《離子交換色譜》PPT課件.ppt

離子交換色譜,運用與分析,主講：許先融編輯：謝曉敏資料搜集：劉佳娜李春鳳甘權(quán)賢資料整理：李揚帆劉雁08中藥分析與鑒定（1）班,基本原理：,離子交換色譜（ionexchangechromatography，IEC）以離子交換樹脂作為固定相，樹脂上具有固定離子基團及可交換的離子基團。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時，組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換。根據(jù)組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。,主要用于分離離子或可離解的化合物，包括氨基酸，多肽，核酸，核苷等各種生物大分子。,離子交換色譜的運用：,分離純化生物大分子,Po+ZDo=Pb+ZDb,重視,Po:流動相中溶質(zhì)的濃度；Pb:填料表面上被吸附的溶質(zhì)濃度;Do:流動相中洗脫劑的濃度；Db:填料表面上洗脫劑的濃度；Z:蛋白質(zhì)在吸附過程中從填料表面上被置換的洗脫劑的數(shù)目；,以離子交換色譜快速純化8一淀粉酶為例,研究探討離子交換色譜,本研究利用合成的強陰離子交換柱很好地分離了a-淀粉酶粗品,其活性回收率高達96%,比活性達388ug/mg蛋白質(zhì)純度提高30倍。此法的研究成功為大規(guī)模制備高純度a-淀粉酶提供了一個新工藝路線。,高純度的8一淀粉酶可作為酶試劑,研究生物作用的特性、酶反應(yīng)機理,測定生化反應(yīng)的平衡常數(shù)。,1.0摘要：,2.0實驗部分,2.1標準酶液配制用微量天平準確稱取5mg高純度的a-淀粉酶試劑,于小離心試管中,準確加1.0ml水,溶解后,在1300r/min的高速離心機上離心5min,小心轉(zhuǎn)移上部清液于另一離心試管中,此液相當于1062u/ml活力.,3.0結(jié)果與討論,3.1洗脫劑為獲得高的洗脫效率,本實驗選用0.02mol/LTris-2mol/LNacl(PH6.0)體系作為洗脫劑.（Tris-指三羥甲基氨基甲烷）,由圖2可知,在2.0mol/L以下,隨鹽濃度的增加,洗脫能力增大,活性回收率提高。洗脫液中離子強度對洗脫效率的影響可歸結(jié)為離子交換平衡的移動,這種色譜行為表明該固定相具有典型的陰離子交換特性,符合離子交換色譜的洗脫規(guī)律。但在2.0mol/L以上,隨鹽濃度增加洗脫能力下降。這種反常現(xiàn)象,可能是由于離子交換柱的多功能特性引起。,實驗證明,離子交換柱不僅有離子交換的作用,而且還表現(xiàn)一定的疏水作用的。并且這種疏水作用,隨溶液離子強度發(fā)生變化。當洗脫劑濃度大于2.0mol/L時,由于溶液的表面張力過大,離子交換劑的疏水作用變得明顯,對蛋白質(zhì)疏水締合作用增強,故被吸附的蛋白質(zhì)難以洗脫,因而活性回收率下降。所以選擇抓Nacl濃度為2.0mol/L.,3.3PH對活性回收率的影響,總結(jié),凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)通常都可以用離子交換色譜法進行分離。它不僅適用于無機離子混合物的分離，亦可用于有機物的分離，例如氨基酸、