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二、植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量的測定 硝態(tài)氮是植物最主要的氮源。植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量往往能反映土壤中硝態(tài)氮供應(yīng)情況,因此可作為土壤肥氮肥的指標(biāo)。測定植物體內(nèi)的硝態(tài)氮含量,不僅能夠反映出植物的氮素營養(yǎng)情況,而且對鑒定蔬菜和植物為原料的加工制品的品質(zhì)也有重要的意義。(一)原理在濃酸條件下,NO3-與水楊酸反應(yīng),生成硝基水楊酸,硝基水楊酸在堿性條件下(PH12)呈黃色,在一定范圍內(nèi),其顏色深淺與含量成正比,可直接比色測定。(二)儀器與用具(1)722型分子光光度計(jì)1臺;(2)電子頂載天平1臺(感量1/萬);(3)刻度試管20cm326支;(4)刻度吸管0.1cm3. 0.5cm3. 5cm3. 10cm3各1支;(5)容量瓶50cm38個(gè);(6)容量瓶25cm33個(gè);(7)小漏斗(5cm)3個(gè);(8)玻棒1根;(9)洗耳球1個(gè);(10)電爐1個(gè);(11)鋁鍋1個(gè);(12)玻璃塞;(13)定量濾紙7cm。試劑:500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液精確稱取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于無離水中,定容至200cm3。5%水楊酸一硫酸溶液 稱取5克水楊酸溶于100cm3,濃硫酸中(密度為1. 84),攪拌溶解后,貯于棕色瓶中。置冰箱保存一周有效。8%氫氧化納溶液 稱取10克氫氧化納溶于1dm3無離子水中即可。(三)實(shí)驗(yàn)步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作(1)吸取500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液1cm3. 2cm3. 3cm3. 4cm3. 6cm3. 8cm3. 10cm3. 12cm3分別放入501cm3容量瓶中,用無離子定至刻度,使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。(2)吸收上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0.11cm3,分別放入刻度試管中,以0.11cm3無離子水代替標(biāo)準(zhǔn)溶液作空白,再分別加入0.4cm3水楊酸一硫酸溶液,搖勻,在室溫下放置20分鐘后再加入8%NaOH溶液9. 51cm3搖勻冷卻至室溫,顯色液總體積為101cm3。(3)以空白作參比,在410nm波長下測定吸光度。以NO3-N濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2. 樣品中硝酸鹽的測定(1)樣品液的制備,取一定量的植物材料剪碎混勻后,精確稱取2-3克分別放入三支刻度試管中,加入10cm3無離子水,用玻璃塞封口,置入沸水浴中提取30分鐘,到時(shí)間后取出,用自來水冷卻,將是取液過濾到25cm3容量瓶中,并反復(fù)沖洗殘?jiān)?,最的定容至刻度。?)樣口液的測定 吸取樣品0.1 cm3分別于三支刻度試管中,然后加入5%水楊酸一硫酸溶液0.4 cm3,混勻后置室溫下20分鐘,再慢慢加入9. 5 cm3 8%NaOH溶液,待冷卻至室溫后,以空白作參比,在410nm波長下測期吸光度。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得或用回歸方程計(jì)算出NO3-N濃度,再用下公式計(jì)算其含量。 旱作物組織中硝態(tài)氮的測定硝酸試粉比色法1. 目的作物根系從土壤吸收的硝態(tài)氮,一部分很快參加蛋白質(zhì)的合成但仍有相當(dāng)數(shù)量的硝態(tài)氮是在向地上部分轉(zhuǎn)運(yùn)途中逐步轉(zhuǎn)化的。特別是某些旱作物葉柄硝態(tài)氮的水平,在一定范圍內(nèi)反映了當(dāng)時(shí)體內(nèi)的氮素營養(yǎng)水平和土壤供氮狀況。定期檢測作物適當(dāng)部位的硝態(tài)氮含量的水平,可以為作物的施肥和促控措施等提供一些依據(jù)。本方法是基二鋅在酸性條件下產(chǎn)生氫氣,將硝酸根還原成亞硝酸根,亞硝酸根對氨基苯磺酸和a-萘胺作用,形成紅色偶氮染料,在一定范圍內(nèi)可按顏色(玫瑰紅)深淺估測NO3-N含量。靈敏度范圍為0.5-20ppm,其反應(yīng)一定要在PH5左右條件下進(jìn)行,在堿性條件下不顯色或顯色不明顯。2. 材料和試劑(1)硝酸試粉稱硫酸鋇50g,分成數(shù)份,分別與硫酸錳(Mnso4?H2o)5g,鋅粉1g,對氨基苯磺酸2g,a-萘1g,在研缽中研細(xì)混勻,最后與37. 5g檸檬酸一起研磨均勻,貯于暗色瓶中,防潮避光。此試粉灰白色,若變?yōu)榉奂t色,則不能使用。(2)PH5檸檬酸緩沖液 稱取化學(xué)純檸檬4. 31g,檸檬酸鈉6. 86g,溶于500ml蒸餾水中(溶液必須新鮮酸置)。(3)硝態(tài)氨標(biāo)準(zhǔn)溶液 稱取7. 22g分析純硝酸鉀加水定容到1000ml,即為1000ppmNo2-N。3. 方法與步驟(1)取樣 清晨在待測田塊中,選取有代表性的植株10-20株的敏感部位,用濕布擦凈,剪碎,榨汁備用。(2)測定 于15ml刻度試管中,加入5mlPH5. 0的檸檬酸緩沖液,滴入一滴組織汁液,搖勻加入0.2g硝酸試粉,塞緊,縱向搖動(dòng)試
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