產(chǎn)品無菌方法驗證SOP.doc

醫(yī)療產(chǎn)品無菌試驗方法驗證SOP目 錄1.0 目的 2.0 適用范圍 3.0 職責(zé)4.0 儀器設(shè)備和試劑5.0 操作步驟6.0 結(jié)果解釋7.0 結(jié)果記錄及報告8.0 結(jié)果報告9.0 參考文獻10.0其他 1.0目的對無菌產(chǎn)品的無菌試驗方法進行驗證，并實施產(chǎn)品無菌試驗,確認產(chǎn)品是否無菌.2.0適用范圍適用于公司的無菌產(chǎn)品.3.0職責(zé)3.1由公司提供無菌試驗所需的樣品,提供所有試驗需要的儀器設(shè)備和試劑,并負責(zé)對儀器設(shè)備進行校正.3.2由生物技術(shù)有限公司負責(zé)提供產(chǎn)品無菌試驗方案,實施產(chǎn)品的無菌試驗及其培養(yǎng)，并確認產(chǎn)品是否無菌.任何與方案有變化的都應(yīng)提早通知公司負責(zé)人.4.0儀器設(shè)備和試劑4.1儀器設(shè)備4.1.1電子天平1臺(量程1001000g, 精度0.1g)4.1.2磁力攪拌器1臺4.1.3分注器1臺4.1.4高壓蒸汽滅菌器1臺4.1.5恒溫培養(yǎng)箱1臺4.1.5低溫恒溫培養(yǎng)箱1臺4.2試劑4.2.1液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基1瓶(TGC)4.2.2胰酪胨大豆蛋白液體培養(yǎng)基1瓶(TSB)4.2.3胰酪胨大豆蛋白瓊脂培養(yǎng)基1瓶(TSA)4.2.4無菌生理鹽水1瓶4.2.5杭州微球公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基靈敏度指示劑，金黃色葡萄球菌ATCC 65384.2.6杭州微球公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基靈敏度指示劑，銅綠假單胞菌ATCC 90274.2.7杭州微球公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基靈敏度指示劑，枯草芽孢桿菌ATCC 66334.2.8杭州微球公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基靈敏度指示劑，白色念珠菌ATCC 102314.2.9杭州微球公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基靈敏度指示劑，黑曲霉ATCC 164044.2.10杭州微球公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基靈敏度指示劑，生孢梭菌ATCC 114374.2.11杭州微球公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基靈敏度指示劑，大腸埃希菌ATCC 87394.3其它4.3.1三角瓶2個（1L ）4.3.2三角燒杯50個（250ml）4.3.3量筒1個(100ml)4.3.4 試管25支(15mL)4.3.5剪刀2把4.3.6長鑷子3把4.3.7記號筆1支4.3.8稱量紙1包4.3.9打火機1個4.3.10鋁箔1盒4.3.11過氧乙酸消毒液1瓶4.3.12一次性PE手套1包4.3.13無菌潔凈服2套4.3.14酒精燈1盞4.3.15無菌平皿20個(9mm)4.3.16無菌漏斗(含無菌棉花)5.0操作步驟5.1取樣 取三個批號的產(chǎn)品各10套,其中細菌無菌試驗5套,真菌無菌試驗5套.另取10套,其中6套作為試驗方法驗證用,剩余4套備用.5.2試劑配制5.2.1培養(yǎng)基配制5.2.1.1 TGC培養(yǎng)基根據(jù)試驗需要,按每3gTGC培養(yǎng)基粉末加100ml蒸餾水的比例溶于于三角燒瓶后，然后人工倒入150ml培養(yǎng)基于三角燒杯中，用鋁箔蓋上.然后將其放進高壓蒸汽滅菌器，于121進行15分鐘滅菌.冷卻后將其保存在3035的恒溫培養(yǎng)箱中24小時以上，在確認無菌后，供試驗使用.每個三角燒杯的培養(yǎng)基量應(yīng)確保接種產(chǎn)品的體積不大于培養(yǎng)基體積的10%.5.2.1.2 TSB培養(yǎng)基根據(jù)試驗需要,按每3gTSB培養(yǎng)基粉末加100ml蒸餾水的比例溶于于三角燒瓶后，然后人工倒入150ml培養(yǎng)基于三角燒杯中，用鋁箔蓋上.其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基粉紅色層(氧化層)不超過培養(yǎng)基深度的1/2.然后將其放入高壓蒸汽滅菌器，于121進行15分鐘滅菌.冷卻后將其保存在3035的恒溫箱中24小時以上，在確認無菌后供試驗用,并確定培養(yǎng)基粉紅色層的高度不超過培養(yǎng)基深度的1/5,否則需100加熱不超過20min使粉紅色消失. 每個三角燒杯的培養(yǎng)基量應(yīng)確保接種產(chǎn)品的體積不大于培養(yǎng)基體積的10%.5.2.1.3 TSA培養(yǎng)基 根據(jù)試驗需要,按每4gTSA培養(yǎng)基粉末加100ml蒸餾水的比例溶于于三角燒瓶后，取3mLTSA培養(yǎng)基到15mL的試管內(nèi),蓋上試管蓋,共制備5支.剩余的在用鋁箔蓋上.然后將其放入高壓蒸汽滅菌器，于121進行15分鐘滅菌. 在其凝固之前將其保存在50的恒溫箱中供試驗用.在其凝固之前將5支有TSA的試管斜放,使TSA培養(yǎng)基在試管內(nèi)形成斜面,冷卻后凝固后將其保存在3035的恒溫箱中24小時以上，在確認無菌后供試驗用.5.3培養(yǎng)基靈敏度試驗5.3.1培養(yǎng)基靈敏度指示劑的稀釋 按照培養(yǎng)基靈敏度指示劑說明書稀釋使用.5.3.2接種試驗微生物 無菌操作按下表分別接種0.1mL到裝有相應(yīng)培養(yǎng)基的試管中,每種菌種接兩管.同時每種培養(yǎng)基各一管不接種菌懸液作為陰性對照.接種微生物名稱培養(yǎng)基名稱及接種管數(shù)TGC培養(yǎng)基TSB培養(yǎng)基TSASDA金黃色葡萄球菌22銅綠假單胞菌22枯草芽孢桿菌22生孢梭菌22大腸埃希菌22白色念珠菌22黑曲霉22陰性對照5.3.3培養(yǎng) TGC培養(yǎng)基3035培養(yǎng)3天, TSB培養(yǎng)基2328培養(yǎng)5天.逐日觀察記錄結(jié)果.5.4無菌試驗方法驗證同時也是培養(yǎng)基用量和高度驗證試驗,與產(chǎn)品無菌試驗同時進行.5.4.1培養(yǎng)基靈敏度指示劑的稀釋按5.3.1進行5.4.2產(chǎn)品無菌轉(zhuǎn)移和菌懸液接種按5.5的方法將產(chǎn)品無菌轉(zhuǎn)移到裝有培養(yǎng)基的三角燒杯內(nèi),按下表分別接種菌懸液0.1mL至三角燒杯內(nèi).無產(chǎn)品和有產(chǎn)品的各接種一管, 同時每種培養(yǎng)基各一管不接種菌懸液作為陰性對照.接種微生物名稱培養(yǎng)基名稱及接種管數(shù)TGC培養(yǎng)基TSB培養(yǎng)基無產(chǎn)品(對照)有產(chǎn)品無產(chǎn)品(對照)有產(chǎn)品金黃色葡萄球菌11銅綠假單胞菌11枯草芽孢桿菌11生孢梭菌11大腸埃希菌11白色念珠菌11黑曲霉115.4.3培養(yǎng) TGC培養(yǎng)基3035培養(yǎng)3天, TSB培養(yǎng)基2328培養(yǎng)5天.逐日觀察記錄結(jié)果.5.5無菌試驗方法-直接轉(zhuǎn)移法5.5.1對超凈工作臺、手等進行消毒,戴上無菌手套.5.5.2點火焰，并在裝有培養(yǎng)基的三角燒杯上用水筆記錄試驗日期,產(chǎn)品型號,批號.5.5.3對裝有培養(yǎng)基的三角燒杯杯口進行火焰消毒，并用鑷子拉松鋁箔，但不打開,對打開松口處及杯口再進行火焰消毒.并將三角燒杯放在火焰附近.5.5.4對產(chǎn)品包裝袋切口處用蘸有0.2%過氧乙酸擦拭消毒，再用經(jīng)過火焰消毒的剪刀將其剪開.5.5.5在產(chǎn)品包裝袋內(nèi)用用剪刀將產(chǎn)品剪下,用鑷子稍微打開三角燒杯上的鋁箔,用另一把鑷子將產(chǎn)品取出放到裝有培養(yǎng)基的三角燒杯中.放下鑷子,將三角燒杯杯口在火焰上消毒后蓋上鋁箔,并收緊再次過火焰消毒.5.5.6重復(fù)以上步驟,直至完成所有產(chǎn)品的無菌試驗.5.5.7同時兩種培養(yǎng)基各設(shè)一管不加產(chǎn)品的陰性對照.5.5.7培養(yǎng) TGC培養(yǎng)基3035培養(yǎng)14天, TSB培養(yǎng)基2328培養(yǎng)14天.逐日觀察記錄結(jié)果.6.0結(jié)果解釋6.1培養(yǎng)基靈敏度試驗6.1.1陰性對照無菌生長;接種菌懸液的培養(yǎng)基在規(guī)定時間內(nèi)試驗菌生長良好,則判定培養(yǎng)基靈敏度試驗符合規(guī)定.6.1.2若陰性對照長菌,則試驗無效6.1.3若接種菌懸液的任何一管培養(yǎng)基在規(guī)定時間內(nèi)試驗菌生長微弱、緩慢或不生長, 則判定培養(yǎng)基靈敏度試驗 不符合規(guī)定,應(yīng)另選培養(yǎng)基.6.2無菌試驗的產(chǎn)品陽性對照6.2.1與對照相比,含產(chǎn)品的培養(yǎng)基在規(guī)定時間內(nèi)試驗菌生長良好,則產(chǎn)品的該試驗量在該試驗條件下無抑菌作用或抑菌作用可以忽略不計.6.2.2與對照相比,若含產(chǎn)品的任何一個培養(yǎng)基在規(guī)定時間內(nèi)試驗菌生長微弱、緩慢或不生長,則產(chǎn)品的該試驗量在該試驗條件下有抑菌作用,需增加培養(yǎng)基的用量或加中和劑,消除產(chǎn)品的抑菌作用,并重新進行方法驗證.6.3產(chǎn)品無菌試驗6.3.1在規(guī)定的培養(yǎng)時間下,若含產(chǎn)品的培養(yǎng)基澄清無菌生長,則表明產(chǎn)品無菌.6.3.2在規(guī)定的培養(yǎng)時間下,若含產(chǎn)品的培養(yǎng)基渾濁并確定有菌生長,則表明產(chǎn)品有菌,除非能充分證明試驗結(jié)果無效,即生長的微生物非產(chǎn)品所含.當符合下列至少一個條件時方可判試驗結(jié)果無效:(1) 無菌試驗所用的設(shè)備或環(huán)境的微生物監(jiān)測的結(jié)果不符合無菌檢查的要求;(2) 回顧無菌試驗過程,發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染