VP-A-010-00紅霉素中二氯甲烷殘留檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案(0112)

1、編號(hào)：VP-A-012-00版本號(hào)：00紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗(yàn)方法驗(yàn)證報(bào)告 紅霉素中二氯甲烷和三氯甲烷殘留檢驗(yàn)方法驗(yàn)證報(bào)告 Validati on Report of Methyle ne Chloride and Chloroform Residue Test Method in Erythromycin 驗(yàn)證方案編號(hào)：VP-A-012-00 版本號(hào)：00 目 錄 1. 概述2 1.1產(chǎn)品概述2. 1.1.1產(chǎn)品名稱2 1.1.2產(chǎn)品化學(xué)結(jié)構(gòu)式 2 1.2方法建立概述 2. 2. 檢測(cè)方法3 2.1溶劑殘留接受標(biāo)準(zhǔn) 3. 2.2方法描述3. 2.2.1 儀器3 2.2.2 試劑3

2、 2.2.3溶液配制3 2.2.4色譜條件 3 2.2.5系統(tǒng)適應(yīng)性4 2.2.6計(jì)算4 3驗(yàn)證內(nèi)容5 3.1試劑及儀器5. A. 檢測(cè)用試劑5 B. 樣品5 C. 儀器和設(shè)備5 3.2驗(yàn)證溶液配制 5. 3.3 操作6. 3.4驗(yàn)證項(xiàng)目6. 3.4.1 精密度 6 3.4.2 .線性8 3.4.3回收率8 3.4.4定量限、檢測(cè)限 9 3.4.5.耐用性 10 4.驗(yàn)證結(jié)果評(píng)定與結(jié)論 11 15 1.概述 1.1產(chǎn)品概述 1.1.1產(chǎn)品名稱 中文名：紅霉素 英文名：ERYTHROMYCIN 1.1.2產(chǎn)品化學(xué)結(jié)構(gòu)式 分子式：C37H67NO13 結(jié)構(gòu)式： Erythromycin Mol.

3、Formula R1 R2 A CazHgyNOia 734 OH ch3 B C3?He7NOi2 718 H CH3 C C3 呂 H三氯甲烷（AR 2.2.3溶液配制 樣品溶液：取樣品約0.50g，精密稱定，用DMS溶解，并稀釋至50ml; 溶劑溶液：取二氯甲烷約3.0g，三氯甲烷約0.3g，精密稱定，用DMSOS解，并稀釋至 100ml，精密量取1.0ml，用水稀釋至100ml,精密量取1.0ml，用水稀釋至10ml。 空白溶液：按照溶劑溶液的配制方法配制空白溶液，但是沒有二氯甲烷和三氯甲烷。 供試液：精密量取5.0ml樣品溶液+1.0ml空白溶液于20ml頂空瓶中；（三樣） 對(duì)照液A

4、:精密量取5.0ml樣品溶液+1.0ml溶劑溶液于20ml頂空瓶中；（三樣） 對(duì)照液B:精密量取5.0ml DMSO +1.0ml空白溶液于20ml頂空瓶中. 2.2.4色譜條件 色譜柱：DB624 30mX 0.32mnrK 1.8um 載氣：氮?dú)猓?流速：35cm/s ; 頂空溫度：樣品瓶溫105C ；定量環(huán)溫110C ;傳輸線溫110C； 進(jìn)樣條件：加熱平衡45min，樣品瓶加壓0.5min，定量環(huán)充樣0.03min，定量環(huán)平衡 0.2min，進(jìn)樣 1.0min ； 爐溫：40E保持15min,以20C/min的速度升溫至240E，保持2min； 檢測(cè)器：ECD溫度250E，進(jìn)樣口溫度1

5、40C。 操作 進(jìn)樣對(duì)照液B； 進(jìn)樣對(duì)照液A； 進(jìn)樣供試液。 2.2.5系統(tǒng)適應(yīng)性 對(duì)照液A三針的RSD不大于10% 2.2.6計(jì)算 CH2CL2 A Mr 100 (Ar At)Mt PPm CHCL3 At Mr 100 - ppm (AR AT) M - 其中：A為供試液平均峰面積； A為對(duì)照液平均峰面積； M為對(duì)照液二氯甲烷或三氯甲烷的稱樣量; M為樣品的稱樣量。 3驗(yàn)證內(nèi)容 3.1試劑及儀器 A 檢測(cè)用試劑 試劑名稱 批號(hào) 廠家 等級(jí) DMSO 408168 美國天地公司 HPLC 二氯甲烷 20040325 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 AR 三氯甲烷 0603092 廣東汕頭市西隴化

6、工廠 AR B 樣品 樣品名稱 紅霉素 / 批號(hào) ERY2-200707001 / C 儀器和設(shè)備 儀器名稱 型號(hào) 數(shù)量 校正有效期至 氣相色譜儀 6890N 1 2009年5月17日 自動(dòng)頂空進(jìn)樣器 7694E 1 2009年5月17日 3.2驗(yàn)證溶液配制 樣品溶液配制：取樣品約2.5g，精密稱定，用DMS溶解并稀釋至250ml。 對(duì)照儲(chǔ)備液：取二氯甲烷約 3.0g，三氯甲烷約0.3g，精密稱定，用DMS（溶解并稀釋 至100ml，精密量取1.0ml， 用水稀釋至100ml。 各濃度對(duì)照液：分別取對(duì)照儲(chǔ)備液 1.0ml，2.0ml，4.0ml，5.0ml和7.5ml于5個(gè)50ml 容量瓶中，

7、用水稀釋至刻度。配制成 20% 40% 80% 100唏口 150%勺對(duì)照液。 空白溶液：按照對(duì)照液的配制方法配制空白溶液，但是沒有二氯甲烷和三氯甲烷。 0%溶液：精密量取5.0ml樣品溶液+1.0ml空白溶液于20ml頂空瓶中（平行三樣）； 20%-150%羊品溶液：精密量取5.0ml樣品溶液+1.0ml對(duì)應(yīng)濃度對(duì)照液于20ml頂空瓶中 （平行三樣）； 100%對(duì)照溶液：精密量取 5.0ml DMSO +1.0ml對(duì)應(yīng)濃度對(duì)照液（100%）于20ml頂空瓶 中（平行六樣）。 3.3操作 按照0%、20%、40%、80%、100%、150%樣品溶液、100%對(duì)照的順序進(jìn)樣，記錄各 樣的峰面積，

8、結(jié)果見表1。（以下記錄峰面積均為扣除空白后面積） 表1 溶液 0% 20% 40% 80% 100% 150% 100%對(duì)照 二氯甲烷 55.4 373.6 719.4 1221.2 1516.1 2159.5 1615.0 1536.6 51.5 383.6 713.1 1233.9 1480.5 2099.6 1535.5 1546.5 56.0 390.6 736.0 1178.4 1450.0 2011.6 1516.2 1545.8 平均值 54.3 382.6 722.8 1211.2 1482.2 2090.2 1549.3 RSD 4.5% 2.2% 1.6% 2.4% 2.2

9、% 3.6% 2.2% 三氯甲烷 372.0 1329.4 2634.4 4841.5 6295.3 9615.5 6536.6 6326.9 332.5 1357.7 2603.4 4905.5 6144.9 9277.7 6271.7 6359.5 363.8 1415.5 2707.4 4724.5 6039.5 8909.2 6184.3 6296.2 平均值 256.1 1367.6 2648.4 4823.8 6159.9 9267.5 6329.2 RSD 5.8% 3.2% 2.0% 1.9% 2.1% 3.8% 1.9% 操作人/日期： 3.4驗(yàn)證項(xiàng)目 3.4.1.精密度 1

10、 系統(tǒng)精密度 計(jì)算40%、80%、150%樣品溶液各自三針的RSD，查看系統(tǒng)精密度（具體數(shù)據(jù)參見表 1）,結(jié)果見表2。 表2 溶液濃度 40% 80% 150% 二氯甲烷RSD 1.6% 2.4% 3.6% 三氯甲烷RSD 2.0% 1.9% 3.8% 2方法精密度 計(jì)算100%對(duì)照液6針的RSD,查看方法精密度，結(jié)果見表 3 表3 測(cè)定次數(shù) 1 2 3 4 5 6 RSD 二氯甲烷面積 1615.0 1536.6 1535.5 1546.5 1 1516.2 1545.8 2.2% 三氯甲烷面積 6536.6 6326.9 6271.7 6359.5 6184.3 6296.2 1.9% 結(jié)

11、論： 該方法精密度良好，RSD均小于3.0%，能滿足分析要求。 操作者/日期： 3中間精密度 按照3.3.2配制溶液40% （三份）、80% （三份）、和150% （三份），100%寸照溶液（六 份），在另一天由另一 QC員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。計(jì)算中間精密度，結(jié)果見表 4、表5。 表4 溶液濃度 40% RSD 80% RSD 150% RSD 二氯甲烷 482.5 4.5% 998.6 1.5% 1621.7 2.0% 477.4 1028.9 1583.3 444.1 1011.6 1647.2 三氯甲烷 1951.5 3.6% 4298.5 1.9% 7371.9 2.2% 1981.9 4464

12、.9 7197.7 1850.1 4366.4 7523.3 結(jié)論： 中間精密度良好，RSD均小于5.0%，表明方法重現(xiàn)性較好 操作者/日期： 表5 測(cè)定次數(shù) 1 2 3 4 5 6 RSD 二氯甲烷面積 1290.0 1264.4 1216.0 1211.7 1226.2 1201.9 2.8% 三氯甲烷面積 6046.9 5560.4 5353.2 5309.2 5384.3 5366.8 5.1% 結(jié)論：結(jié)果表明儀器精密度良好， 操作者/日期： RSD 小于 10.0%。 342.線性 把20%、40%、80%、100%, 150%樣品溶液的峰面積平均值分別減去溶液 0%的平均 值，以溶

13、液中二氯甲烷和三氯甲烷的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行二元線性回 歸，計(jì)算方法的線性和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表 6。 表6 溶液濃度 0% 20% 40% 80% 100% 150% 二氯甲烷 峰面積 54.3 382.6 722.8 1211.2 1482.2 2090.2 調(diào)整面積 / 328.3 668.5 1156.8 1427.9 2035.9 三氯甲烷 峰面積 256.1 1367.6 2648.4 4823.8 6159.9 9267.5 調(diào)整面積 / 1059.5 2351.3 4368.4 5683.4 8553.1 二氯甲烷線性公式：y=43.215x + 112.26r2

14、=0.9976 三氯甲烷線性公式：y=1957.5x 52.095r2=0.9996 2 要求：r 0.98 結(jié)論： 線性關(guān)系良好，線性范圍分別為：二氯甲烷119891ppm,三氯甲烷1287ppm。 操作者/日期： 3.4.3回收率 把樣品溶液20%、40%、80%、100% 150%的峰面積平均值分別減去溶液 0%的平均值, 再除以對(duì)照100%的平均值，分別乘以5、2.5、1.25、1.0、0.667。以考察各個(gè)濃度下方法 的回收率。回收率應(yīng)在80%-120%之間，結(jié)果見表7。 溶液濃度 0% 20% 二氯 甲烷 峰面積 54.3 382.6 調(diào)整峰面積 / 328.3 回收率 / 106

15、% 三氯 甲烷 峰面積 256.1 1367.6 調(diào)整峰面積 / 1059.5 回收率 / 84% 結(jié)論： 二氯甲烷及三氯甲烷回收率均在 80%1 收率為97%，說明用該方法進(jìn)行測(cè)定，準(zhǔn)確度- 但仍能滿足分析要求。 操作者/日期： 40% 80% 100% 150% 722.8 1211.2 1482.2 2090.2 668.5 1156.8 1427.9 2035.9 108% 93% 92% 88% 2648.4 4823.8 6159.9 9267.5 2351.3 4368.4 5683.4 8553.1 93% 86% 90% 90% 20%之間，符合回收率要求。二氯甲烷平均回 高；三氯甲烷平均回收率為89%，略偏低， 344定量限、檢測(cè)限 把對(duì)照100卿DMS不斷稀釋，計(jì)算待測(cè)信號(hào)的信噪比，以確定 待測(cè)溶劑的檢測(cè)限和 定量限，以及他們?cè)跇悠分械暮肯薅?，結(jié)果見表 流速的改變對(duì)結(jié)果影響較大， RSD大于5.0%。 操作者/日期： 4.驗(yàn)證結(jié)果評(píng)定與結(jié)論 質(zhì)量研 究組長(zhǎng) 簽名：