 500ml燒杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2. 加滅菌水定容至 500ml,充分混勻3. 室溫保存，此溶液保存時間最好不要超過一個月 注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌14) Solution III(質粒提取用)組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量：500 ml配制方法：1.稱量下列試劑，置于 500 ml燒杯中。KOAc147gCH3COOH57.5ml2

10、. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。4. 高溫高壓火菌后，4C保存。15) 0.5 M EDTA(pH8.0)組份濃度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：稱取186.1 g Na2EDTA 2H2O ,置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌。3. 用 NaOH 調節(jié) pH 值至 8.0 (約 20 g NaOH)。注意：pH值至8.0時，EDTA才能完全溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1 L。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。16) 1 M DTT組份濃度：1 M DTT配制量：20 ml配制方

11、法：1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料離心管內。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc (pH5.2)，溶解后使用 0.22 mm濾器過濾除菌。3. 適量分成小份后，-20 C保存。17) 10 mM ATP組份濃度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1. 稱取121 mg Na2ATP 3H2O,加入到50 ml塑料離心管內。2. 加 20 ml 的 25 mM Tris-HCl (pH8.0),攪拌溶解。3. 適量分成小份后，-20 C保存。一 ,常用貯液與溶液1mol/L亞精胺(Spermidine):溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10m

12、l。分裝成小份貯存于-20 C。1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20 C。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA ):加100mg的牛血清蛋白(組分V或分子生物學試劑級， 無DNA 酶)于9.5ml水中(為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白)，蓋好蓋后，輕輕搖動，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20 C。1mol/L二硫蘇糖

13、醇(DTT )：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20 C。 或轉移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加 0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。8mol/L乙酸鉀(potassium acetate):溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化鉀(KCl):溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸鈉(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸鈉于約 90ml水中，用冰乙酸調溶液 的pH至5.2,再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的 Na2EDTA和N

14、aOH溶液(0.5mol/L ),混合后形成 EDTA的三 鈉鹽?；蚍Q取 186.1g的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES :將 23.8gHEPES 溶于約 90ml 的水中，用 NaOH 調 pH (6.8-8.2),然后用水 定容至100ml。1mol/L HCl :加8.6ml的濃鹽酸至 91.4ml的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT （異丙基硫代-$D-半乳糖昔）于 10ml水中，分成小份 貯存于-20 C。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2 6H2O于足量的水中，定容到 100ml

15、。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟） 于足量的異丙醇中， 定容到10ml。 分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20 Co20mg/ml蛋白酶 K （proteinase K）:將200mg的蛋白酶 L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直 至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到 10ml，然后分裝成小份貯存于-20 C。10mg/mlRnase （無 DNase） （DNase free RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用

16、1mol/L的Tris HCl調pH至7.5,于-20C貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/L氯化鈉（NaCl）:溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至 100ml。10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約 0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌）， 氫氧化鈉完全溶解后用水定容至 1L。10% SDS （十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉移到約含 0.9L的水的燒杯中，用磁力攪 拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。100%三氯乙酸（TCA ）:在裝有500gTCA的

17、試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直 至完全溶解。（稀釋液應在臨用前配制）2.5% X gal （5-漠-4-氯-3引噪一3半乳糖昔）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰 胺（DMF ），用鋁箔包裹裝液管，貯存于 -20 C。100XDenhardt 試劑（Denhardt's regent）成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll , 400 型）2%聚乙烯毗咯烷酮（PVP-40）2% BSA （組分 V）水2g2g2g加水至總體積為100ml依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質，分裝成小份于-20 C貯存。10>#準DN

18、A連接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端連接）成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L Dll2mmol/L ATP5mmol/L鹽酸亞精胺（可選）0.5mg/ml BSA （組分 V）（可選）水5ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液200ul 100 mmol/L 貯液50ul 1 mmol/L 貯液0.5ml 10 mg/mL 貯液 2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20C。100 mmol/L dNTP 溶液（d

19、NTP solutions ）可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80C可貯存至少 6個月。10mmol/L dNTP 混合液成分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 貯液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 貯液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 貯液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 貯液水12ul20% PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量質量濃度為20%聚乙二醇2.5mol/L氯化鈉水

20、20g50ml 5 mol/L 氯化鈉 或14.6g固體氯化鈉補足100ml加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解。20 >SSC成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L檸檬酸三鈉（二水）3mol/L氯化鈉水88.2g175.3g補足1L溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調pH為7.0,用水補足體積至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）處理水加100ul DEPC于100ml水中，使DEPC的體積分數(shù)為 0.1%。在37C溫浴至少12h,然后在15 psi條件下高壓滅菌 20min，以使殘余的 DEP

21、C失活。DEPC會與胺起反應，不可用 DEPC處理Tris緩沖液。甲酰胺（deionized formamide ）直接購買或加 Dowex XG8混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮氣于-80 C貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate buffer按照下表所給定的體積，混合1 mol/L的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需 pH的磷酸緩沖液。配制 1 mol/L的磷酸二氫鈉（NaH2PO4 H2O）貯液： 溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol

22、/L磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液：溶解142g于足量水中使終體積為 1L。1mol/L磷酸二氫鈉（ml）1mol/L磷酸氫二鈉（ml）最終pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE (用丁懸浮和貯存DNA)成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris - HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl ( pH7.4-8.0, 25 C) 20

23、0ul 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 98.8mlTris 緩沖液(Tris-HCl buffer)將121g的Tris堿溶解于約 0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH (25C下)加一定量的濃鹽酸(11.6N )，用水調整終體積至 1L。濃鹽酸的體積(ml)pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2二. 電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50>Tris-乙酸(TAE)緩沖液成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 堿 1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA 水242g5

24、7.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0)補足1L5打ris-硼酸(TBE)緩沖液成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 堿445 mmol/L硼酸鹽10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 補足1L染料1 %漠酚藍（bromophenol blue）加1g水溶性鈉型漠酚藍于 100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF （xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到 100

25、ml。10mg/ml 的漠化乙錠（ethidium bromide）小心稱取1g漠化乙錠，轉移到廣口瓶中，加 100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于 4C貯存。凝膠上樣液（gel loading solutions ）6頑性凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氫氧化鈉6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖（400型）0.15%漠甲酚綠0.25%二中米青FF 水300ul 10N氫氧化鈉120ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)1.8g15mg25mg補足到10ml6探蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液

26、各成分用量0.15%漠酚藍0.15%二中米青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖（400型） 水1.5ml 1 %漠酚藍1.5ml 1 % 二中；O FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)1.5g補足到10ml6魂酚藍/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.25%漠酚藍0.25%二中米青FF15%聚蔗糖（400型） 水2.5ml 1 %漠酚藍2.5ml 1 % 二中；O FF1.5g補足到10ml6"油凝膠上樣液（4C貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15%漠酚藍1.5ml 1 %漠酚藍0.15%二甲

27、苯青FF1.5ml 1 % 二甲苯 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)50%甘油3ml水3.9ml6以糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15%漠酚藍0.15%二中米青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水1.5ml 1 %漠酚藍1.5ml 1 % 二中；O FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)4g補足到10ml10計二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液(室溫貯存)成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.2 %漠酚藍0.2% 二中;O FF 200 mmol/L EDTA 0.1% SDS

28、50%甘油水20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 % SDS5ml補足到10ml三. 常用培養(yǎng)基1) LB培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L水中:蛋白月東10g酵母提取物5g氯化鈉10g如果需要用1N NaOH (1ml)調整pH至7.0,再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂 粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L。SOB培 養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L水中：蛋白月東20g酵母提取物5g氯化鈉0.5g1 mol/L氯化鉀2.5ml用水補足體積到 1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每 100ml 的小份中加1ml滅

29、過菌的1mol/L氯化鎂。2) SOC培養(yǎng)基成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每 100ml的小份中 加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水 中，再用水補足到 100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌)。3) TB培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L水中：蛋白月東12g酵母提取物24g甘油4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到 60C，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中， 使終體積為100ml。 高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌)。4) 2>YT培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L水中:蛋白月東16g酵母提取物10g氯化鈉4ml如果需要用1N NaOH (1ml)調整pH至7.0,再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂 粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L。5) YPD培養(yǎng)基將下列組分溶解在 0.9L水