微生物學(xué) 實(shí)驗(yàn)1普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)的觀察

1、實(shí)驗(yàn)一 普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)的觀察主主 講講: :文晴文晴生命科學(xué)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院2021-7-10實(shí)驗(yàn)課要求作圖要求：實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求用藍(lán)色或黑色鋼 筆、圓珠筆或簽字筆撰寫，要 求用鉛筆作圖（包括視野、觀 察結(jié)果、放大倍數(shù)等；值日要求：每四人一組，包括物品歸位、 黑板、地面、臺面等，值日結(jié) 束后經(jīng)老師同意方可離開。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?了解顯微鏡的構(gòu)造和各部分的作用，掌握了解顯微鏡的構(gòu)造和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用方法顯微鏡的使用方法 學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法 了解并觀察細(xì)菌的三種基本形態(tài)了解并觀察細(xì)菌的三種基本形態(tài)目鏡目鏡鏡筒鏡筒轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換

2、器物鏡物鏡通光孔通光孔聚光器聚光器壓片夾壓片夾反光鏡反光鏡鏡座鏡座粗準(zhǔn)焦螺旋粗準(zhǔn)焦螺旋細(xì)準(zhǔn)焦螺旋細(xì)準(zhǔn)焦螺旋 鏡臂鏡臂 鏡柱鏡柱載物臺載物臺 機(jī)械部分和光學(xué)部分機(jī)械部分和光學(xué)部分普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造可分為兩部分：普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造可分為兩部分：一、普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)一、普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)二、實(shí)驗(yàn)原理：顯微鏡的工作原理二、實(shí)驗(yàn)原理：顯微鏡的工作原理物鏡上的標(biāo)識物鏡上的標(biāo)識 顯微鏡的總放大倍數(shù)顯微鏡的總放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)物鏡放大倍數(shù)X目鏡放大倍數(shù)目鏡放大倍數(shù)油鏡的放大倍數(shù)可達(dá)油鏡的放大倍數(shù)可達(dá)100100 ，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的

3、光照強(qiáng)度卻最大。焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強(qiáng)度卻最大。由低倍鏡轉(zhuǎn)為高倍鏡時(shí)，通過增加照明強(qiáng)度和開大虹彩光圈，以增大高倍鏡及油鏡下視野的亮度。 從標(biāo)本玻片透過來的光從標(biāo)本玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進(jìn)入空氣，再進(jìn)入鏡頭），有進(jìn)入空氣，再進(jìn)入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不些光線會因折射或全反射，不能進(jìn)入鏡頭，致使在使用油鏡能進(jìn)入鏡頭，致使在使用油鏡時(shí)會因射入的光線較少，物像時(shí)會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。顯現(xiàn)不清。為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時(shí)需在油鏡和為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時(shí)需在油鏡和玻片之間加入與玻片之間加入與玻

4、璃的折射率玻璃的折射率相仿的鏡油（通常使用相仿的鏡油（通常使用香柏香柏油油，其折射率，其折射率n =1.52n =1.52）。）。增加了視野的進(jìn)光量，從而使增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。物象更加清晰。顯微鏡的分辨率或分辨力（顯微鏡的分辨率或分辨力（resolution or resolution or resolving powerresolving power）是指）是指顯微鏡能辨別兩點(diǎn)之間最顯微鏡能辨別兩點(diǎn)之間最小距離的能力小距離的能力。從物理學(xué)角度看，光學(xué)顯微鏡的。從物理學(xué)角度看，光學(xué)顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可

5、表示為：可表示為：式中：式中： D =D =顯微鏡分辨兩點(diǎn)間的最短距離顯微鏡分辨兩點(diǎn)間的最短距離 = =光波波長光波波長（平均（平均0.550.55 m)m) NA=NA=物鏡的數(shù)值孔徑值。物鏡的數(shù)值孔徑值。2DNA顯微鏡的性能顯微鏡的性能 數(shù)值孔徑數(shù)值孔徑則取決于物鏡的則取決于物鏡的鏡口鏡口角角和玻片與鏡頭間和玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率介質(zhì)的折射率，可表示為：可表示為：NA=NA=n n sin(/2 sin(/2） n: n: 物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率物鏡和被檢標(biāo)本間介質(zhì)的折射率 ：鏡口角。鏡口角。物質(zhì)物質(zhì)折射率折射率物質(zhì)物質(zhì)折射率折射率空氣空氣1 1亞麻油亞麻油1.471.47水水1.

6、331.33石蠟油石蠟油1.4871.487甘油甘油1.4871.487香柏油香柏油1.5151.515玻璃玻璃1.521.52丁香油丁香油1.5351.535冬青油冬青油1.5361.536濃松節(jié)油濃松節(jié)油1.5421.542以香柏油為介質(zhì)的油鏡所能達(dá)到的數(shù)值孔徑（以香柏油為介質(zhì)的油鏡所能達(dá)到的數(shù)值孔徑（NANA一般在一般在1.21.21.41.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡（要高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡（NANA都低于都低于1.01.0）。）。數(shù)值孔徑通常在數(shù)值孔徑通常在0.650.65左右的高倍鏡只能分辨距離不小于左右的高倍鏡只能分辨距離不小于0.40.4m m的物體，而油鏡的的物體，而油

7、鏡的分辨率卻可達(dá)到分辨率卻可達(dá)到0.20.2m m左右。左右。三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材1 1、標(biāo)本片：四聯(lián)球菌、標(biāo)本片：四聯(lián)球菌、枯草芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌2 2、試劑：、試劑：香柏油、二甲苯香柏油、二甲苯3 3、儀器及其它用具：、儀器及其它用具：顯微鏡、擦鏡紙等顯微鏡、擦鏡紙等四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1 1、顯微觀察步驟、顯微觀察步驟 1 1）低倍鏡觀察）低倍鏡觀察（1010）：）： 2 2）高倍鏡觀察）高倍鏡觀察（4040）：）： 3 3）油鏡觀察）油鏡觀察（100100）：）：2 2、顯微鏡用畢后的處理、顯微鏡用畢后的處理低倍鏡的操作低倍鏡的操作右手握住鏡臂，左手拖住鏡座，將顯微鏡放在自

8、己身體的右手握住鏡臂，左手拖住鏡座，將顯微鏡放在自己身體的前方，離實(shí)驗(yàn)臺邊緣前方，離實(shí)驗(yàn)臺邊緣10 cm10 cm左右處；左右處；接通電源，打開顯微鏡電源開關(guān)；接通電源，打開顯微鏡電源開關(guān)；3. 3. 旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器，將低倍鏡移到鏡筒正下方；旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器，將低倍鏡移到鏡筒正下方；4. 4. 調(diào)節(jié)光源強(qiáng)度，同時(shí)用眼對準(zhǔn)目鏡，仔細(xì)觀察，視野亮度調(diào)節(jié)光源強(qiáng)度，同時(shí)用眼對準(zhǔn)目鏡，仔細(xì)觀察，視野亮度均勻；均勻；5. 5. 將標(biāo)本放在載物臺上，旋轉(zhuǎn)推動(dòng)器，使觀察的目的物置于將標(biāo)本放在載物臺上，旋轉(zhuǎn)推動(dòng)器，使觀察的目的物置于圓孔的正中央；圓孔的正中央；6. 6. 轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，上升載物臺至距離物鏡約轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺

9、旋，上升載物臺至距離物鏡約0.5 cm0.5 cm（注意：注意：眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰眼睛注視物鏡，以防物鏡和載玻片相碰）；）；7. 7. 左眼觀察目鏡，調(diào)節(jié)粗、細(xì)準(zhǔn)焦螺旋直至目的物清晰為止。左眼觀察目鏡，調(diào)節(jié)粗、細(xì)準(zhǔn)焦螺旋直至目的物清晰為止。高倍鏡的操作高倍鏡的操作轉(zhuǎn)換物鏡。旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器將低倍鏡換成高倍鏡轉(zhuǎn)換物鏡。旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器將低倍鏡換成高倍鏡（注意：（注意：在轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)要從側(cè)面觀察，以防鏡頭與標(biāo)本片相撞，在轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)要從側(cè)面觀察，以防鏡頭與標(biāo)本片相撞，如果高倍鏡觸及標(biāo)本片，應(yīng)立即停止旋轉(zhuǎn)，并重新用如果高倍鏡觸及標(biāo)本片，應(yīng)立即停止旋轉(zhuǎn)，并重新用低倍鏡調(diào)焦）低倍鏡調(diào)焦）；調(diào)焦。調(diào)節(jié)光圈

10、，使光線亮度合適，再調(diào)節(jié)調(diào)焦。調(diào)節(jié)光圈，使光線亮度合適，再調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺細(xì)準(zhǔn)焦螺旋旋直至目的物清晰；直至目的物清晰；觀察。移動(dòng)推動(dòng)器，找到合適的目的物，并移至視野觀察。移動(dòng)推動(dòng)器，找到合適的目的物，并移至視野的中心進(jìn)行觀察。的中心進(jìn)行觀察。（如果用高倍鏡未能看清目的物，則可換用油鏡觀察）（如果用高倍鏡未能看清目的物，則可換用油鏡觀察）油鏡的操作油鏡的操作1.1.轉(zhuǎn)換油鏡。調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，轉(zhuǎn)換油鏡。調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，下降載物臺約下降載物臺約2 cm，轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)換油鏡鏡頭；換油鏡鏡頭；2.2.加香柏油。加香柏油。在標(biāo)本片的鏡檢部位滴一滴香柏油；從側(cè)在標(biāo)本片的鏡檢部位滴一滴香柏油；從側(cè)面注視，用面注視，用粗

11、準(zhǔn)焦螺旋粗準(zhǔn)焦螺旋緩慢上升載物臺，使油鏡頭浸沒緩慢上升載物臺，使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片；在油中，剛好貼近載玻片；3. 3. 調(diào)焦。上升聚光器，將虹彩光圈開大，使光線充分照調(diào)焦。上升聚光器，將虹彩光圈開大，使光線充分照明；緩慢調(diào)節(jié)明；緩慢調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，直至物像清晰。，直至物像清晰。4. 4. 觀察。觀察。 多觀察幾個(gè)視野，選取菌體分布均勻的視野多觀察幾個(gè)視野，選取菌體分布均勻的視野進(jìn)行菌體形態(tài)和排列方式觀察。進(jìn)行菌體形態(tài)和排列方式觀察。2 2、顯微鏡用畢后的處理、顯微鏡用畢后的處理將光強(qiáng)調(diào)節(jié)至最弱將光強(qiáng)調(diào)節(jié)至最弱 關(guān)閉電源開關(guān)關(guān)閉電源開關(guān) 拔掉拔掉電源插頭電源插頭 下降載物

12、臺下降載物臺 取干凈擦鏡紙取干凈擦鏡紙拭去鏡頭上的香柏油拭去鏡頭上的香柏油 取干凈擦鏡紙蘸少許二取干凈擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上的殘留油跡甲苯擦去鏡頭上的殘留油跡 取干凈擦鏡紙擦取干凈擦鏡紙擦去殘留的二甲苯去殘留的二甲苯 將顯微鏡的各部位還原將顯微鏡的各部位還原，物，物鏡轉(zhuǎn)成鏡轉(zhuǎn)成“八八”字形，擦干凈鏡體，罩上防塵罩。字形，擦干凈鏡體，罩上防塵罩。 繪出你在油鏡下觀察到的兩種細(xì)菌繪出你在油鏡下觀察到的兩種細(xì)菌的形態(tài)及其不同細(xì)菌細(xì)胞的排列方式。的形態(tài)及其不同細(xì)菌細(xì)胞的排列方式。四聯(lián)球菌（10100） 桿菌120（10100）用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意哪些問題？在載用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油？起什么作玻片