TSH熒光酶免疫分析法

1、tsh熒光酶免疫檢測(cè)法本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!相關(guān)幫助n需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問(wèn)fantibody全球抗體搜索引擎nfantibody全球抗體搜索引擎是一個(gè)供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫(kù)，其抗體信息數(shù)據(jù)來(lái)源于全球范圍的研究機(jī)構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫(kù)與抗體應(yīng)用評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評(píng)估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺(tái)n需要相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問(wèn)探生網(wǎng)biomean進(jìn)行咨詢，期待

2、您的加入本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!一、先天性甲低的新生兒篩查方法n1、酶免疫分析法 (enzymelmmunoassay，eia)n2、放射免疫分析法 (radioimmunoassay，ria)n3、免疫放射法 (immunoradiometricassay，irma)本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!一、先天性甲低的新生兒篩查方法n4、時(shí)間分辨熒光免疫分析法 trfia me-resolvedfluorescenceimmunoassayn5、熒光酶免疫分析法feia fluoresee

3、nceenzymeimmunoassayn6、自動(dòng)新生兒疾病篩查系統(tǒng)(automatednewbornscreeningsystem)本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh熒光酶免疫分析法本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!1、原 理本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!1原理n熒光酶免疫分析法(feia)是一種高度靈敏的檢測(cè)方法，用feia測(cè)定血htsh基于一步夾心法一步夾心法原理，采用固相、雙位點(diǎn)固相、雙位點(diǎn)熒光酶免疫分析法。n干血斑中洗滌出的htsh

4、，同時(shí)與包被在酶標(biāo)板上抗htsh的單克隆抗體分子和辣根過(guò)氧化物酶(hrp)標(biāo)記的抗htsh亞基的第二抗體結(jié)合。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!被測(cè)tsh抗原被測(cè)tsh抗原有兩個(gè)抗原決定簇 故叫雙位點(diǎn)位點(diǎn)位點(diǎn)本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體包被在反應(yīng)板上的tsh單克隆抗體故叫固相本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrp位點(diǎn)本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全

5、球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體被測(cè)tsh抗原tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體被測(cè)tsh抗原被測(cè)tsh抗原h(huán)pr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrp被測(cè)tsh抗原被測(cè)tsh抗原h(huán)rphrphrptshtsh單克隆抗體的酶標(biāo)反應(yīng)孔內(nèi)。（一步法）單克隆抗體的酶標(biāo)反應(yīng)孔內(nèi)。（一步法）ph：6.5本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體被測(cè)tsh抗原tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體被測(cè)tsh抗原被測(cè)tsh抗原h(huán)pr標(biāo)記的抗tsh

6、亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrp被測(cè)tsh抗原被測(cè)tsh抗原h(huán)rphrphrphpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體被測(cè)tsh抗原被測(cè)tsh抗原h(huán)rphrp本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體被測(cè)tsh抗原tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體被測(cè)tsh抗原被測(cè)tsh抗原h(huán)pr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrphrphrp本文由探生科技技術(shù)人員提供,fa

7、ntibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體被測(cè)tsh抗原tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體被測(cè)tsh抗原被測(cè)tsh抗原h(huán)pr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrphrphrpph：7.8本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!2hppa+h2o2 dpdpa+2h2ohrp本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!原理n以甘氨酸緩沖液終止酶反應(yīng)。ph：10.3本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊

8、的抗體專家!原理n用熒光讀數(shù)儀以320nm為激發(fā)光，405nm為發(fā)射光測(cè)定熒光值。由于熒光強(qiáng)度與酶標(biāo)反應(yīng)板上結(jié)合的htsh數(shù)量成正比，因此，通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)血斑熒光值和樣本的熒光值，也就可換算出樣本血斑中htsh的含量。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)：n熒光物質(zhì)為dpdpa，是由hppa與雙氧水在hrp的作用下脫氫結(jié)合而成，它吸收特定波長(zhǎng)（320nm）的光能后，發(fā)生原子重排，同時(shí)發(fā)射出更長(zhǎng)波長(zhǎng)（405nm）的光。 激發(fā)光波長(zhǎng)320nm發(fā)光波長(zhǎng)405nm本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)

9、：n鑒于hppa（3-p-羥基苯丙酸）敏感性高、動(dòng)力學(xué)范圍廣，已被廣泛用于替代傳統(tǒng)eia顯色劑，作為辣根過(guò)氧化物酶的底物。以hppa作底物的feia可檢測(cè)極低和極高濃度，具有明顯優(yōu)勢(shì)，由于htsh樣本正常值與非正常值之間差異大，故該法特別適用于htsh檢測(cè)。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)：nhppah2o2反應(yīng)生成的熒光強(qiáng)度的影響因素中，最重要的是底物濃度、反應(yīng)液和終止液的ph值。酶反應(yīng)最佳ph值為7.8。加入堿性緩沖液終止酶反應(yīng)，又可顯著增強(qiáng)熒光強(qiáng)度。經(jīng)測(cè)定，使用ph10.3、1.5 moll甘氨酸緩沖液可獲得最大熒光強(qiáng)度。在低濃度ht

10、sh下，該緩沖液可使熒光強(qiáng)度增加5倍，當(dāng)htsh濃度高于80miul時(shí)，增強(qiáng)作用依次減弱。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)：n熒光產(chǎn)物穩(wěn)定，可放置過(guò)夜后測(cè)定。無(wú)論在室溫(2025)或30孵育用feia測(cè)定htsh的敏感性無(wú)變化；而在37條件下孵育會(huì)增加背景熒光，降低靈敏度。建議底物孵育溫度為2030。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)nfeia檢測(cè)法方法先進(jìn)，重復(fù)性高。n一般情況下，批內(nèi)分析變異系數(shù)和批間分析變異系數(shù)均小于10。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎

11、，您身邊的抗體專家!特點(diǎn)n應(yīng)用feia法進(jìn)行htsh檢測(cè)時(shí)，其他垂體激素和人絨毛膜促性腺激素(hcg)對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾極小。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!2、儀器和試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!以下儀器均由芬蘭labsystems公司提供本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!(1)、儀器：n、熒光讀數(shù)儀；、孵育振蕩儀；、自動(dòng)洗板儀；、3mm打孔器，或打孔鉗；、加樣器；八道加樣器。以上儀器均由芬蘭labsystems公司提供。、3mm實(shí)驗(yàn)血片塑料支架

12、；、電腦、打印機(jī)；、冰箱。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!材料n、新生兒篩查濾紙干血斑標(biāo)本：用s&s903濾紙，按新生兒疾病篩查濾紙干血斑標(biāo)本采集方法采集；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑n、抗htsh包被的酶標(biāo)板（1）：抗htsh抗體igg(小鼠單克隆抗體)包被的酶標(biāo)板，濃度1.0g/m1。所有包被酶標(biāo)板均置于有干燥劑的錫箔密封袋中以防止潮濕。潮濕將破壞酶標(biāo)板的包被，嚴(yán)重縮短試劑盒保存期。試劑盒通常儲(chǔ)存在

13、28，為防止打開(kāi)錫箔密封袋時(shí)水蒸氣凝結(jié)破壞酶標(biāo)板性能，試劑盒使用前需置室溫半小時(shí)后再打開(kāi)。若錫箔密封袋在使用前受損或干燥劑變色，請(qǐng)勿使用；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、抗htshhrp酶結(jié)合物（2） ：辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗htsh(小鼠單克隆抗體濃度50ngiggm1)抗體，加02的kathoncge作為防腐劑；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、酶結(jié)合物稀釋液（3） ：緩沖鹽溶液，ph6.5，加0.2的kathoncg作為防腐劑。用于酶結(jié)合物的稀釋；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,fa

14、ntibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、hppa熒光底物（4a） ：3p羥基苯丙酸溶于tris緩沖液(ph7.8)中，加0.2的kathoncge作為防腐劑；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、h2o2溶液（4b） ：檸檬酸醋酸緩沖液，ph6.0，含過(guò)氧化氫。避免與氧化還原劑接觸；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、終止液：甘氨酸緩沖液（5） ，ph10.3；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、洗滌液（6） ：含有吐溫20的磷酸鹽緩

15、沖液，加入0.05bronidox作為防腐劑。按1:9比例加入蒸餾水稀釋。由于儲(chǔ)于4可能形成結(jié)晶，稀釋前溫度需達(dá)1830；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、htsh標(biāo)準(zhǔn)品（7） ：tsh存在于干血濾紙片的血斑中，包括一個(gè)零空白。存于裝有干燥劑的鋁箔袋中。加入0.05bronidox作為防腐劑。標(biāo)準(zhǔn)品由紅細(xì)胞壓積為50一55的人血液制得，所含的htsh濃度經(jīng)過(guò)who2nd irp(80558)校正；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、質(zhì)控物（8） ：htsh存在于濾紙上的干血濾紙血斑中。加入00

16、5bronidox作為防腐劑。1張濾紙中具有5套2種濃度質(zhì)控物(品)，存于裝有干燥劑的鋁箔袋中。n標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物(品)的tsh濃度有批號(hào)差異，需參照每一試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物(品)的記錄單。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑盒內(nèi)的tsh標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物的濃度標(biāo)準(zhǔn)血片tsh濃度（miu/l）質(zhì)控物tsh濃度（miu/l）a1.0c12b7.5c220c15.0d40e60f100本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!3、實(shí)驗(yàn)操作本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗

17、體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟n(1)用編碼機(jī)給每一張血片按次序蓋上卡片號(hào)，此卡片號(hào)也就是我們的檢驗(yàn)編號(hào)。n在檢驗(yàn)前，所有的試劑和酶標(biāo)反應(yīng)板應(yīng)放置室溫平衡30分鐘。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟n(2)做好實(shí)驗(yàn)登記，包括檢測(cè)日期、檢測(cè)區(qū)間、復(fù)查樣本號(hào)等。n編寫好實(shí)驗(yàn)操作卡；把本次實(shí)驗(yàn)要做的標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控、復(fù)查標(biāo)本、重查標(biāo)本及常規(guī)標(biāo)本的卡片號(hào)在電腦中用不同的顏色的字打印出來(lái)，看上去一目了然，嚴(yán)防打孔時(shí)張冠李戴。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!第一板12345678910 11 12aae33333

18、900019000990017900259003390041900499005790065bae33333cbf66666dbf66666ecc188888fcc188889gdc289993hdc28999890072試劑批號(hào)：試劑批號(hào)：163zc1 標(biāo)準(zhǔn)濃度：標(biāo)準(zhǔn)濃度：1、9、20、44、66、87。質(zhì)控批號(hào)：質(zhì)控批號(hào)：163zc1 范范 圍：圍：高值：高值：14-37，中值，中值26。低值：低值：0-5，中值，中值3.0。佛山市新生兒疾病篩查中心實(shí)驗(yàn)操作卡佛山市新生兒疾病篩查中心實(shí)驗(yàn)操作卡 檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目: tsh 檢測(cè)時(shí)間檢測(cè)時(shí)間: 2003年年11月月11日日 操作者：操作者：本文

19、由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟n（3）對(duì)照操作卡在濾紙血斑上打下直徑3mm的標(biāo)準(zhǔn)品(雙孔)、質(zhì)控物(品)(雙孔)和標(biāo)本，并依次放置到抗htsh包被的酶標(biāo)板孔內(nèi)。注意：為避免層析效應(yīng)，應(yīng)圍繞血樣點(diǎn)中央對(duì)稱地打孔。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!血斑打孔的位置打孔時(shí)要選擇合格的血斑，同時(shí)要選擇合適的地方，兩面都要看一下。由于層析效應(yīng)中心位比周邊位的濃度要高10%左右。正確太靠邊太中心本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟n(4)加入2

20、00l抗htshhrp酶結(jié)合物。然后用膠膜覆蓋密封。n配制抗htshhrp酶結(jié)合物溶液：一個(gè)酶標(biāo)反應(yīng)板需配量，200l酶結(jié)合物（2號(hào)溶液）加20ml酶結(jié)合物稀釋液（3號(hào)溶液）。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟n(5)選擇以下步驟進(jìn)行孵育：過(guò)程a：室溫(1830)振蕩孵育3小時(shí)，振蕩速率650轉(zhuǎn)分。過(guò)程b：室溫(1830)振蕩15分鐘，4過(guò)夜孵育。備注：室溫超過(guò)30，最好選擇過(guò)程b孵育，以避免高本底干擾。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟n(6)洗板n手工洗滌：去掉溶液和濾紙

21、片， 每孔加入300l的洗滌液，倒去孔內(nèi)液體并拍打，使孔內(nèi)無(wú)殘液，重復(fù)操作4次，倒置于紙巾上；n洗板儀洗滌：洗滌液每孔400l，先洗滌一次，甩掉溶液和濾紙片，再重復(fù)洗滌4次。n使用電動(dòng)打孔去紙片系統(tǒng)可簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作。如labsystems公司的電動(dòng)打孔器可將樣品固定在一次性塑料支架上，將帶有樣品紙片的支架插入酶標(biāo)板反應(yīng)孔內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)。孵育結(jié)束后，樣品紙片和支架一同去除。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟n(7)每孔加入200l底物溶液。底物溶液的配制：每個(gè)3酶標(biāo)反應(yīng)板配60ml，即50mlhppa溶液（4a溶液）加10ml雙氧水溶液（4b溶液）。n(8)室溫1830振蕩孵育l小時(shí)。n(9)每孔加入100l終止液，即甘氨酸緩沖液（5號(hào)溶液） 。n(10)在60分鐘內(nèi)，用熒光讀數(shù)儀測(cè)定各孔的熒光值。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實(shí)驗(yàn)操作步驟打孔本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!4、結(jié)果計(jì)算本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!結(jié)果計(jì)算n測(cè)量結(jié)束后，可利用電腦工作軟進(jìn)行自動(dòng)