司丙紅霉素的體內(nèi)外抗菌活性研究

1、司丙紅霉素的體內(nèi)外抗菌活性研究 【摘要】 目的 評價(jià)司丙紅霉素的體內(nèi)外抗菌活性。方法 采用瓊脂平皿二倍稀 釋法測定司丙紅霉素對 800 株臨床分離致病菌的體外抗菌作用，并與紅霉素、 羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、哌拉西林、環(huán)丙沙星和頭孢噻肟進(jìn)行比較； 采用小鼠腹腔感染模型，觀察司丙紅霉素口服對金黃色葡萄球菌、化膿鏈球 菌、肺炎鏈球菌感染小鼠的體內(nèi)療效，并與紅霉素進(jìn)行比較。結(jié)果 司丙紅霉素 對 112 株甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌 (金葡菌 )(MSSA)、36 株不產(chǎn)酶金葡菌、 111 株化膿鏈球菌、 32株肺炎鏈球菌、 40株流感嗜血桿菌和 30株副流感嗜血 桿菌的抗菌活性較強(qiáng)，MIC50值

2、分別為0.5、4、4、0.125、4、0.125mg/L ;司 丙紅霉素對 73株耐甲氧西林金葡菌 (MRSA)、 149株產(chǎn)酶金葡菌、 53株甲氧西林 敏感表皮葡萄球菌(表葡菌)(MSSE)、128株耐甲氧西林表葡菌(MRSE) 153株產(chǎn) 酶表葡菌、 28株不產(chǎn)酶表葡菌、 107株糞腸球菌、 37株大腸埃希菌、 37株銅綠 假單胞菌和37株肺炎克雷伯菌的抗菌活性均較弱，MIC50值除肺炎克雷伯菌為 32mg/L外，其余均在128mg/L以上。司丙紅霉素對金葡菌顯示抑菌作用，對化 膿鏈球菌在24倍MIC濃度時(shí)顯示殺菌作用，司丙紅霉素抗金葡菌和化膿鏈球 菌的活性隨著pH的增加而增強(qiáng)，血清和接種

3、量對司丙紅霉素抗金葡菌和化膿鏈 球菌的活性無明顯影響。司丙紅霉素對金葡菌、化膿鏈球菌和肺炎鏈球菌感染 小鼠具有很強(qiáng)的保護(hù)作用 , 對化膿鏈球菌感染小鼠的療效優(yōu)于紅霉素。結(jié)論 司 丙紅霉素具有較強(qiáng)的體內(nèi)外抗菌活性，有進(jìn)一步開發(fā)研究價(jià)值。 In vitro and in vivo antibacterial activities of erythromycin stinoprat YANG Xin-yi, LI Cong-ran, WANG Yue-ming,et al.Institute of Medicinal Biotechnology ， Peking Union Medical Coll

4、ege and Chinese Academy of Medical Sciences ， Beijing 100050, China 【 Abstract 】 Objective To evaluate the in vitro and in vivo antibacterial activities of erythromycin stinoprat. Methods The minimal inhibitory concentrations (MICs) of erythromycin stinoprat against 800 clinical isolates of bacteria

5、 were tested by stardard agar dilution method in comparison with erythromycin, roxithromycin, clarithromycin, azithromycin,piperacillin, ciprofloxacin and cefotaxime. The in vivo antibacterial activities of erythromycin stinoprat were determined and compared with that of erythromycin in mice with ex

6、perimental systemic infection caused by Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes and Steptococcus pneumoniae. Results Erythromycin stinoprat had a strong antibacterial activity against methicillin- susceptible S. aureus(MSSA),B -lactamases-negative S.aureus, S. pyogenes, Klebsiella pneumoniae,

7、H. influnzae and H. parainflunzae. The MIC50s were 0.5 、4、4、0.125、4、0.125 mg/L, respectively. Erythromycin stinoprat had a poor antibacterial activity against methicillin- resistant staphylococcus aureus (MRSA), B -lactamases- producing S.aureus, methicillin-susceptible staphylococcus epidermidis(MS

8、SE),methicillin-resistant staphylococcus epidermidis(MRSE), B -lactamases- producing S.epidermilis, B - lactamases-negative S.epidermilis, E. faecalis, E.coli, Pseudomonas.aeruginosa and K. pneumoniae. The MIC50 were 128 mg/L except 32 mg/L against K.pneumoniae, respectively.Erythromycin stinoprat w

9、as bacteriostatic against S.aureus, but bactericidal against S.pyogenes at two to four times the MIC. Antibacterial activity of erythromycin stinoprat was enhanced as the increase of pH aginst S.aureus and S.pyogenes. The inoculum size and serum have no effect on the MICs of erythromycin stinoprat a

10、gainst S.aureus and S.pyogenes. The in vivo antibacterial activities of erythromycin stinoprat were superior to that of erythromycin in mice infected with S.pyogenes 94-3 and S.pyogenes 556, similar to that of erythromycin in mice infected with S.aureus 91-29, S.aureus 15, S.pneumoniae 9-9 and S.pne

11、umoniae 9-5. Conclusion Erythromycin stinoprat had excellent in vitro and in vivo antibacterial activities and had a value for further research and development. 【Key words 】 erythromycin stinoprat; erythromycin; MIC ED50 司丙紅霉素 (erythromycin stinoprat) 由德國首先合成的一種新的紅霉 素衍生物 , 在德國商品名為 Karex-Wolff 或 Erys

12、ec, 在瑞士商品名為 Karex 1。為評價(jià)國產(chǎn)司丙紅霉素的抗菌活性 , 筆者對照紅霉素、羅紅霉素、克拉 霉素、阿奇霉素、哌拉西林、環(huán)丙沙星和頭孢噻肟，進(jìn)行了體內(nèi)外抗菌活性研 究。 1 材料與方法 1.1 材料 1.1.1 藥物司丙紅霉素效價(jià)610卩/mg,批號20010510,羅紅霉素 效價(jià) 878u/mg, 批號 30351-200102，克拉霉素效價(jià) 980u/mg, 批號 130356200102, 阿奇霉素含量 90.6%, 批號 17419-132-15, 均由醫(yī)藥生物技術(shù)所合成 室提供 ; 紅霉素效價(jià) 884u/mg, 批號 0307-9702, 哌拉西林含量 91.3%，批號

13、 0419-9502，環(huán)丙沙星含量 84.2%，批號 0451-9701，頭孢噻肟含量 90.6%, 批 號 130483-200102, 均為中國藥品生物制品檢定所標(biāo)準(zhǔn)品。 1.1.2 培養(yǎng)基與試劑MH 肉湯(Mueller-Hi nto n Broth)培養(yǎng)基、 腦 心浸液培養(yǎng)基均為美國DIFCO公司產(chǎn)品；MH瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯和小牛血清 為中國藥品生物制品檢定所產(chǎn)品 ; 高活性干酵母為廣東東莞糖廠酵母分廠產(chǎn) 品。HTMW養(yǎng)基(Haemophilus Test Medium)按照 NCCLS199規(guī)定方法配制 2,即在MH瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，加入15卩g/ml輔酶I、15卩g/ml牛血紅蛋

14、 白和 5mg/ml 酵母粉， pH7.4。 1.1.3 細(xì)菌試驗(yàn)菌株為20002001年從北京地區(qū)醫(yī)院收集的 800株臨床分離菌，革蘭陽性菌有：甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌 (MSSA)112 株、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)73株、產(chǎn)B內(nèi)酰胺酶金葡菌149株、 不產(chǎn)B內(nèi)酰胺酶金葡菌36株、甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(表葡菌)(MSSE)53 株、耐甲氧西林表葡菌(MRSE)128株、產(chǎn)B內(nèi)酰胺酶表葡菌153株、不產(chǎn)B 內(nèi)酰胺酶表葡菌 28株、化膿鏈球菌 111 株、肺炎鏈球菌 32株和糞腸球菌 107 株；革蘭陰性菌有：大腸埃希菌 37 株、銅綠假單胞菌 37 株、肺炎克雷伯菌 37

15、株、流感嗜血桿菌 40 株和副流感嗜血桿菌 30 株。選用金葡菌 ATCC2921、3 肺 炎鏈球菌 ATCC4961、9 流感嗜血桿菌 ATCC4924、7 糞腸球菌 ATCC2921、2 大腸埃 希菌ATCC25922銅綠假單胞菌 ATCC2785作為質(zhì)控菌,質(zhì)控菌MIC均在NCCLS 規(guī)定范圍內(nèi)，MRSA!苯唑青西林測定，具體方法均按照 NCCLS規(guī)定要求進(jìn)行 2， 3。 1.1.4 動物 ICR小鼠，外觀健康，體重1822g，雌、雄各半，由 北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司供應(yīng)，許可證號 : SCXK11-00-008。 1.2 方法 1.2.1最低抑菌濃度(MIC)測定 參照NCCL

16、SS準(zhǔn)2,3 ,采用 平皿二倍稀釋法和Denlay多點(diǎn)接種器進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)；藥物用 MH肉湯二倍稀釋 成各種所需濃度，分別加適量到平皿中，MH瓊脂培養(yǎng)基溶化后定量注入含藥液 平皿內(nèi)混勻,藥物的終濃度分別為 0.0075、0.015、0.031 28mg/L,肺 炎鏈球菌、化膿鏈球菌的培養(yǎng)基內(nèi)含 5%脫纖維的羊血 , 流感嗜血桿菌和副流感 嗜血桿菌采用HTM培養(yǎng)基，接種試驗(yàn)菌(接種量約為 104cfu/點(diǎn))后置35C恒 溫培養(yǎng)18h(肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌、流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌置 5%C0培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h)后觀察結(jié)果，無菌生長的平皿中所含藥物最小的濃度即 為最低抑菌濃度 (MIC)。 1.

17、2.2最低殺菌濃度(MBC)測定選用15株金葡菌、10株表葡菌 和 19 株化膿鏈球菌為試驗(yàn)菌，采用試管二倍稀釋法，先測出試驗(yàn)菌的 MIC, 再 依次將未見細(xì)菌生長各管培養(yǎng)液分別吸取 0.1 ml ，轉(zhuǎn)移到不含抗生素的瓊脂平 皿中，置35r培養(yǎng)18h后觀察結(jié)果,平皿上菌落數(shù)小于5個(gè)的最小稀釋度的藥 物濃度即為最低殺菌濃度 (MBC)。 123殺菌曲線測定采用金葡菌2株、化膿鏈球菌2株,在MH肉 湯培養(yǎng)基中，測定司丙紅霉素的 MIC,將試驗(yàn)菌35C 18h培養(yǎng)液接種于MH培養(yǎng) 基中,接種量為105cfu/ml, 置35E培養(yǎng)30min,加入劑量為1/44 MIC的司 丙紅霉素，置35C繼續(xù)培養(yǎng)定

18、時(shí)取樣，在營養(yǎng)瓊脂平板上計(jì)活菌落數(shù)，將菌落 數(shù)取對數(shù)值，繪制時(shí)間 -菌落數(shù)對數(shù)曲線即殺菌曲線 (KCs)。 1.2.4培養(yǎng)條件對MIC的影響選用金葡菌19株、化膿鏈球菌 18株，采用平皿二倍稀釋法，測定司丙紅霉素在培養(yǎng)基pH5.09.0、細(xì)菌接種 量103107cfu/ml、培養(yǎng)基內(nèi)含血清 25%75% 小鼠腹腔感染肺炎鏈球菌 9- 9和肺炎鏈球菌9-5，司丙紅霉素口服給藥后ED50值分別為24.63、 88.70mg/kg, 與紅霉素?zé)o明顯差異?？傊?，司丙紅霉素對化膿鏈球菌 94-3 感染 小鼠的體內(nèi)療效優(yōu)于紅霉素，0.01 0.05，結(jié)果見表6。 表5 血清對司丙紅霉素MIC的影響注：*化

19、膿鏈球菌5%表6司丙紅霉素 對感染小鼠體內(nèi)療效匕較 3 討論 司丙紅霉素是紅霉素與氨基酸的新鹽復(fù)合物，由于結(jié)構(gòu)中增加了氨基酸 部分，使其具有雙重功能，既能促進(jìn)藥物的吸收，又具有促進(jìn)黏液溶解的活 性，因此在改善吐痰癥狀和痰的粘性方面明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的紅霉素制劑。司丙紅 霉素口服生物利用度高，在血清、唾液和支氣管中活性成分的濃度匕紅霉素更 高，穩(wěn)定持續(xù)時(shí)間更長 5。 司丙紅霉素的抗菌作用機(jī)制是作用于細(xì)菌的核蛋白體50S 亞基，影響蛋 白質(zhì)的合成而產(chǎn)生抑菌作用6。本文體外MBC測定試驗(yàn)結(jié)果顯示，司丙紅霉 素對15株金葡菌的MBC50/MIC50 MBC90/MIC9C比值為816,對10株表葡菌 的MB

20、C50/MIC50 MBC90/MIC90：匕值均為4,對19株化膿鏈球菌的 MBC50/MIC50 MBC90/MIC9比值分別為24;殺菌曲線試驗(yàn)結(jié)果顯示，司丙紅 霉素對金葡菌顯示抑菌作用，對化膿鏈球菌在24倍MIC濃度時(shí)顯示一定殺菌 作用。本試驗(yàn)同時(shí)使用進(jìn)口司丙紅霉素進(jìn)行對照，結(jié)果表明，國產(chǎn)和進(jìn)口司丙 紅霉素對800株臨床分離菌的抗菌活性相近，兩者的 MIC范圍、MIC50 MIC90 均基本相同。 司丙紅霉素屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，對金葡菌和化膿鏈球菌的抗菌活性 , 隨著pH值的增加而明顯增強(qiáng)，即抗菌活性在堿性環(huán)境明顯增強(qiáng)，血清濃度和不 同接種量金葡菌和化膿鏈球菌對司丙紅霉素的抗菌活性無明顯影響 , 這與其他 大環(huán)內(nèi)酯類抗生素相似 6。 【參考文獻(xiàn)】 1 Hoffmann C, Lauschner R, Schulze B. Erythromycin stinoprat-ein makrolid mit besonderen Eigenschafen. ARS Medici,2001,19:938-944. 2 National committee for clinical laboratory standards.methods for dilution antimicrobial susceptibility tests