淺議高效液相色譜法測定蒙藥黃花鐵線蓮中槲皮素含量

1、淺議高效液相色譜法測定蒙藥黃花鐵線蓮中桝皮素含量中圖分類號：r9文獻標(biāo)識碼：a文章編號：1007-0745 （2013） 01-0082-01摘要：目的測定黃花鐵線蓮中桝皮素的含量，為蒙藥黃 花鐵線蓮中桝皮素的含量提供檢測方法，制定質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。方 法采用高效液相色譜法,kromas訂（250 mmx4. 6 mm, 5 p m） 色譜柱，甲醇0.4%磷酸（60： 40）為流動相，流速為1.0 ml/min；檢測波長360 nmo結(jié)果梅皮素濃度在15. 35 76. 75 ng/ml范圍之間與峰面積線性關(guān)系良好，r=0. 999 6o 榔皮素平均回收率為98. 13%, rsd=1. 55%o結(jié)論

2、采用高效液 相色譜法測定黃花鐵線蓮中桝皮素的含量具有分離效果好、 簡便、準(zhǔn)確等優(yōu)點。關(guān)鍵詞：黃花鐵線蓮皮素高效液相色譜法含量測定黃花鐵線蓮為毛萇科植物黃花鐵線蓮clematis intricata bge.的地上部分，主要分布于內(nèi)蒙古、遼寧、河 北、山西、陜西、甘肅、青海等地，多生于山坡、草地、路 邊或灌木叢中?！包S花鐵線蓮”名稱源于其植物名，其作為 蒙藥“阿拉格-特木爾-敖日陽古”收載于中華醫(yī)學(xué)百科全 書（蒙醫(yī)分卷）認藥白晶鑒無誤蒙藥鑒內(nèi)蒙古中草 藥和內(nèi)蒙古植物藥志1中華本草（蒙藥卷）中。 主治胃痞、石痞、大腸痞、食痞等寒性痞癥?，F(xiàn)有研究表明, 桝皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突變、抗心肌肥

3、厚和降 血壓等多種藥理作用2。黃花鐵線蓮有效成分為楣皮素等 黃酮類物質(zhì)，本實驗采用高效液相色譜法測定其中桝皮素的 含量，以此方法控制蒙藥材黃花鐵線蓮的質(zhì)量。一、材料與儀器1材料黃花鐵線蓮（采自內(nèi)蒙古呼和浩特市蠻漢山、 小井溝、五一水庫，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)教研室龐 秀生教授鑒定為毛蔑科植物黃花鐵線蓮clematis intricata bge.的地上部分），方法學(xué)考察中均采用蠻汗山所采集到的 樣品。櫥皮素對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號: 100081-200406）；甲醇為色譜純，無水乙醇、磷酸、鹽酸等 試劑均為分析純，水為雙蒸水。2. 儀器 依利特uv-230+高效液相色譜儀

4、（大連依利特分 析儀器有限公司）：uv-230+紫外-可見檢測器、p230/p230p 高壓恒流泵、ec2000色譜工作站。601超極恒溫水?。ńK 省金壇市醫(yī)療儀器廠），電子天平（ja2003,上海天平儀器 廠）。二、方法與結(jié)果1.色譜條件色譜柱：kromasi 1（250 mmx4. 6 inm, 5um）,流動相：甲醇-0.4%磷酸（60 : 40）；流速：l.oml/min； 檢測波長：360 nm；進樣量為20 u lo結(jié)果見圖12。（略） 圖1櫥皮素對照品hplc圖譜（略）圖2黃花鐵線蓮hplc圖譜（略）2 對照品溶液的配制 取12 0 £干燥4 h的桝皮素對照品 3 m

5、g,精密稱定，置10 ml容量瓶中，然后加甲醇至刻度， 搖勻，即得（每毫升中含桝皮素0. 307 mg）o3. 供試品溶液的制備 取本品1 g,過65目篩，精密稱 定，加無水乙醇16ml, 9%鹽酸4ml,加熱回流兩次，30 min/ 次，抽濾，合并濾液，置50ml容量瓶中，加9%鹽酸至刻度, 搖勻，即得。4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取0.5, 1.0, 1. 5, 2.0, 2.5 ml對照品溶液分別置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖 勻。分別吸取20 u1注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。 以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，對照品峰面積為縱坐標(biāo)，進行 線性回歸，標(biāo)準(zhǔn)線性回歸方程為y=89. 64

6、4x-71. 768 , r=0. 999 6實驗表明桝皮素濃度在15.3576. 75 u g/ml范 圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。5精密度實驗取供試品溶液，重復(fù)進樣5次，記錄峰 面積并計算，結(jié)果桝皮素的平均含量為1.858 7 mg/g, rsd 為 1. ll%o6穩(wěn)定性實驗取黃花鐵線蓮供試品溶液在0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9 h分別進樣20 ul,記錄峰面積，結(jié)果rsd為 1. 05%,表明桝皮素在9 h內(nèi)保持穩(wěn)定。7.重復(fù)性實驗取同一批供試品5份，各約lg,精密稱 定，分別按樣品提取方法提取、測定，結(jié)果櫥皮素品均含量 為 1.832 mg/g, rsd 為 1.81%。8加

7、樣回收率實驗 取已知含量的同一批供試品5份， 各約0. 5g,精密稱定，分別加入桝皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液（0.586 mg/ml） 1.45 ml,按供試品溶液的方法處理并測定含量，計 算加樣回收率，結(jié)果見表1 （略）。桝皮素平均回收率為 98. 13%, rsd為1.55%,結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確可靠。表1樣 品中桝皮素含量加樣回收率實驗結(jié)果9.樣品含量測定 取3個批次的樣品各兩份，每份約10 g,精密稱定，按“供試品溶液的制備”項下操作，取20卩1 注入高效色譜儀，以色譜條件測定，計算桝皮素的含量，結(jié) 果見表2。表2樣品含量測定結(jié)果三、討論選定提取溶劑后，在相同水解條件下，分別用水浴回流 提取與超聲提

8、取處理樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)桝皮素總含量，水浴回 流法比超聲提取法高一倍多，說明回流更有利于黃酮類物質(zhì) 的水解，因此選定水浴回流提取的方法。為了保證被測成分 在回流提取過程中能全部提凈，實驗研究中對樣品提取次數(shù) 作了考察，結(jié)果見表3 （略）。表3提取次數(shù)的考察實驗結(jié) 果表明加熱回流提取2次與3次的結(jié)果基本一致，說明加熱 回流提取2次就可將黃花鐵線蓮中的桝皮素提取完全。故將 供試品的提取次數(shù)定為2次。波長的選擇：用二極管陣列紫外檢測器對柳皮素的標(biāo)準(zhǔn) 品溶液在波長190500 nm范圍內(nèi)進行掃描，發(fā)現(xiàn)桝皮素在 210, 255 nm和360 nm波長處有特征吸收峰，桝皮素在360 rnn處靈敏度較高，峰形較好，樣品中梅皮素峰能達到基線分 離。故最后選定檢測波長為360 nm。桝皮素為黃酮類化合物，在槐花米、銀杏等中均有分布, 具心血管方面的生理活性，也是黃花鐵線蓮中的主要有效成 分，因此測定其含量可較好地