




已閱讀5頁,還剩24頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀
版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
病毒增殖技術(shù) 1 動物增殖病毒技術(shù)禽胚增殖病毒技術(shù)細胞增殖病毒技術(shù) 2 一 動物增殖病毒技術(shù) 選擇動物的標準 大動物應(yīng)來源于非疫區(qū) 最好是未接種過相應(yīng)病毒疫苗 青壯年和健康 經(jīng)臨床檢查 檢疫 對相應(yīng)病毒易感 并十分敏感 經(jīng)隔離飼養(yǎng)和觀察檢查證明健康 家兔 小鼠 大鼠等應(yīng)符合普通級或清潔級實驗動物標準 雞應(yīng)屬非免疫雞或SPF級標準 犬和貓應(yīng)品種明確 并符合普通級實驗動物標準 體重 年齡要基本一致 個體差別不宜過大 3 二 禽胚增殖病毒技術(shù) 一 禽胚的選擇SPF雞胚據(jù)國家標準 無22種特定病原體非免疫雞胚應(yīng)無特定病原的母源抗體 普通雞胚可能帶有雞的多種病原體 不適用于疫苗生產(chǎn)異源性性疫苗 鴨胚和鴿胚 4 二 禽胚接種途徑與收獲 絨毛尿囊膜接種法尿囊腔接種法卵黃囊接種法羊膜腔接種法靜脈接種法腦內(nèi)接種法 5 雞胚絨毛尿囊膜接種法 6 尿囊腔接種法 7 尿囊液收獲方法 8 雞胚卵黃囊接種法 9 1 種蛋質(zhì)量 病原微生物 垂直傳遞 如白血病 腦脊髓炎 腺病毒 支原體及傳染性貧血因子等 母源抗體 抗生素 立克次氏體和鸚鵡熱衣原體2 孵化技術(shù) 溫度 37 39 5 傳染性支氣管炎病毒37 濕度 雞胚53 57 水禽胚比雞胚高5 10 通風(fēng) 氧氣 二氧化碳 翻蛋 三 影響禽胚增殖病毒的因素 10 3 接種技術(shù)不同病毒的增殖有不同的接種途徑 同一種病毒接種不同日齡禽胚獲得的病毒量也不同 接種日齡 雞胚13 14日齡 鴨胚15 16日齡 尿囊液含量最高 平均約6 8ml 羊水約1 2ml 接種部位 不應(yīng)傷及胚體和血管 以免影響其發(fā)育嚴格防止禽胚污染 雞胚接種時嚴格無菌操作 定期清掃消毒孵化室 保持室內(nèi)空氣新鮮 種蛋入孵前先用溫水清洗 消毒 涼干 11 三 細胞增殖病毒技術(shù) 1 細胞培養(yǎng)的概念細胞培養(yǎng) cellculture 是指利用機械 酶或化學(xué)方法使動物組織或傳代細胞分散成單個乃至2 4個細胞團懸液進行培養(yǎng) 細胞分類 根據(jù)細胞染色體和繁殖特性原代細胞 primarycell 細胞株 cellstrain 傳代細胞 continuedcellline 細胞系 cellline 12 1 原代細胞 primarycell 指由新鮮組織經(jīng)剪碎和胰酶消化制備的細胞 如CEF細胞 2 細胞株 cellstrain 又稱二倍體細胞指自繼代培養(yǎng)的細胞中選育出具有特殊生物學(xué)性質(zhì)和標記的細胞 這類細胞且能保持原來的二倍染色體數(shù)目 能連續(xù)傳很多代 50 100代 但為有限生命 沒有腫瘤原 如PKl5 BHK21和Vero 3 傳代細胞 continuedcellline 細胞系 cellline 能在體外無限傳代 應(yīng)用方便 其染色體數(shù)目及增殖特性均類似于惡性腫瘤細胞 且多來源于癌細胞 如HeLa細胞系 13 靜置培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)懸浮培養(yǎng) suspensioncellculture 微載體培養(yǎng) microcarriercellculture 中空纖維細胞培養(yǎng) hollowfibrecellculture 微囊化細胞培養(yǎng) 2 細胞培養(yǎng)方法 14 懸浮培養(yǎng)通過振蕩或轉(zhuǎn)動裝置使細胞始終處于分散懸浮于培養(yǎng)液內(nèi)的培養(yǎng)方法 主要用于一些在振蕩或攪拌下能生長繁殖的細胞 如生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞 微載體培養(yǎng)微載體直徑應(yīng)為60 105nm 無毒性 透明 顆粒密度與培養(yǎng)液密度相近似 略重于液體 低速攪拌即能懸浮 不吸收培養(yǎng)液和化學(xué)反應(yīng) 表面光滑 硬度小 有彈性 易于細胞吸附在表面 如DEAE SephadexA 50 Cytodexl Cytodex2 Cytodex3等 微載體培養(yǎng)的容器為特制的生物反應(yīng)器 有自動化裝置 細胞產(chǎn)量達106 107個 m1 每升培養(yǎng)液可加微載體2 5g 每克有8000 9000個珠子 培養(yǎng)面積約為2 5萬cm2 比常規(guī)培養(yǎng)面積大10 25倍 15 中空纖維細胞培養(yǎng) hollowfibrecellculture 組成 中空纖維生物反應(yīng)器 培養(yǎng)基容器 供氧器和蠕動泵中空纖維由乙酸纖維 聚氯乙烯 丙烯復(fù)合物或多聚碳酸硅等材料制成 外徑50 100 m 壁厚25 75 m 壁呈海綿狀 上面有很多微孔 中空纖維的內(nèi)腔表面是一層半透性的超濾膜 允許營養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物出入 而對細胞和大分子物質(zhì) 如單克隆抗體 有滯留作用 培養(yǎng)液能有效地分布 細胞培養(yǎng)維持時間可達數(shù)月 保持高度活性 培養(yǎng)的細胞密度大 細胞分泌的蛋白質(zhì)濃度高 純度可達60 90 占用空間小 適于各類細胞 但設(shè)備昂貴 16 培養(yǎng)液血清細胞接種量pH溫度無菌條件培養(yǎng)器皿清潔度 3 細胞培養(yǎng)要素 RPMI 1640 199 DMEM F12 17 血清成分 必需氨基酸 促進細胞生長和貼壁的成分 珠蛋白和白蛋白能促進細胞生長 白蛋白具有毒作用 糖蛋白 a2 球蛋白和 脂蛋白G2能促進細胞貼壁 血清選擇 同種動物優(yōu)于異種動物血清 人和牛血清優(yōu)于馬血清 馬血清優(yōu)于兔血清和雞血清 血清使用 目前國內(nèi)多用犢牛血清 使用前須經(jīng)56 滅活30min 并進行細胞毒性試驗 生長液血清含量一般為5 20 維持液中血清量為0 5 血清替代因子 激素和生長因子 如胰島素 上皮生長因子 結(jié)合蛋白 如轉(zhuǎn)鐵蛋白 貼壁因子 如魚精蛋白 聚賴氨酸 和微量元素 如硒 四類幾十種 多數(shù)無血清培養(yǎng)液須補加3 8種血清替代因子 18 細胞接種量細胞在生長過程中分泌刺激細胞分裂的物質(zhì) 若細胞量太少 這些物質(zhì)分泌量少 而作用也小 接種細胞數(shù)量越大 細胞生長為單層的速度越快 但細胞過多對細胞生長也不利 雞胚成纖維細胞為100萬 m1小鼠或地鼠腎細胞為50萬 m1猴腎細胞量為30萬 ml傳代細胞為10 30萬 m1 19 1 細菌污染 2 真菌污染 念珠菌或酵母菌 培養(yǎng)液中可見黃白色小點狀懸浮物鏡檢時可見菌絲結(jié)構(gòu) 3 支原體污染 污染率為50 60 4 病毒污染 組織帶毒 培養(yǎng)液帶毒 4 細胞培養(yǎng)污染問題 20 1 血清 維持液內(nèi)犢牛血清含量一般不超過2 2 溫度 狂犬病病毒32 犬皰疹病毒36 3 pH 4 病毒接種劑量 應(yīng)以TCID50為依據(jù)一般按維持液的1 10 V V 量接入 接種量小 細胞不能完全發(fā)生感染 會影響毒價 接種量過大 會產(chǎn)生大量無感染性缺陷病毒 5 病毒接種方法 異步接毒和同步接毒 5 細胞培養(yǎng)病毒要素 21 6 病毒增殖指標與收獲細胞病變 CPE 細胞圓縮 如痘病毒和呼腸孤病毒等 細胞聚合 如腺病毒 細胞融合形成合胞體 如副粘病毒和皰疹病毒 輕微病變 如正粘病毒 冠狀病毒等 包涵體和血凝性 也可作為檢查病毒增殖的指標 有些病毒不產(chǎn)生CPE 病毒收獲 CPE達80 時收獲 反復(fù)凍融多次使病毒釋放 然后離
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 租賃車輛管理辦法暫緩
- 小區(qū)公攤物業(yè)管理辦法
- 管理人員職務(wù)管理辦法
- 省級人民醫(yī)院管理辦法
- 房屋簽約制度管理辦法
- 眼部瑜伽培訓(xùn)課件文案
- 腸胃細胞健康課件
- 腸癰的護理課件
- 人事管理培訓(xùn)課件
- 店長培訓(xùn)內(nèi)容流程課件
- 電信贊助協(xié)議書
- 南通國家級南通經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)公開招聘招商人員筆試歷年參考題庫附帶答案詳解
- 留疆戰(zhàn)士考試試題及答案
- 2025+CSCO前列腺癌診療指南進展
- 商場出租幼兒推車合同協(xié)議
- 2024-2025學(xué)年三年級英語下冊期末試卷(PEP版)(含答案含聽力原文無音頻)
- 煉油化工消防安全課件
- 柑桔嫁接合同協(xié)議
- 候診廳衛(wèi)生管理制度
- 超市導(dǎo)購人員管理制度
- 阻塞性肺部疾病護理查房
評論
0/150
提交評論