發(fā)酵豆粕常見指標(biāo)檢測方法.docVIP

粗 蛋 白 含 量 檢 測(GB/T6432) 一、原理：凱氏法測定樣中的含氮量、即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機(jī)物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計(jì)算出粗蛋白含量。二、儀器設(shè)備：1. 高速粉碎機(jī)，粉碎時(shí)間1分鐘。2. 分樣篩； 0.45mm、40目3. 分析天平；感量0.0001g4. 消化爐5. 滴定管；酸式50mL6. 錐形瓶；250mL7. 定氮儀；以凱氏原理制造的半自動(dòng)蛋白測定儀三、試劑1. 硫酸：含量98%2. 氫氧化鈉：40%水溶液（m/V）3. 硼酸：2%水溶液（m/V）4. 混合催化劑：0.4g硫酸銅(5個(gè)結(jié)晶水)，6g硫酸鉀或硫酸鈉，磨碎混勻。5. 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個(gè)月。6. 0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：8.3 mL鹽酸注入1000 mL蒸餾水中。標(biāo)定：減量法稱取0.8g左右在270-300灼燒2h的無水NaCO3，加水50mL溶解，加10滴混合指示劑，用配好的鹽酸滴定成暗紅色，煮沸2min，冷卻(水中)后再滴至暗紅色，同時(shí)作空白試驗(yàn)(不加Na2C03)。計(jì)算：C=m1000(V1-V2)M 式中: C硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液之物質(zhì)的量濃度（mol/L） m無水碳酸鈉的質(zhì)量，g V1 鹽酸溶液的用量，mL V2空白試驗(yàn)鹽酸溶液的用量，mL M無水碳酸鈉的摩爾質(zhì)量數(shù)值，單位為克每摩爾（g/mol）M(1/2NaCO3)=52.9947. 蔗糖8. 硫酸銨：分析純，干燥四、分析步驟：（國標(biāo)推薦法）1. 試樣的消煮 2. 稱取試0.5g（含氮量580mg）準(zhǔn)確至0.0002g，放入消化管中，加入6.4g混合催化劑，與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸，于420消化爐中消化3小時(shí)。冷卻后，加入蒸餾水20ml，待用。3. 氨的蒸餾；采用半自動(dòng)定氮儀，將帶消化液的消化管插在蒸餾裝置上，以25mL硼酸為吸收液，加入2-3滴混合指示劑，蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內(nèi)，然后向消化管中加入氫氧化鈉溶液，以溶液變黑為宜，即當(dāng)生成黑色的氫氧化銅時(shí)，加堿量已夠。若加堿量不足或過量，分解液呈藍(lán)色而不顯黑色，若加堿不夠，需再增加氫氧化鈉用量，直到分解液呈黑色為止。蒸餾，蒸餾時(shí)間以吸收液體積達(dá)到150mL以上時(shí)為宜，降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)。4. 滴定：用0.1mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定吸收液，溶液由藍(lán)綠色變淡紫色為終點(diǎn)。5. 空白測定：稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按以上分析步驟進(jìn)行測定，消耗0.1mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積不得超過0.2mL，消耗0.02mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積不得超過0.3mL。五、計(jì)算：式中：V1滴定試樣時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mLV0滴定空白時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mLCHCL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/Lm試樣質(zhì)量，g0.014每毫克當(dāng)量氮的克數(shù)6.25氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)水 分 檢 測 (GB/T64352006) 一、適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料和各種單一飼料中水分的測定，但用作飼料的奶制品、動(dòng)物和植物油脂、礦物質(zhì)除外。二、原理：試樣在105烘箱內(nèi)，在大氣壓下烘干，直至恒重，逸失的重量為水分。三、試劑和儀器設(shè)備：1高速粉碎機(jī)，粉碎時(shí)間1分鐘。2分析篩 孔徑0.25mm（60目）。3分析天平 感量0.0001g4電熱恒溫箱（烘箱） 可控制溫度在10525稱樣皿 玻璃或鋁質(zhì),直徑40mm以上,高25mm以下 6干燥器 以氯化鈣或變色硅膠為干燥劑四、試樣的選取和制備：選取具有代表性的試樣，其原始樣量應(yīng)在1000g以上，用四分法縮減至500g，風(fēng)干后粉碎至全部通過40目篩，再用四分法縮減至200g，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化或變質(zhì)。如試樣為多汁的鮮樣，或無法粉碎時(shí)，應(yīng)預(yù)先干燥處理，稱取試樣200300g，在105烘箱中烘15min，立即降至65，烘干56h。取出后，在室內(nèi)空氣中冷卻4h，稱重，即得風(fēng)干試樣。分析步驟：1. 潔凈稱樣皿，在103烘箱內(nèi)烘1h，取出，在干燥器中冷卻30min，稱準(zhǔn)至0.0002g，再烘干30min，同樣冷卻，稱重，直至兩次重量之差小于0.0005g為恒重。2. 用已恒重稱樣皿稱取兩份平行試樣，每份22.5g（含水重0.1g以上，樣品厚度4mm以下）。準(zhǔn)確至0.0002g，不蓋稱樣皿蓋，在105烘箱內(nèi)烘3.5h，取出，蓋好稱樣 皿蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。五、計(jì)算水分含量（%）按下式計(jì)算：水分（%）W1W2100%W1W0式中：W1105烘干前試樣及稱樣皿重，gW2105烘干后試樣及稱樣皿重，gW0已恒重的稱樣皿重，g粗 灰 分 檢 測 (GB/T6438)一、原理：飼料樣品在550灼燒后所得殘?jiān)?，用質(zhì)量百分率表示。殘?jiān)兄饕茄趸?、鹽類等礦物質(zhì)，也包括混入飼料中的砂石、土等，故稱粗灰分。二、儀器設(shè)備：1. 高速粉碎機(jī)：粉碎時(shí)間1分鐘。2. 分樣篩：孔徑0.25mm（60目）3. 分析天平：感量0.0001g4. 高溫爐：有高溫計(jì)且可控制爐溫在550205. 坩堝：瓷質(zhì)，容積50mL6. 干燥器：用氯化鈣（干燥試劑）或變色硅膠作干燥劑三、試樣的選取和制備：選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化或變質(zhì)。四、分析步驟：將干凈坩堝放入高溫爐，在5502下灼燒30min。取出，在空氣中冷卻約1min，放入干燥器冷卻30min，稱其質(zhì)量。再重復(fù)灼燒、冷卻、稱量，直至兩次質(zhì)量之差小于0.0005g為恒質(zhì)。在恒質(zhì)的坩堝中稱取22.5g試料（灰分質(zhì)量在0.05g以上），準(zhǔn)確至0.0002g，在電爐中碳化至無煙狀態(tài)(夏季和冬季，可適當(dāng)延長時(shí)間20min)，于55020下灼燒3.5h至灰白色，冷卻到200。取出，在空氣中冷卻約1min，放入干燥器中冷卻至室溫，稱取質(zhì)量。五、計(jì)算：粗灰分含量（%）按下式計(jì)算：粗灰分（%）m2m0100m1m0式中：m2為灰化后坩堝加灰分的的質(zhì)量，gm1為坩堝加試料的質(zhì)量，gm0為恒質(zhì)空坩堝，g所得結(jié)果應(yīng)表示至0.01%酸溶蛋白（肽）含量的測定（據(jù)QB/T 2653-2004制定）一、原理大分子蛋白質(zhì)和肽鏈較長的多肽用三氯醋酸溶液進(jìn)行沉淀，并將其中的短鏈小肽用酸溶解出來，其中包括小肽和部分-氨基酸。然后經(jīng)離心、過濾、消化、蒸餾，測定其蛋白質(zhì)含量即酸溶蛋白。二、試劑及儀器 100ml燒杯、10ml和25ml移液管、半微量粗蛋白質(zhì)測定試劑和裝置、40目標(biāo)準(zhǔn)篩、15三氯醋酸溶液（TCA溶液）、4500 轉(zhuǎn)/ 分鐘的離心機(jī)、定性濾紙等。三、試驗(yàn)方法（1）準(zhǔn)確稱取樣品4.0000g樣品，加入15%TCA溶液20ml，混合均勻，靜置5分鐘。用定性濾紙過濾，取濾液約5ml，4500轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上清液4ml注入干燥的消化管中，加入硫酸銅0.2g，硫酸鈉3g，再加濃硫酸10ml，消化方法及蒸餾方法與蛋白的測定方法相同。（2）計(jì)算公式：肽絕對(duì)含量（）樣品中肽含量（%）標(biāo)準(zhǔn)鹽酸摩爾/當(dāng)量濃度V1樣品消耗鹽酸體積V0試劑空白消耗鹽酸體積m樣品重量（精確到0.0001）N為微量法測定粗蛋白時(shí)的稀釋倍數(shù)，若全量法測定則為1肽相對(duì)含量（%） X0樣品中的粗蛋白含量不 良 寡 糖 定 性 檢 測（薄層層析法）一、原理薄層層析是以涂布于玻板或滌綸片等載體上的基質(zhì)為固定相，以液體為流動(dòng)相的一種層析方法。一般層析操作包括薄板活化、點(diǎn)樣、展層、顯色和結(jié)果分析等步驟。二、試劑配制（注意：須在通風(fēng)櫥中進(jìn)行）1、展層劑正丁醇：異丙醇：乙酸：蒸餾水=14：10：4（8）：8 (如有拖尾現(xiàn)象，可適當(dāng)加大乙酸的量)展層劑混勻后倒入展層缸。2、顯色劑苯胺1ml，二苯胺1g，濃磷酸5ml，丙酮50ml先將二苯胺溶于丙酮中，最后加濃磷酸。因?yàn)槎桨凡蝗苡谒?。顯色劑避光保存，有毒，小心操作。三、操作步驟1、樣品處理：稱取5g試樣溶于40mL蒸餾水，于70水浴1h。2、離心（8000rpm，20min）取上清，放入4冰箱保存。3、硅膠板的活化：將硅膠板置于烘箱中，110活化1h備用。4、點(diǎn)樣，用水蘇糖、棉籽糖和蔗糖做標(biāo)準(zhǔn)（5mg/mL）。配制方法：稱取5mg的水蘇糖或棉籽糖、蔗糖，加入1mL蒸餾水。在硅膠板底部留兩厘米，用鉛筆劃一直線，隔開間距畫上點(diǎn)樣孔，用毛細(xì)管點(diǎn)樣，干了再點(diǎn)第二次，干透后展層。（注意：點(diǎn)樣時(shí)若發(fā)現(xiàn)上清已變渾濁，則必須重新離心。）6、展層：將點(diǎn)好樣的薄層板放入預(yù)先飽和的展層裝置內(nèi)，讓點(diǎn)樣一端浸入展層劑中，其深度約0.5cm（切記：樣品點(diǎn)不能浸入展層劑中）。當(dāng)展層劑上升到離硅膠板的頂端0.5-1.0cm時(shí)，停止展層，迅速吹干。7、顯色：將顯色劑噴霧，95烘箱顯色6min。8、拍照：關(guān)閉閃光燈，微距拍攝。揮 發(fā) 性 鹽 基 氮 檢 測(GB/T 5009.452003)一、原理： 由于酶和細(xì)菌的作用，樣品腐敗過程中，使蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類等堿性物質(zhì)。此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，在堿性溶液蒸出后，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定計(jì)算含量。二、試劑和儀器設(shè)備：1鹽酸溶液（0.01mol/L）：取測蛋白用的0.1mol/L鹽酸溶液100.0mL于1000mL溶量瓶中，加水定容至刻度。2氧化鎂混懸液（10g/L）：稱取1.0克氧化鎂，加100mL水，振搖成混懸液。3指示劑：甲基紅乙醇指示劑（2g/L），次甲基藍(lán)指示劑(1g/L)。4硼酸吸收液（20g/L），可用蛋白測定用的硼酸吸收液5半微量定氮儀三、分析步驟：稱取10克試樣（準(zhǔn)確至0.0001g）于碘量瓶中，加100.0mL水，放入振蕩器中振蕩30分鐘，再倒入離心機(jī)中離心5-10分鐘。取上清液倒入錐形瓶中。上清液置冰箱中備用。蒸餾滴定：將盛有20mL吸收液及5-6滴混合指示液的錐形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，準(zhǔn)確吸取10.0mL上述離心清液于蒸餾器反應(yīng)室內(nèi)，加10mL氧化鎂混懸液，迅速蓋塞，并加水以防漏氣，通入蒸氣，進(jìn)行蒸餾5分鐘即停止，吸收液用鹽酸標(biāo)液滴定，至終點(diǎn)藍(lán)紫色，同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。 四、計(jì)算：X（mg/100g ）（VV0）14C10100m式中：X試樣中揮發(fā)性鹽基氮的含量，單位為毫克每百克(mg/100g)V測定用樣液消耗鹽酸溶液體積，單位為毫升（mL）：V0試劑空白消耗鹽酸溶液體積，單位為毫升（mL）：C鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際濃度，單位為摩爾每升（mol/L）：14與1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液C(HCl)=1.000mol/L相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，單位為毫克（mg）m試樣質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。蛋 白 溶 解 度 檢 測(GB/T195412004) 一、方法原理氫氧化鉀蛋白溶解度可以反映大豆粕加熱過度的情況，不同加熱程度的大豆粕，氫氧化鉀蛋白溶解度不同。先測定大豆粕樣品在規(guī)定的條件下，可溶于氫氧化鉀溶液中的粗蛋白質(zhì)含量；再測定同一大豆粕樣品中總的粕蛋白質(zhì)含量，計(jì)算出氫氧化鉀蛋白質(zhì)溶解度。二、試劑10.2%氫氧化鉀溶液，相當(dāng)于0.04N，pH=12.5(2.44gKOH配成1L)2 凱氏定氮所需的標(biāo)準(zhǔn)試劑三、儀器1. 高速粉碎機(jī)，粉碎時(shí)間1分鐘。 2. 樣品篩：孔徑0.25mm3. 磁力攪拌器4. 離心機(jī):轉(zhuǎn)速為2700r/min以上四、試樣的選取和制備取具有代表性的大豆粕樣品，用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過0.25 mm孔徑的樣品篩，充分混勻，裝于密封容器中備用。五、操作步驟稱取大豆粕試樣1.0克，