食用菌污染原因分析.doc

菌種生產(chǎn)雜菌污染的原因分析1滅菌不徹底 這一原因特點是導(dǎo)致的污染率高、發(fā)生早，出現(xiàn)污染的部位不規(guī)則培養(yǎng)基上中下均可出現(xiàn)雜菌菌落。這類污染常在接種培養(yǎng)35天后發(fā)生。一般雜菌的菌絲體與孢子經(jīng)過高壓1211270C保持1525h均能殺死。消毒不徹底引起的污染往往是由于沒達到規(guī)定的溫度與時間，或者是高壓滅菌時冷空氣沒放盡所致。另外，裝鍋時擺放太緊密，通氣性不好，滅菌鍋發(fā)生漏氣，溫度、壓力達不到所需數(shù)值也可導(dǎo)致雜菌產(chǎn)生。2培養(yǎng)料問題拌料時主料與輔料未充分拌勻；水分含量不足或培養(yǎng)料成團未散開，吃水不透造成滅菌死角；或者培養(yǎng)料不新鮮，本身帶雜。3母種帶雜菌種本身不純。無論是母種、原種還是栽培種，都要使用純種接種培養(yǎng)。如果用于繁殖擴大的菌種本身不純，那么制備的新菌種也必然受到污染。污染常常表現(xiàn)在接種菌塊之中或周圍，呈小批量的規(guī)模，如果此時不能及時發(fā)現(xiàn)，危害將進一步加大。有時生產(chǎn)的一批菌種中。集中在一起的菌種都出現(xiàn)污染，且都發(fā)生在接種塊周圍則說明菌種帶雜。因此，在生產(chǎn)母種時，要經(jīng)常檢查，對污染物及時清理，防止擴大時進一步污染。4接種污染這類污染的特點是雜菌菌落先從菌種塊上長出雜茵的種類一致，通常成批量發(fā)生，且出現(xiàn)早，接種3-5天內(nèi)就可肉眼鑒別。接種室或操作臺消毒不徹底接種時操作不嚴格，將雜菌孢子帶入瓶中，這種污染常分散出現(xiàn)于菌種表面。如一支被污染的母種會造成擴接后的46瓶原種全部污染：一瓶被污染的原種(有時肉眼難以發(fā)現(xiàn))造成擴大后的3050瓶栽培種的污染。這類污染要靠嚴格檢查菌種質(zhì)量來克服，不但使用前要認真檢查而且在培養(yǎng)全過程中要連續(xù)檢查和觀察確保菌種純度。5接種操作污染這類污染一般發(fā)生在接種口處較接種物帶菌和滅菌不徹底造成的污染發(fā)生晚一般接種后7d左右出現(xiàn)。其污染源主要是：接種室(箱)空氣消毒不徹底；菌種瓶(袋)冷卻時附在表面的雜菌；接種人員自身潔凈度不良：違反接種操作規(guī)程等。操作不規(guī)范造成的菌種污染，雜菌不僅在接種塊周圍，還常出現(xiàn)在其他料面的表面，呈花花點點狀，不一定集中一處，且無規(guī)律。這些操作技術(shù)包括滅菌操作、滅菌后無菌處理、接種過程無菌操作、接種后的培養(yǎng)條件控制等。需注意以下技術(shù)環(huán)節(jié)：51不使棉塞打濕滅菌碼放時棉塞切勿貼觸鍋壁；滅菌結(jié)束后要自然冷卻，不可強制冷卻；當冷卻至一定程度后微開鍋門讓鍋內(nèi)的余熱把棉塞上的水氣蒸發(fā)；滅菌時，可同時滅菌一些棉塞，留接種時換下打濕的棉塞。52潔凈冷卻滅菌后的菌種瓶(袋)不能直接放在有塵土的地面上冷卻：冷卻窒使用前可用紫外線燈和噴霧相結(jié)合進行空氣消毒。53嚴格消毒接種室(箱)使用前須嚴格消毒；接種操作人員須在緩沖間穿戴專用衣帽(定期洗滌)；接種前要消毒雙手。54科學操作接種前做好一切準備工作。一次接種不間斷。一氣呵成：接種過程要少搬動、少說話、小動作，以減少空氣震動和流動；接菌室(箱)內(nèi)絕對無菌的只有酒精燈火焰周圍很小的范圍接種操作應(yīng)盡量在這個小區(qū)內(nèi)完成；拔棉塞時，不可用力直線上拔而應(yīng)旋轉(zhuǎn)式緩勁拔出，避免外界空氣突然進入而帶入雜菌；接種室(箱)每次的接種量不宜過大；接種時接種工具一旦觸碰了非無菌物品，如種瓶外壁、操作臺面等不要再用來取種須重新火焰灼燒滅菌。6設(shè)備設(shè)施簡陋引起滅茵后無菌狀態(tài)的改變本來滅菌后的菌種瓶(袋)已達無菌狀態(tài)但滅菌后的冷卻和接種環(huán)境達不到潔凈無菌生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)節(jié)分散又往往忽略場地的大環(huán)境衛(wèi)生，導(dǎo)致了污染。冷卻過程中隨著料溫的降低，瓶(袋)內(nèi)氣壓降低雜菌孢子隨其內(nèi)外氣壓的動態(tài)平衡向瓶(袋)內(nèi)移動、定植。瓶袋外附有較多的灰塵(附著雜菌孢子)。成為接種操作污染的污染源。這種類型接種后污染率較低隨著培養(yǎng)時間的延長污染率逐漸增高。通常大量發(fā)生在接種10d以后甚至培養(yǎng)基表面已長滿菌絲后，才陸續(xù)出現(xiàn)污染。7培養(yǎng)室及周圍環(huán)境差培養(yǎng)室溫度太高，培養(yǎng)室相對濕度太大，超過70以上利于雜菌滋生；培養(yǎng)室通氣不良，有利于某些厭氧菌發(fā)生；培養(yǎng)室本身不干凈，消毒不嚴，空氣中本身帶雜。接種后污染率低，隨著時間推移污染率逐漸增高，這就是由培養(yǎng)環(huán)境造成的污染。如培養(yǎng)環(huán)境過于潮濕、污染源嚴重污染培養(yǎng)室、菌瓶棉塞潮濕、苗袋破裂、蟲鼠危害等。綜合控制措施1滅菌要徹底高壓滅菌上壓前放盡冷空氣，上壓后保持規(guī)定的壓力與時間，高壓滅菌應(yīng)在鍋內(nèi)溫度上升到121后再保持1525h。高壓滅菌，鍋內(nèi)瓶放置時應(yīng)留一定的空隙，利于空氣流動。滅菌徹底高壓滅菌以1471千帕，保持2小時，常壓滅菌要求4小時內(nèi)溫度達到100后，持續(xù)不低于1618小時的滅菌時間，中間不降溫。2滅菌容量和堆放方式用蒸汽鍋爐送入蒸汽的高壓滅菌鍋要做到鍋爐汽化量與鍋體容積相匹配，自帶蒸汽發(fā)生器的燃煤、燃油或電熱的高壓滅菌鍋以每次容量200500瓶(750lllL)為宜常壓滅菌灶以每次容量不超過1000瓶(750mL)為宜。容量增大。滅菌時間要適當延長。鍋內(nèi)被滅菌物品的堆放形式對滅菌效果影響顯著特別是以塑料袋為容器時這種影響更大。因為塑料袋受熱后變軟如果裝料不緊，疊壓堆放，極易把升溫前留有的間隙充滿不利于蒸汽的流通和升溫，影響滅菌效果。塑料袋擺放時應(yīng)以疊放34層為度不可過量疊壓。鍋大時要使用擱板。有條件的最好使用鐵筐裝筐滅菌。3精制培養(yǎng)料用于制作原種的培養(yǎng)料原料要新鮮，成團、結(jié)塊的料要打碎，難吸水的培養(yǎng)料應(yīng)先用足夠的水拌濕，然后充分拌勻。培養(yǎng)料配制后要盡快裝袋，間隔時間越長，越引起易引起雜菌污染。培養(yǎng)料中拌入01-02的多菌靈可濕性粉劑?？梢种颇久购颓嗝沟纳L。用高壓滅菌，拌料后要及時裝瓶(袋)，上鍋滅菌，擱置時間不宜超過10h。4培養(yǎng)基的保管接完種的培養(yǎng)基要及時放入清潔的、溫度合理的培養(yǎng)室中。培養(yǎng)室最好緊靠接種室。這樣能盡量減少再污染的機會，使菌絲能迅速恢復(fù)生長。培養(yǎng)室的溫度要因食用菌種類不同而不同，一般情況下，茶樹菇和雞腿菇的最適宜培養(yǎng)溫度均為20-28、滑菇為18-2()、黑木耳為25-28。培養(yǎng)5-7天后，要及時檢查，挑出已經(jīng)感染的菌種，輕拿輕放到遠離菌種廠的指定位置，以防止雜菌彈射孢子，污染培養(yǎng)室環(huán)境。5選擇優(yōu)良母種嚴格挑選用于擴大生產(chǎn)的菌種，原料要求不霉爛變質(zhì)。任何疑點都不可姑息確保接種物的純度。母種應(yīng)盡量采用生活力強、菌齡適宜、抗逆性強的優(yōu)良菌株。絕對不能用病蟲害侵入的菌種。菌種純化菌種從母種到原種，再到栽培種的繁殖過程，都要嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)程；認真檢查質(zhì)量，菌種純度要求100，方可使用。6接種時嚴格操作規(guī)程提高從業(yè)人員技術(shù)素質(zhì)，規(guī)范操作：生產(chǎn)場地要定期清潔、消毒保持大環(huán)境的整潔狀態(tài)。接種操作前，用75的酒精棉球擦手接種工具也要嚴格消毒，在火焰上操作要熟練、敏捷。7無菌操作嚴格操作接種室、接種帳、接種工具、接種人員的手臂等都要嚴格消毒。接種動作要快，達到快解袋、快接種、快扎口。一批菌袋未接完，人員不要進出接種室。每個操作環(huán)節(jié)都要嚴格按無菌操作規(guī)程進行，進入接種室后要少走動、少說話。接種環(huán)境清潔，接種室(箱)要密封和嚴格消毒。接種用具保持清潔，用前消毒處理。接種室消毒應(yīng)嚴格，并加裝紫外線殺菌燈?？茖W管理發(fā)菌室干凈清潔，做好消毒殺蟲。8降低培養(yǎng)室的空氣濕度空氣濕度和雜菌的發(fā)生有密切的關(guān)系?？諝鉂穸却螅s菌感染率高；濕度低，感染率也低。當其他條件相同時，培養(yǎng)室空氣濕度80左右時，雜菌感染率為5，當空氣濕度增加到90H，感染率就上升到15。它們之間有相互關(guān)聯(lián)又相互制約的關(guān)系。第一，空氣濕度高，空氣中的各種雜菌孢子就容易萌發(fā)生長，不斷繁殖，傳播。而菌種生產(chǎn)上用的無棉蓋，在空氣濕度較高的條件下，可以迅速通過無棉蓋向瓶內(nèi)伸展造成感染。第二，環(huán)境中雜菌孢子增加后，接種時雜菌感染的機會也隨之增多。為此，生產(chǎn)上應(yīng)十分重視降低室內(nèi)空氣濕度。最適宜的空氣濕度是65。降低濕度的方法，每天通風換氣，但當天氣多雨潮濕，更要加大通風，一定做到溫度、濕度、空氣三者的相互關(guān)系。242 注意環(huán)境衛(wèi)生降低雜菌孢子密度，培養(yǎng)室及工作場所周圍必須保持清潔，保持地面平整，干燥。室內(nèi)一旦發(fā)現(xiàn)感染雜菌的瓶子應(yīng)及時清除，定期進行噴藥滅菌，以降低雜菌密度。尤其是高溫多雨的季節(jié)更需注意。噴藥次數(shù)一般是一周噴1-2次，可以噴來蘇爾，或甲醛，或石炭酸。最好是交替使用。9環(huán)境清潔干燥凈化環(huán)境嚴格按照無公害環(huán)境條件衛(wèi)生消毒處理；培養(yǎng)室、冷卻室，應(yīng)與原料倉庫、菇房、配料場保持一定距離；周圍環(huán)境應(yīng)盡量清除污染源。如畜舍禽棚、化糞池、污水坑、垃圾場、廢料堆等；并做好日常的衛(wèi)生清潔和定期消毒。工作結(jié)束后，立即將臺面收拾干凈，不留殘物。培養(yǎng)室要通風干燥，啟用前清掃、消毒。培養(yǎng)菌種期間，每天要適當通風。當空氣濕度大于70H寸，要用吸濕機、空調(diào)機或用生130石灰、木炭等降低室內(nèi)濕度。定期用殺蟲或殺菌藥劑消毒，同時也應(yīng)注意防鼠。10藥劑防治菌床培養(yǎng)料上或菌袋兩端發(fā)生少量綠霉時，用0.1%甲基托布津、0.1%0.2%代森鋅、0.1%0.2%多菌靈或濃石灰水上清液涂抹或噴灑被害部位，可防止分生孢子擴散蔓延。若菌床或菌袋出現(xiàn)綠霉已深入到料內(nèi)，應(yīng)及時用0.2%多菌靈液浸紗布蓋住，然后輕輕挖掉已污染的料塊，在挖除后的料面噴0.2%多菌靈或其他殺菌劑，也可涂抹濃石灰乳，再用新鮮料或菌種填平，可控制其發(fā)展。對于污染嚴重的菌袋可深埋處理。11定期檢查嚴格按照菌種生產(chǎn)的工藝技術(shù)流程進行選料、配料、分裝、滅菌、冷卻、接種、培養(yǎng)和質(zhì)量檢測。接種后5-7d檢查1次。污染雜菌的，要及時揀出處理，應(yīng)ib,L,放在盤內(nèi)，蓋嚴拿出室外深埋或燒掉，并且分析原因，加以控制；搬動培養(yǎng)瓶(袋)要小心輕放；預(yù)防老鼠、蟑螂等為害帶入雜菌。及時處理一旦發(fā)現(xiàn)雜菌污染，及時搬離培養(yǎng)室，受污染的菌種，無論污染面大小，一律淘汰，不得保留?？傊秤镁N污染是食用菌生產(chǎn)中的一項嚴重災(zāi)害，它將直接影響食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量，造成嚴重的經(jīng)濟損失。因此，在原種生產(chǎn)過程中首先選好母種，其次保證原料無霉變，再次是嚴把操作關(guān)保證嚴格滅菌，最后環(huán)境要清潔無污染源。只有如此。才能生產(chǎn)出優(yōu)良的食用菌原種。食用菌生產(chǎn)中的注意事項一、菌種制作食用菌的菌種一般分為母種、原種和栽培種三級。在各級菌種的制作中，防止雜菌污染都是絕對不能忽視的，因為如果雜菌污染了菌種，就一定會帶來生產(chǎn)栽培中的大面積污染。因此在制作菌種時，一定要嚴格按照無菌操作程序進行。基本步驟是：（1）先將接種室清理干凈，再將接種中要用到的所有物品放入其中，按每立方米用甲醛10毫升和高錳酸鉀7克的用量，將二者混合熏蒸滅菌。（2）接種人要身穿清潔衣服，最好戴上滅菌的套袖，并將手用消毒酒精棉球擦干凈。（3）接種時要注意無菌操作。（4）接種后的材料要放在清潔的地方或保溫箱中培養(yǎng)。當然，制作菌種的材料必須事先徹底滅菌。如果注意了這些環(huán)節(jié)，一般可以防止菌種污染。最容易產(chǎn)生污染的菌種是栽培種，究其原因主要是操作者思想上不重視，往往認為是最后一級菌種了，用不著太嚴格，因此操作時比較馬虎，或者用生料制作菌種。生料制作菌種，有時看起來是可行的，但存在著潛在污染危險，因為生料中有大量雜菌，即便是用了化學藥品殺菌，也不大可能將雜菌全部殺滅。殘存的雜菌伴隨著菌種一起生長，雖然暫時顯現(xiàn)不出來，但當播種之后，雜菌就可能大量發(fā)生，從而造成栽培料上雜菌滋生甚至蔓延。因此，為防患于未然，最好不要用生料制作菌種，而且要嚴格按無菌操作進行。一旦發(fā)現(xiàn)菌種污染了雜菌，就不要再進行擴種或栽培，要立即將其銷毀，以免混在好的菌種中被誤用。如果除其之外再也沒有菌種了，那就要將其純化之后再用。菌種污染雜菌的情況，除了操作不嚴格外，有時發(fā)生在接種箱的制作上。有人在制作接種箱時只注意了密封，而沒有注意通氣。當接種量大時，酒精燈火焰將箱內(nèi)氧氣消耗盡而熄滅，不能保證無菌操作順利進行，萬一箱內(nèi)滅菌不徹底，或操作過程中帶進雜菌，或甚至有人為了讓空氣進入箱內(nèi)而打開箱門，都有可能造成菌種污染。因此，在制作接種箱時，既要考慮密封，也要考慮留下必要的、能防止雜菌進入的通氣孔。通氣孔一般設(shè)在離操作者較遠的箱側(cè)下部，直徑510厘米，口上固定4層紗布，口外設(shè)推拉門，箱內(nèi)滅菌時將門關(guān)上，操作時將推拉門打開，即能使箱內(nèi)進入空氣，又依靠紗布過濾空氣中的雜菌。如果箱體較大，可在不同位置增加通氣孔。二、播種栽培食用菌生產(chǎn)中的播種與一般農(nóng)作物的播種不同，也必須象菌種制作那樣遵循無菌操作的原則，其第一步就是要將栽培料滅菌。滅菌方法大致有以下幾種類型。（1）化學滅菌法這是一種將能殺滅雜菌的化學藥品拌入栽培料的方法。常用的化學藥品有滅菌靈、高錳酸鉀、甲隆等，常用量在1%左右，這要根據(jù)培養(yǎng)料的性質(zhì)和藥品的純度確定，用量太低起不到殺菌作用，用量太高則殘毒太重，將可能影響食用菌的生長。用化學藥品殺菌時須注意藥品的有效期，過期藥品藥效降低或消失，應(yīng)廢棄不用。（2）生物滅菌法這主要指用發(fā)酵法殺滅培養(yǎng)料中的雜菌。具體操作是：將培養(yǎng)料各成分拌勻，含水量50%至60%，堆成圓堆形，為操作方便，每堆50千克左右，間隔打孔，外覆薄膜。堆溫達60后翻堆。如此重復(fù)兩次后，即可鋪開播種。這主要是利用培養(yǎng)料中天然存在的微生物生長，發(fā)酵產(chǎn)熱，造成高溫，殺死其中的大部分不耐熱的微生物和害蟲及其卵，或者抑制某些有害菌，以創(chuàng)造有利于食用菌生長的環(huán)境條件。以上兩種滅菌方法都是生料栽培時所用，可以殺死部分雜菌而不大可能滅菌徹底，因此殘存的雜菌可能伴隨食用菌一起生長，在近期表現(xiàn)不出來，而當食用菌長勢弱時可能顯示出來。因此用生料栽培時一定要創(chuàng)造適合食用菌生長的條件，用食用菌的生長優(yōu)勢抑制雜菌生長。要取得徹底殺滅培養(yǎng)料中雜菌的效果，最好采用熟料栽培，用足夠的溫度滅菌，即高溫滅菌。高溫滅菌又分為常壓滅菌法和高壓滅菌法。（3）常壓滅菌法即在常壓下保持100殺滅雜菌，具體方法可有很多，基本形式是用油桶改造或用磚砌成大的鍋體，內(nèi)設(shè)支架或筐架裝料，用保溫材料做鍋蓋，鍋體下置鐵鍋盛水，加熱后使鍋內(nèi)溫度上升至100，持續(xù)8小時，并?；鸷髳炓灰埂Ｈ绻侒w建造牢固，密封性好，加熱排除冷空氣后，可使鍋內(nèi)壓力有所上升，以至使鍋內(nèi)溫度高于100，從而可使加熱時間縮短。（4）高壓滅菌法是用特制的、能耐高壓的鍋體進行的，鍋內(nèi)水蒸汽的溫度隨壓力升高而上升，溫度可達125。高壓滅菌鍋一般有兩種：一種是手提式高壓蒸汽滅菌鍋，可滅菌少量培養(yǎng)料，可用電加熱，也可用爐火加熱；一種是臥式高壓鍋，容量較大，用電加熱。滅菌少量培養(yǎng)