薄層色譜技術(shù).doc

包括制板、點(diǎn)樣、展開、顯色、檢測等。（一）制板方法：涂布法、傾注法、浸潤法、噴涂法。這里介紹傾注法：1、清板：載板是表面平滑的玻璃板，矩形，規(guī)格根據(jù)需要定，常見有：515；520；820；1020；2020等。同玻璃儀器洗滌方法洗凈、晾干或烘干、用乙醇擦凈。2、調(diào)漿：稱一定量吸附劑于研缽中（0、3mm薄層100平方厘米需硅膠G1克三氧化二鋁1、2克），加2倍量水（先加部分，迅速研磨，再倒入全部水），研磨至漿液剛粘稠時進(jìn)行涂布。注意：掌握加水量；研磨動作適中，防止產(chǎn)生氣泡；掌握漿液的涂布“火候”。3、涂布：將漿液沿玻棒倒于板的一端，并將這端提起，用玻棒帶動吸附劑涂遍整板迅速震拍使厚薄均勻，平放、晾干（10-15分鐘）。這一步是關(guān)鍵，要求涂布好的薄層，厚薄均勻、表面平滑、沒有氣泡波紋、牢固不易脫落。4、活化：風(fēng)干后的薄層板直接放于烘箱中烘干或放在干燥鋁架上烘干。烘干溫度與時間視需要定，一般硅膠板在105下烘1小時，三氧化二鋁板在200-220下烘4小時?；罨蟮谋影鍍Υ嬖诟稍锲鲀?nèi)一周后應(yīng)另行活化。（二）點(diǎn)樣這是關(guān)鍵的操作，只有原點(diǎn)足夠小，形狀規(guī)則，才有可能得到較高的分離度和靈敏度。要求：點(diǎn)樣精確、迅速（不超過10分鐘）；斑點(diǎn)集中（溶劑擴(kuò)散直徑不超過3mm）；各點(diǎn)大小一致，在同一起始線上。工具：微量注射器或定體積毛細(xì)管。操作：刀片刮去薄層板邊緣的吸附劑；作出起始線和溶劑前沿記號（起始線距底端2-3厘米，前沿視展距而定）；用注射器點(diǎn)樣，點(diǎn)與點(diǎn)間距1、0-1、5厘米，點(diǎn)與邊緣距離0、5厘米。注意：板不得點(diǎn)破；點(diǎn)樣體積少于2微升；點(diǎn)樣量幾至幾十微克；邊點(diǎn)邊用洗耳球吹風(fēng)以去溶劑；點(diǎn)樣時間長時要在干燥盒內(nèi)點(diǎn)樣。（三）展開方法：上行法、下行法、園形離心法、園形向心法、程序多級展開法等，最多的是上行法。裝置：展開 （立式、臥式）（內(nèi)襯濾紙，以使溶劑揮發(fā)）。方法：1、內(nèi)加適量展開劑，加蓋密閉10分鐘，使內(nèi)溶劑蒸汽飽和。2、將薄層板點(diǎn)有樣品液的一端浸入展開劑中（5-7mm）。蓋好蓋子（注意展開劑不得浸沒樣點(diǎn)、浸沒部分要與起始線平齊）。3、展開到達(dá)溶劑前沿時取出薄層板揮干溶劑。注意：展開劑用過1-2次后要更換，因底劑與洗脫劑的比例已改變；展開過程中槽內(nèi)要保證溶劑蒸氣飽和，以防邊緣效應(yīng)。（四）顯色1、顯色劑顯色法：噴霧顯色，借助噴霧器噴細(xì)霧至板面濕潤。2、紫外線照射法：如AFTB1在WL365nm觀察；有機(jī)氯在254nm下顯色。3、對本身是有色的斑點(diǎn)則不需顯色。（五）定性定量1、定性：斑點(diǎn)顯色后量出高度，求得Rf值，通過查閱文獻(xiàn)鑒別各種物質(zhì)。但Rf可受到外界因素的影響而使不易重現(xiàn)，這些外界因素有：吸附劑的種類及粗細(xì)度、粘合劑的性質(zhì)及含量、薄層厚度、展開系統(tǒng)組成、展開槽內(nèi)蒸汽的飽和程度、展距、薄層板活性及點(diǎn)樣量大小等。所以通常的定性方法是將樣液和標(biāo)液點(diǎn)到同薄層上作對照。為了增加鑒定可靠性，可進(jìn)行確證或更換展開系統(tǒng)。2、定量：傳統(tǒng)的方法是目視半定量法，此法簡便易行，無需貴重儀器，易于推廣。（1）最低檢出量法，用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液點(diǎn)板、展開、顯觀察、反復(fù)核定在該實(shí)驗(yàn)條件下標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的最低檢出量是多少。最低檢出量（ug）=最低檢出量時的體積（ul）*標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（ug/ul）將不同量的樣液與最低檢出量時的標(biāo)液點(diǎn)板，薄層色譜分離，經(jīng)顯色后觀察。如果各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)相同位置上樣液的斑點(diǎn)大小、顏色深淺相同，就可以認(rèn)為滴加的樣液中含有最低檢出量待測物；如果比最低檢出量點(diǎn)顏色深，則需稀釋，直到相同。（2）目視直接比較法：在同一薄層板上點(diǎn)不同體積的樣液和各種濃度的標(biāo)液，展開、顯色后，用肉眼觀察比較與標(biāo)準(zhǔn)的面積大小和顏色深淺，臺兩者近似，即可以認(rèn)為此樣品液體積中含待測物量與標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)中所含物質(zhì)的量相同。近十年，原位直接定量有了新的