液相色譜法測(cè)定汽水中的苯甲酸

1、林薇薇 衛(wèi)生化學(xué)實(shí)驗(yàn) 中山大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,高效液相色譜法測(cè)定汽水中的苯甲酸,食品添加劑苯甲酸,食品添加劑是指為改善食品色、香、味以及為防腐和加工工藝的需要而加入到食品中的化學(xué)合成物質(zhì)或天然物質(zhì) 苯甲酸是我國(guó)目前最常用的食品防腐劑，主要作用是防止由微生物活動(dòng)而引起的食品變質(zhì) 化學(xué)方程式C6H5COOH 溶解性：微溶于水，乙醇，乙醚 酸性：弱酸 俗名：安息香酸,食品添加劑苯甲酸,中國(guó)（食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB27601996） 碳酸飲料，最大使用量為 0.2g/kg； 低鹽醬菜、醬類、蜜餞，0.5g/kg； 葡萄酒、果酒、軟糖，0.8g/kg； 苯甲酸和苯甲酸鈉同時(shí)使用時(shí)，以苯甲酸計(jì)不得超過

2、最大使用量,HPLC分析模式選擇,餾分收集器,流動(dòng)相,HPLC高壓輸液系統(tǒng)不包括： A. 貯液器 B. 高壓輸液泵 C. 六通閥 D. 梯度洗脫裝置,六個(gè)部分 1. 高壓輸液系統(tǒng); 2. 進(jìn)樣系統(tǒng) 3. 分離系統(tǒng); 4. 檢測(cè)系統(tǒng); 5. 數(shù)據(jù)記錄與處理系統(tǒng); 6. 輔助裝置,C8屬于正相化學(xué)鍵合固定相，C18屬于反相化學(xué)鍵合固定相,HPLC通過改變流動(dòng)相的組成和極性，可調(diào)整出峰時(shí)間并改善分離度,紫外-可見檢測(cè)器利用物質(zhì)吸收受紫外-可見光輻射的性質(zhì)來進(jìn)行檢測(cè),實(shí)驗(yàn)?zāi)康?熟悉HPLC操作條件的選擇，以達(dá)到化合物的良好分離效果 掌握HPLC測(cè)定汽水中苯甲酸的方法,實(shí)驗(yàn)原理,樣品超聲去CO2和乙醇，

3、調(diào)pH至中性，過濾后進(jìn)HPLC進(jìn)行分析。使用C18柱作為分析柱，甲醇及乙酸銨溶液作為流動(dòng)相，分離汽水中的苯甲酸。利用紫外檢測(cè)器在230nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢驗(yàn)，以色譜峰的保留時(shí)間定性，峰面積定量,儀器及試劑,高效液相色譜儀(Waters2695)+紫外檢測(cè)器(Waters2998) 千分之一電子天枰（型號(hào)） 高速離心機(jī)（型號(hào)） 甲醇（優(yōu)級(jí)純） （1+1）氨水 0.02mol/L乙酸銨溶液 1mg/ml苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 0.1mg/ml苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液,Waters 2695,運(yùn)行樣品,數(shù)據(jù)處理,實(shí)驗(yàn)步驟,1. 樣品處理 稱量： 打開天平側(cè)門，放入小燒杯，讀書穩(wěn)定后，TARE/POWER鍵歸零 用吸管

4、吸取汽水約10g于小燒杯中，讀書穩(wěn)定后，記錄讀數(shù) 攪拌除去二氧化碳 使用氨水（約12滴，1.5滴為佳）調(diào)pH至約7，使用pH試紙判定 加超純水定容至25ml 8000轉(zhuǎn)/min離心5min 取上清液轉(zhuǎn)移至HPLC進(jìn)樣瓶,TARE POWER,實(shí)驗(yàn)步驟,2. 流動(dòng)相配置 甲醇、0.02mol/L乙酸銨溶液；流動(dòng)相使用前用0.5m濾膜過濾后，超聲脫氣 3. HPLC條件設(shè)置 C18色譜柱 甲醇：0.02mol/L乙酸銨溶液=10：90 流速：1ml/min 進(jìn)樣量：20 L 紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：230nm,實(shí)驗(yàn)步驟,4. 標(biāo)準(zhǔn)樣測(cè)定及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別吸取苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)使用液（0.1mg/ml）2，4，6

5、，8，10ml于10ml比色管中，用超純水定容至刻度，混勻。過濾后分別吸取20 L進(jìn)樣，測(cè)定不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積。以苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 5. 樣品測(cè)定 各組將HPLC進(jìn)樣瓶放入HPLC樣品盤中，記錄各自樣品盤中對(duì)應(yīng)的號(hào)碼，在HPLC進(jìn)樣方法指令中輸入相應(yīng)的號(hào)碼，20 L進(jìn)樣，記錄目標(biāo)峰的保留時(shí)間和峰面積,結(jié)果記錄及討論,1. 數(shù)據(jù)記錄 2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 3. 樣品中苯甲酸含量（計(jì)算結(jié)果保留2位有效數(shù)字） x=CV/m x：樣品中苯甲酸含量，g/kg C：從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到的樣品濃度,mg/ml m：樣品質(zhì)量,g V：樣品稀釋液總體積,ml,結(jié)果記錄及討論,1.對(duì) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的討論（內(nèi)容形式字?jǐn)?shù)不限） 2.思考題 （1）為什么HPLC流動(dòng)相在