酸放散、熱放散聯(lián)合檢測(cè)新生兒ABO溶血病結(jié)果研究

1、酸放散、熱放散聯(lián)合檢測(cè)新生兒abo溶血病結(jié)果研究摘要目的分析酸放散和熱放散2種方法聯(lián)合 檢測(cè)新生兒abo溶血病結(jié)果，以供臨床參考。方法 選取462 例檢測(cè)abo溶血病的標(biāo)本進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)，采用酸放散和 熱放散2種方法同時(shí)進(jìn)行，放散液選用75 ul,檢驗(yàn)報(bào)告結(jié) 果取陽(yáng)性者。結(jié)果2種方法聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性病例有366例，陽(yáng) 性率為79.22%；酸放散陽(yáng)性320例，陽(yáng)性率69. 26%；熱放 散陽(yáng)性343例，陽(yáng)性率74. 24%； 2種方法聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率較 酸放散試驗(yàn)陽(yáng)性率高，p0. 05o結(jié)論酸放散與熱放散同時(shí)應(yīng) 用可提高陽(yáng)性率。日齡在13d、7d后、a型患兒采用熱放 散，46d采用酸放散，可提高新生

2、兒abo-hdn陽(yáng)性檢出率, 減少漏檢。關(guān)鍵詞酸放散熱放散陽(yáng)性率漏檢新生兒溶血病是母嬰血型不合導(dǎo)致免疫性溶血性疾病， 其主要是abo血型和rh血型不合2種，臨床表現(xiàn)為水腫、 黃疸、貧血、肝脾腫大，嚴(yán)重者可發(fā)生膽紅素腦病，造成生 命威脅或不可逆轉(zhuǎn)神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥13,降低生活質(zhì)量。 我國(guó)以abo-hdn多見(jiàn)，不及時(shí)診治往往造成嚴(yán)重后果。臨床 上早期診治可減少或阻斷膽紅素腦病的發(fā)生4。本文探討 抗體釋放試驗(yàn)采用酸放散和熱放散2種方法聯(lián)檢的臨床診斷 價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。1資料與方法1.1資料來(lái)源2011年11月-2012年6月我院新生兒科住院和嬰兒室 abo血型不合的高膽紅素血癥或疑似ab0溶血患兒共4

3、62例, 日齡023d,男250例，女212例。0a型189例，0b型273 例。1.2儀器與試劑抗-a、抗-b標(biāo)準(zhǔn)血清、ab0標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞、rh （d）血型 鑒定試劑，由上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。微柱凝膠血 型卡、37。（2孵育器、卡式離心機(jī)、ii號(hào)稀釋液、diacidel放 散液、diacidel洗滌液為瑞士 diamed公司生產(chǎn)。日產(chǎn)久保 田配血專用離心機(jī)。1. 3方法用edta （乙二胺四乙酸）抗凝管抽取34ml靜脈血， 搖勻離心分離血漿后作abo、rh血型鑒定（鹽水試管法或微 柱凝膠血型卡式法）及abo溶血病抗體釋放試驗(yàn)?？贵w釋放 試驗(yàn)：取壓積紅細(xì)胞2ml分2管進(jìn)行洗滌，一管用于酸

4、放 散、一管用于熱放散；酸放散采用diacidel洗滌液洗滌（或 鹽水洗滌）4次，熱放散用生理鹽水選滌4次，每次以1000 r/ min離心2 min,每次盡量抽盡上清液棄去，最后1次留 少量清潔的上清液作對(duì)照管；用吸管測(cè)量壓積細(xì)胞后，酸放 散加入等量的diacidel放散液，離心1 min （1000 r/ min）, 取分離出的上清液，即為病人紅細(xì)胞的放散液，加入 diacidel緩沖液搖勻至藍(lán)色備用；洗滌好的熱放散管加入與 壓積紅細(xì)胞相等的生理鹽水后搖勻，放入561水浴箱5 7min （不要蓋）后取出，離心（ 1000 r/min） 12 min, 取出上清即為紅細(xì)胞的熱放散液。取微柱凝

5、膠卡分別標(biāo)記酸 放散、熱放散、上清對(duì)照、oc字樣，標(biāo)記好后在各孔（oc 孔加入oc）內(nèi)加入0.8%1.0%與病人血型相同的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì) 胞懸液50 pl,再加入相應(yīng)的放散液75 pl （上清孔內(nèi)加入 75ul ±清液，oc孔加入熱放散液或酸放散液75 ul）后放 入孵育器孵育15min,離心lomin觀察結(jié)果，結(jié)果報(bào)告取陽(yáng) 性者。1. 4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析pems 3. 1軟件包進(jìn)行組間比較，p0.05o 462例新生兒 abo溶血病抗體釋放試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表1）,酸放散與熱 放散檢測(cè)不一致的病例凝集強(qiáng)度比較（見(jiàn)表2）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：（1）.酸放散陽(yáng)性與熱放散陽(yáng)性整體比較：x2=2. 8247,p

6、=0. 0928（2）.酸放散、熱放散聯(lián)合陽(yáng)性與酸放散比較： x2=l 1.9753, p=0. 0005 ；與熱放散比較:x2二 3. 2066 ,p=0. 0733（3）.日齡：酸放散與熱放散比較：比較x2=3. 8728, p=0. 0491；比較 x2=l. 1097, p=0. 292；比較 x2=l. 1868, p=0. 2760（4）.血型比較：a型酸放散與熱放散比較x2=4. 3016, p=0. 0381, b型酸放散與熱放散比較x2=0. 3985, p=0. 52793討論新生兒abo-hdn血清學(xué)檢測(cè)主要是新生兒溶血三項(xiàng)試 驗(yàn)，即直接coomb, s試驗(yàn)（dat）、游

7、離抗體試驗(yàn)和抗體釋 放試驗(yàn)，3項(xiàng)試驗(yàn)中抗體釋放試驗(yàn)敏感度最高，是最可靠的 檢測(cè)方法5,也是判定hdn最有力的證據(jù)6?？贵w釋放試 驗(yàn)是通過(guò)物理或化學(xué)方法把吸附于細(xì)胞膜上的抗體解離下 來(lái)，成為放散液，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢測(cè)抗體及其相對(duì)應(yīng)的特 異性。陽(yáng)性說(shuō)明含有與母體相對(duì)應(yīng)的抗體，可確診為ab0溶 血病。因抗體釋放試驗(yàn)對(duì)新生兒ab0-hdn的早期診斷、評(píng)估 疾病程度、選擇治療方案等有其特殊的指導(dǎo)意義7,其陽(yáng) 性率的高低可直接影響到新生兒ab0-hdn的診斷和治療，早 期診斷和早期光療或早期應(yīng)用大劑量人血丙種球蛋白可迅 速降低血清膽紅素，縮短黃疸病程8, 9,在一定程度上 可以替代換血療法10, 11,減

8、少換血并防止膽紅素腦病的 發(fā)生12, 13 o從上文的結(jié)果可見(jiàn)，酸放散與熱放散聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性率明 顯高于單一方法，與酸放散比，p0. 05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 但陽(yáng)性百分率高于單一的熱放散。熱放散陽(yáng)性時(shí)酸放散有46 例為陰性，占9. 96%,而酸放散為陽(yáng)性時(shí)熱放散有23例為陰 性，占4. 98%,兩者檢測(cè)的差異說(shuō)明用單一檢測(cè)方法均出現(xiàn) 不同程度漏檢，該組病例漏檢以酸放散多嚴(yán)重，p 從 日齡階段觀察各個(gè)階段均存在檢測(cè)結(jié)果不一致的病例，隨日 齡的增大不一致逐漸減少，以13d的患兒最多，占76. 68%(53/69),統(tǒng)計(jì)學(xué)比較 x2=10. 7231,p=0. 0011,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，若此階段單用酸

9、放散時(shí)即有9. 92%陽(yáng)性病例漏檢，該 組病例13d共有383例，即有38例陽(yáng)性病例被漏檢，使 用熱放散時(shí)有15例漏檢，此階段用單一檢測(cè)方法漏檢現(xiàn)象 嚴(yán)重，因此2種方法同時(shí)使用減少漏檢，提高陽(yáng)性率，為臨 床提供可靠的診療依據(jù)。13d是新生兒ab0溶血病早期治 療最佳時(shí)期，李偉生14等報(bào)道“日齡w3d與日齡3d治療 比較血清膽紅素下降，hb的變化及黃疸消退時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì) 學(xué)義。據(jù)筆者觀察，該組病例使用酸放散與熱放散同時(shí)檢測(cè), 結(jié)果取陽(yáng)性者，其陽(yáng)性結(jié)果與臨床診斷相符，結(jié)果不一致的 病例按陽(yáng)性報(bào)告后，按新生兒ab0-hdn治療效果好。追蹤這 些病例病史、臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查，患兒黃疸出現(xiàn)較早， 生后

10、24h3d內(nèi)出現(xiàn)，進(jìn)展快，母親血型均為0型，患兒為 a或b型，以間接結(jié)合膽紅素升高為主，hb、rbc均有所下 降，未查出其他原因，而患兒紅細(xì)胞放散液中抗體的特異性 是用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞來(lái)確定的，其陽(yáng)性說(shuō)明含有與母親相對(duì)應(yīng)的 特異性抗體，符合臨床診斷為abo-hdn,另一方面新生兒溶 血病3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)是公認(rèn)可靠的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法，確診hdn實(shí)驗(yàn)室 主要依據(jù)是患兒紅細(xì)胞放散液中被檢出來(lái)自母體的對(duì)應(yīng)的 特異性抗體，其陽(yáng)性可確診為ab0-hdne15,這些檢測(cè)結(jié)果 不一致的病例符合abo-hdn診斷，只是因檢測(cè)方法的不同， 出現(xiàn)漏檢，用2種方法同時(shí)檢測(cè)正好互補(bǔ)不足。酸放散與熱放散比較：日齡13d時(shí)熱放散較酸放散陽(yáng)

11、性率髙，p=0. 0491,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；a型患兒使用熱放 散時(shí)陽(yáng)性率較酸放散高，p=0. 0381,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng) 計(jì)學(xué)分析在4d后漏檢差異已沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但結(jié)果應(yīng)為 陽(yáng)性的病例可能出現(xiàn)陰性檢測(cè)結(jié)果，假陰性可能誤導(dǎo)臨床診 斷和治療。新生兒abo-hdn溶血病抗體釋放試驗(yàn)由于檢測(cè)方 法和放散液劑量16的不同常出現(xiàn)陽(yáng)性率不一致，產(chǎn)生漏 檢，因此若單種方法檢測(cè)為陰性而又高度懷疑其為陽(yáng)性病 例，不妨采用另一種方法檢測(cè)，提高檢出率。本文及多種文 獻(xiàn)資料證實(shí)檢測(cè)方法的不同和患兒日齡的不同導(dǎo)致檢出陽(yáng) 性率也不同，因此2種或多種方法同時(shí)檢測(cè)可互補(bǔ)不足，另 檢測(cè)abo溶血病盡量爭(zhēng)取生后13d內(nèi)檢測(cè)

12、，以達(dá)到最大限 度減少漏檢，為患兒提供早期確診早期治療機(jī)會(huì)，減少膽紅 素腦病的發(fā)生。檢測(cè)結(jié)果不一致的病例抗體凝集強(qiáng)度+4+ 均有，以+多見(jiàn)，占 50. 72% (35/69), 2+占 33. 33% (23/69), 3+-4+占15.94% (11/69),不一致隨著凝集強(qiáng)度的增強(qiáng)而減 少。綜上所述，若能用2種方法同時(shí)檢測(cè)，可互補(bǔ)不足，提 高陽(yáng)性率，減少漏檢，從而減少不必要的誤診，指導(dǎo)臨床正 確用藥；若不能兩者同時(shí)應(yīng)用時(shí)，可在日齡13d、7d后采 用熱放散、a型患兒選用熱放散進(jìn)行檢測(cè)，46d患兒采用 酸放散，以提高陽(yáng)性率。參考文獻(xiàn)1 張麗，馮強(qiáng)新生兒溶血病的檢測(cè)與防治進(jìn)展j. 實(shí)用醫(yī)技雜志

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