GB-T8381.2-2005飼料中志賀氏菌的檢測方法.pdf

I C S 6 5 . 1 2 0B 4 6遏日中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)GB / T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 5飼 料 中 志 賀 氏 菌 的 檢 測 方 法D e t e r mi n a t i o n o f S h i g e l l a i n f e e d2 0 0 5 - 0 9 - 0 5 發(fā)布2 0 0 6 - 0 2 - 0 1實(shí)施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局中 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn) 化 管 理 委 員 會發(fā) 布免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 5月 U舌本標(biāo)準(zhǔn)參照采用 G B / T 4 7 8 9 . 5 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)志賀氏菌檢驗(yàn) 的有關(guān)內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A、 附錄 B為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位: 國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心( 北京)本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人: 饒正華、 李麗蓓、 楊曙明、 蘇曉鷗。免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B/ T 8 3 8 1 . 2 - 2 0 0 5飼 料 中志 賀 氏 菌 的 檢 測 方 法范 圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中志賀氏菌的檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料中志賀氏菌的檢測。2規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件， 其隨后所有的修改單( 不包括勘誤的內(nèi)容) 或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)， 然而， 鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 G B / T 1 4 6 9 9 . 1 飼料采樣3 設(shè)備和材料3 . 1 天平: 感量 1g ， 最大稱量 1 0 0 0 g ,3 . 2 均質(zhì)器或乳缽。3 . 3 恒溫培養(yǎng)箱。3 . 4 顯微鏡。3 . 5 滅菌廣口瓶: 5 0 0 mL3 . 6 滅菌三角燒瓶: 5 0 0 mL , 2 5 0 mI 。3 . 7 滅菌平皿: 皿底直徑 9 0 mme3 . 8 載玻片。3 . 9 酒精燈。3 . 1 0 滅菌金屬匙或玻璃棒。3 . 1 1 接種棒， 鎳鉻絲。3 . 1 2 試管架3 . 1 3 硝酸纖維素濾膜: 1 5 0 m m X5 0 mm, 0 0 . 4 5 li m。臨用時(shí)切成兩張， 每張7 0 mm X 5 0 mm， 用鉛筆劃格， 每格 6 mmX6 mm。每行 1 0 格， 分6行。滅菌備用。4 培養(yǎng)基和試荊 除非另有說明， 在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和蒸餾水( 或去離子水， 或相當(dāng)純度的水) 。4 . 1 G N增菌液: 見附錄 B的 B . 1 章。4 . 2 HE瓊脂: 見附錄 B的B . 2 章。4 . 3 S S 瓊脂: 見附錄B的B . 3 章。4 . 4 麥康凱瓊脂: 見附錄B的B . 4章。4 . 5 伊紅美藍(lán)瓊脂( E MB ) : 見附錄 B的 B . 5 章。4 . 6 三糖鐵瓊脂( T S D: 見附錄 B的 B . 6 章4 . 7 葡萄糖半固體管: 見附錄B的B . 7 章。4 . 8 半固體管: 見附錄B的 B . 8 章。4 . 9 葡萄糖按瓊脂: 見附錄B的B . 9 章。4 . 1 0 尿素瓊脂( p H 7 . 2 ) : 見附錄 B的 B . 1 0章。免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 54 . 1 1 西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂: 見附錄B的B . 1 1 章4 . 1 2 氰化鉀( K C N) 培養(yǎng)基: 見附錄B的B . 1 2 章。4 . 1 3 氨基酸脫狡酶試驗(yàn)培養(yǎng)基: 賴氨酸、 鳥氨酸及對照培養(yǎng)基， 見附錄 B的 B . 1 3 章。4 . 1 4 糖發(fā)酵管: 棉子糖、 甘露醇、 甘油、 七葉昔及水楊昔， 見附錄B的 B . 1 4 章4 . 1 5 5 %乳糖發(fā)酵管: 見附錄B的B . 1 5 章。4 . 1 6 蛋白陳水、 靛基質(zhì)試劑: 見附錄B的B . 1 6 章。4 . 1 7 志賀氏菌屬診斷血清5 試樣的制備 進(jìn)行微生物檢驗(yàn)的飼料的采樣和試樣制備按 G 川T 1 4 6 9 9 . 1 規(guī)定執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)室樣品真實(shí)、 具有代表性 在運(yùn)輸和貯存過程中沒有發(fā)生損失或改變。5 . 1 采樣應(yīng)在無菌操作下進(jìn)行。5 . 2 采樣工具， 如探子、 鏟子、 匙、 采樣器、 試管、 廣口瓶、 剪子等， 必須是滅菌的。5 . 3 根據(jù)樣品種類如袋、 瓶和罐裝者， 就取完整的未開封的。如果樣品很大， 則需用無菌采樣器取樣;樣品是固體粉末， 應(yīng)邊取邊混和; 是流體的， 通過振搖混勻; 樣品送到微生物檢驗(yàn)室越快越好， 一般應(yīng)不超過3h 。如果路途遙遠(yuǎn)， 可將試樣于 。 0C - 5 保存( 如冰壺) 。6操作步驟 ( 見 附錄 A)6 . 1 增菌 稱取飼料試料 2 5 g ， 加人裝有2 2 5 mL G N培養(yǎng)菌液( B . 1 ) 的 5 0 0 m L廣口瓶( 3 . 5 ) 內(nèi)， 于 3 6 0C培養(yǎng)6 h - v 8h 。培養(yǎng)時(shí)間視細(xì)菌生長情況而定， 當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)輕微混濁時(shí)即應(yīng)終止培養(yǎng)。6 . 2 分離和初步生化試驗(yàn)6 . 2 . 1 取增菌液 I 環(huán)， 劃線接種于 H E瓊脂( B . 2 ) 平板或 S S瓊脂( B . 3 ) 平板 1 個(gè); 另取 1 環(huán)劃線接種于麥康凱瓊脂( B . 4 ) 平板或伊紅美藍(lán)瓊脂( B . 5 ) 平板 1 個(gè)， 于 3 6 培養(yǎng) 1 8 h - - 2 4 h ， 志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上呈現(xiàn)無色透明不發(fā)酵乳糖的菌落。6 . 2 . 2 挑取平板上的可疑菌落， 接種三糖鐵瓊脂( B . 6 ) 和葡萄糖半固體( B . 7 ) 各 1 管。一般應(yīng)多挑幾個(gè)菌落， 以防遺漏， 經(jīng)3 6 培養(yǎng) 1 8 h -2 4 h ， 分別觀察結(jié)果6 . 2 . 3 出現(xiàn)下述現(xiàn)象的培養(yǎng)物可以視為陰性: a ) 在三糖鐵瓊脂斜面上呈蔓延生長的培養(yǎng)物; b ) 在1 8 h - 2 4 h 內(nèi)發(fā)酵乳糖、 蔗糖的培養(yǎng)物; 。 ) 不分解葡萄糖和只生長在半固體表面的培養(yǎng)物; d ) 產(chǎn)氣的培養(yǎng)物; e ) 有動力的培養(yǎng)物; f ) 產(chǎn)生硫化氫的培養(yǎng)物6 . 2 . 4 凡是乳糖、 蔗糖不發(fā)酵， 葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣( 福氏志賀氏菌 6型可產(chǎn)生少量氣體) ， 無動力的菌株， 可做血清學(xué)分型和進(jìn)一步的生化試驗(yàn)6 . 3 血清學(xué)分型和進(jìn)一步的生化試驗(yàn)6 . 3 . 1 血清學(xué)分型 挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物， 做玻片凝集試驗(yàn)。先用 4 種志賀氏菌多價(jià)血清( 4 . 1 7 ) 檢查， 如果由于K抗原的存在而不出現(xiàn)凝集， 應(yīng)將菌液煮沸后再檢查; 如果呈現(xiàn)凝集， 則用 A l , A2 , B群多價(jià)和 D群血清分別試驗(yàn)如系 H群福氏志賀氏菌， 則用群和型因子血清分別檢查。福氏志賀氏菌各型和亞型的型和群抗原見表 1 ?？上扔萌阂蜃友鍣z查， 再根據(jù)群因子血清出現(xiàn)凝集的結(jié)果， 依次選用型因子血清檢查免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 5 4 種志賀氏菌多價(jià)血清不凝集的菌株， 可用鮑氏多價(jià)1 , 2 , 3分別檢查， 并進(jìn)一步用 1 -1 5 各型因子血清檢查。如果鮑氏多價(jià)血清不凝集， 可用痢疾志賀氏菌 3 -1 2型多價(jià)血清及各型因子血清檢查。 表 1 福氏志賀氏菌各型和亞型的型抗原和群抗原型 和亞 型型 抗 原群 抗 原 在群因子血清中的凝集3 , 4 6 7 , 81 aI1 , 2 , 4 , 5 , 9 +一一I bI1 , 2 , 4 , 5 , 9+一2 au1 , 3 ， 4 ，+一一2 bII1 , 7 ， 8 ， 9 一一+3 am1 , 6 , 7 , 8 , 9一千+3 6皿1 , 3 ， 4 ， 份 +一4 aIV1 , ( 3 , 4 ) 一 + 一一4 6N1 , 3 , 4 , 斤+一5 aV1 , 3 , 十一+一一5 6V1 , 5 , 7 , 9 一一+6班1 , 2 , ( 4 ) 一 十一一X變 體1 , 7 , 8 , 9 . . .一一十Y變 體1 , 3 ， 小.+一一注: +凝集; 一不凝集; 有或無.6 . 3 . 2 進(jìn)一步的生化試驗(yàn) 在做血清學(xué)分型的同時(shí)， 應(yīng)做進(jìn)一步的生化試驗(yàn)， 即: 葡萄糖按( B . 9 ) ， 西蒙氏檸檬酸鹽( B . 1 1 ) , 賴氨酸和鳥氨酸脫梭酶( B . 1 3 ) , p H7 . 2尿素( B . 1 0 ) , K C N生長( B , 1 2 ) ， 以及水楊昔和七葉普的分解( B _ 1 4 ) 。除宋內(nèi)氏菌和鮑氏 1 3型為鳥氨酸陽性外， 志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。必要時(shí)還應(yīng)做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn)， 應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應(yīng)不符合的菌株， 即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集， 仍不得判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物。 已判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物. 應(yīng)進(jìn)一步做 5 %乳糖發(fā)酵( B . 1 5 ) ， 甘露醇、 棉子糖和甘油的發(fā)酵( B . 1 4 ) 和靛基質(zhì)試驗(yàn)( B . 1 6 ) 。志賀氏菌屬 4 個(gè)生化群的培養(yǎng)物， 應(yīng)符合該群的生化特性。但福氏6型的生化特性與 A群或 C群相似， 見表2 。 表 2志賀氏菌周四個(gè)群的生化特性生 化 群5 %乳糖甘 露 醇棉子糖甘 油靛基質(zhì)A群 痢疾志賀氏菌B群 福氏志賀氏菌C群 鮑氏志賀氏菌D群: 宋內(nèi)氏志賀氏菌+ / + + + + d一 / + +一 / +注: +陽性; 一陰性; 一/ +多數(shù)陽性; + 遲緩陽性淚有不同生化型.6 . 4 結(jié)果報(bào)告 綜合生化和血清學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果判定菌型并作出報(bào)告。免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B/ T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 5 附錄A( 規(guī)范性附錄)檢 驗(yàn) 程 序 圖試 料2 5 g + G N 2 2 5 m L3 6 C1 1 C. 6 h 8 hH E 瓊脂或 S S麥康凱或E M B3 6 士1 C . 1 8 h - 2 4 h挑 取 可 貶 菌 落T S I .葡萄精半固體T S I 底層產(chǎn)酸，斜面產(chǎn)喊，H , S 一 )，不產(chǎn)氣， 無動 力非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果血 清 學(xué) 分 型進(jìn) 一 步 的 生化 試 驗(yàn)生化分群試驗(yàn)葡萄 箱鐵 試 駿 、 西理 氏 檸裸吸鹽、栩氮酸、 尿 素， K C N ,水楊普和 七 葉 普志 賀 氏菌 屬 分群 及 分 型 結(jié) 果箱 萄 搪 按+ 或 任 何 其 他 陽 性 結(jié) 果非 志 賀 氏篇非 志 份 氏 菌報(bào)告圖 A檢驗(yàn)程序 圖免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 8 3 8 1 .2 -2 0 0 5 附錄B ( 規(guī)范性附錄 )培養(yǎng)基和試荊制備B . 1 GN增菌液B . 11 成分 胰蛋白 陳2 0 g 葡萄糖1g 甘露醇2 g 檸檬酸鈉5 g 去氧膽酸鈉。 . 5 g 磷酸氫二鉀4g 磷酸二氫鉀1 . 5 g 氯化鈉5g 蒸餾水1 0 0 0 m L p H7 . 0B . 1 . 2制法 按上述成分配好， 加熱使溶解， 校正p H 。分 裝每 瓶2 2 5 m L , 1 1 5 高 壓滅菌1 5 m i nB . 2 HE瓊脂( H e k t o e n E n t e r i c A g a r )B . 2 . 1 成 分 際脈1 2 g 牛肉膏3 g 乳糖1 2g 蔗 糖1 2 g 水楊素2 g 膽鹽2 0 g 氯化鈉5 g 瓊脂1 8 -2 0 g 蒸餾水1 0 0 0 mL 0 . 4 %嗅察香草酚藍(lán)溶液1 6 ml , A n d r a d e 指示劑: 將酸性復(fù)紅 。 . 5 g溶于 1 0 0 m l蒸餾水中， 加人 氫氧化鈉溶液 c ( Na O H) =1 mo l / L 1 6 mL ， 數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色 不全: 再加氫氧化 鈉溶液1 m L -2 m L 2 0 m L 甲液: 硫代硫酸鈉3 4 g ， 檸檬酸鐵錢 4g 溶于 1 0 0 ML蒸餾水中2 0 m l - 乙液: 去氧膽酸鈉 1 0 g 溶于 1 0 0 mL蒸餾水中2 0 m L p H7 . 0B . 2 . 2制法 將前面七種成分溶解于4 0 0 m 工蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液; 將瓊脂加人于6 0 0 m I蒸餾水內(nèi)， 加熱溶解。加人甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi)， 校正 p H。再加人指示劑， 并與瓊脂液合并， 待冷至5 0 0C- - 5 5 0 C， 傾注平板。 注: 此培養(yǎng)基不可高壓滅菌。 5免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 5B . 3 S S瓊脂B . 3 . 1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 牛肉膏5 9 際陳59 三號膽鹽3 . 59 瓊脂1 7 g 蒸餾水1 0 0 0 ml- 將牛肉膏、 脈陳和膽鹽溶解于4 0 0 m1蒸餾水中， 將瓊脂加人于 6 0 0 m工蒸餾水中， 煮沸使其溶解，再將兩液混合， 1 2 1 高壓滅菌 1 5 mi n ， 保存?zhèn)溆肂 . 3 . 2 完全培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基1 0 0 0 t il l- 乳糖1 0 g 檸 檬酸鈉8 . 5 g 硫代硫酸鈉8 . 5 9 1 0 %檸檬酸鐵溶液1 0 ml- 1 %中性紅溶液2 . 5 ml- 0 . 1 %煌綠溶液0 . 3 3 m l- 加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基， 按比例加人上述染料以外之各成分， 充分棍合均勻， 校正 p H7 . 0 ， 加人中性紅和煌綠溶液， 傾注平板。 注 1 : 制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用， 或保存于冰箱內(nèi)于4 8 h內(nèi)使用 注 2 : 煌綠溶液配好后應(yīng)在 1 0日內(nèi)使用。 注 3 :可 以 購 用 S S 瓊 脂 的 干 燥 培 養(yǎng) 基B . 4 麥康凱瓊脂B . 4 . 1 成分 蛋白 脈1 7 g 脈脈39 豬膽鹽( 或牛、 羊膽鹽)59 氯化鈉59 瓊脂1 7 g 蒸餾水1 0 0 0 ml- 乳糖1 0 g 0 . 0 1 Y.結(jié)晶紫水溶液1 0 m l , 0 . 5 %中性紅水溶液5 ml-B . 4 . 2制法B . 4 . 2 . 1 將蛋白脈、 際陳、 膽鹽和氯化鈉溶解于 4 0 0 m 工蒸餾水中， 校正 p H7 . 2 。將瓊脂加人 6 0 0 m l-蒸餾水中， 加熱溶解。將兩液合并， 分裝于燒瓶內(nèi)， 1 2 1 0 C高壓滅菌 1 5 m i n 備用B . 4 . 2 . 2 臨用時(shí)加熱溶化瓊脂， 趁熱加人乳糖， 冷至 5 0 0 C 5 5 時(shí)， 加人結(jié)晶紫和中性紅水溶液， 搖勻后傾注平板。 注: 結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。 6免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 5B . 5 伊 紅美藍(lán)瓊脂( EMB)B . 5 . 1 成分 蛋白 陳1 0 g 乳糖1 0 g 磷酸氫二鉀29 瓊脂1 7 g 2 %伊紅 Y溶液2 0 mL 。 . 6 5 %美藍(lán)溶液1 0 m L 蒸餾水1 0 0 0 mL p H7 . 1B. 5 . 2制法 將蛋白陳、 磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中， 校正 p H， 分裝于燒瓶內(nèi)， 1 2 1 高壓滅菌 1 5 m i n備用。臨用 時(shí)加人乳糖并加熱溶化瓊脂 ， 冷 至 5 0 0C-5 5 時(shí) ， 加入伊紅 Y和美藍(lán)溶液 ， 搖勻 ， 傾注平板B. 6三糖鐵瓊脂( T S DB. 6 . 1 成分 蛋白 陳2 0 g 牛肉膏59 乳糖1 0 g 蔗糖1 0 g 葡萄糖19 氯化鈉59 硫酸亞鐵錢 ( N H , ) Z F e ( S O , ) 6 H 2 0 1 0 . 2 g 硫代硫酸鈉。2 9 瓊脂1 2 g 酚紅0 . 0 2 5 g 蒸餾水1 0 0 0 mL p H7 . 4B . 6 . 2 制法 將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中， 校正 p H。加人瓊脂， 加熱煮沸， 以溶化瓊脂。加人。 . 2 %酚紅水溶液 1 2 . 5 mL , 搖勻。分裝試管， 裝量宜多些， 以便得到較高的底層。1 2 1 0C高壓滅菌1 5 mi n 放置高層斜面?zhèn)溆?。B . 7 葡萄糖半固體管B. 7 . 1 成分 蛋白陳 牛肉膏 氯化鈉 1 . 6 0 0 澳甲酚紫酒精溶液 葡 萄糖 瓊脂 蒸餾水 p H7 . 41g0 . 3 g0 . 5 g0 . 1 m l1g0 . 3 g1 0 0 M I ,免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 5B. 7 . 2制法 將蛋白膝、 牛肉膏和氯化鈉加人于水中， 校正 p H后加人瓊脂加熱溶解， 再加人指示劑和葡萄糖， 分裝小試管, 1 2 1 滅菌 1 5 mi n eB . 8 半固體管B. 8 . 1 成分 蛋白豚19 牛肉膏0 . 3 9 氯化鈉0 . 5 g 瓊脂0 . 3 5 - 0 . 4 g 蒸餾水1 0 0 m L p H7 . 4B. 8 . 2制法 按以上成分配好， 煮沸使溶解， 并校正 p H。分裝小試管。1 2 1 C 高壓滅菌 1 5 mi n 。直立凝固備用。 注: 供動力觀察、 菌種保存、 H抗原位相變異試驗(yàn)等用。B . 9 葡萄糖鐵培養(yǎng)基B. 9 . 1 成分 氯化 鈉59 硫酸鎂( Mg S 0 4 7 H 2 0 ) 0 . 2 g 磷酸二氫按1 9 磷酸氫二鉀1 9 葡 萄糖29 瓊脂2 0 g 蒸餾水1 0 0 0 ML 。 . 2 0 0 澳磨香草酚藍(lán)溶液4 0 ml - p H6 . 8B . 9 . 2制法 先將鹽類和糖溶解于水內(nèi)， 校正 p H， 再加瓊脂， 加熱溶化， 然后加人指示劑， 棍合均勻后分裝試管，1 2 1 高壓滅菌 1 5 mi n ， 放成斜面。B . 9 . 3 試驗(yàn)方法 用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面， 在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液， 肉眼觀察不見混濁， 以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在 2 0 -1 0 0之間為宜。將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種， 同時(shí)再以同法接種普通斜面一支作為對照。于 3 6 士1 培養(yǎng) 2 4 h 。陽性者葡萄糖按斜面上有正常大小的菌落生長; 陰性者不生長， 但在對照培養(yǎng)基上生長良好如在葡萄糖按斜面生長極微小的菌落可視為陰性結(jié)果。 注: 容器使用前應(yīng)用清潔液浸泡。再用清水、 蒸餾水沖洗干凈， 并用新棉花做成棉塞， 干熱滅菌后使用.如果操作 時(shí)不注意， 有雜質(zhì)污染時(shí)， 易造成假陽性的結(jié)果。B . 1 0 尿素瓊脂( p H7 . 2 )999111從刁，.1B. 1 0 . 1 成分 蛋 白脈 氯化鈉 葡萄糖免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載G B/ T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 5 磷酸二氫鉀29 。 . 4 %酚紅溶液3 mL 瓊脂2 0 g 蒸餾水1 0 0 0 mL 2 0 %尿素溶液1 0 0 ml pH7 . 2 士0 . 1B. 1 0 . 2制 法 將除尿素和瓊脂以外的成分配好， 并校正 p H， 加人瓊脂， 加熱溶化并分裝燒瓶。1 2 1 高壓滅菌1 5 mi n 。冷至 5 0 0C - - 5 5 0C， 加人經(jīng)除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為 2 %， 最終 p H應(yīng)為7 . 2 士0 . 1 。分裝于滅菌試管內(nèi)， 放成斜面?zhèn)溆谩 . 1 0 . 3 試驗(yàn)方法 挑取瓊脂培養(yǎng)物接種， 在 3 6 C士1 培養(yǎng) 2 4 h ， 觀察結(jié)果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。B . 1 1 西欲氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基B. 1 1 .1 成 分 氯化鈉59 硫酸鎂( Mg S O , 7 H2 0 ) 0 . 2 g 磷酸二氫鉸19 磷酸氫二鉀19 檸檬酸鈉59 瓊脂2 0 g 蒸餾水1 0 0 0 mL 0 . 2 %澳賡香草酚藍(lán)溶液4 0 mL p H6 . SB . 1 1 . 2 制法 先將鹽類溶解于水內(nèi)， 校正 p H， 再加瓊脂， 加熱溶化。然后加人指示劑， 混合均勻后分裝試管，1 2 1 高壓滅菌 1 5 mi n 。放成斜面。B . 1 1 . 3 試驗(yàn)方法 挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種， 于 3 6 士1 培養(yǎng) 4d ， 每天觀察結(jié)果陽性者斜面上有菌落生長， 培養(yǎng)基從 綠色轉(zhuǎn) 為藍(lán)色。B . 1 2 橄化鉀( K C N ) 培養(yǎng)基B. 1 2 . 1 成分 蛋白陳1 0 g 氯化鈉59 磷酸二氫鉀0 . 2 2 5 g 磷酸氫二鈉5 . 6 4 g 蒸餾水1 0 0 0 mL 。 . 5 %氰化鉀溶液2 0 m1 . p H7 . 6B . 1 2 . 2制法 將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶， 1 2 1 高壓滅菌 1 5 mi n 。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每 9免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載GB / T 8 3 8 1 . 2 -2 0 0 51 0 0 ml培養(yǎng)基加人 。 . 5 %氰化鉀溶液 2 . 0 mL ( 最后濃度為 1， 1 0。 。 。 ) ， 分裝于 1 2 mm X 1 0 0 m m滅菌試管， 每管約 4 m l， 立刻用滅菌橡皮塞塞緊， 放在4 冰箱內(nèi)， 至少可保存兩個(gè)月同時(shí)， 將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基， 分裝試管備用。B . 1 2 . 3 試驗(yàn)方法 將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白陳水內(nèi)成為稀釋菌液， 挑取 1 環(huán)接種于氰化鉀( K C N) 培養(yǎng)基。并另挑取1 環(huán)接種于對照培養(yǎng)基。在 3 6 士1 培養(yǎng) 1 d -2 d ， 觀察結(jié)果。如有細(xì)菌生長即為陽性( 不抑制) ， 經(jīng)Zd 細(xì)菌不生長為陰性( 抑制) 苦告: 氛化鉀是劇毒藥物， 使用時(shí)應(yīng)小心， 切勿沾染， 以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行。 試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán)， 抓化鉀逐漸分解， 產(chǎn)生氫佩酸氣體逸出， 以致藥物濃度降 低 ， 細(xì) 菌生長， 因而造成假 陽性反應(yīng)。試驗(yàn)時(shí)對每一環(huán)節(jié)都要特別注意 。B . 1 3 氨基酸脫梭酶試驗(yàn)培養(yǎng)基B . 1 3 . 1 成分 蛋白脈59 酵母浸膏39 葡萄糖19 蒸餾水1 0 0 0 m L 1 . 6 %澳甲酚紫一 乙醇溶液1 mL L - 氨基酸或 D L - 氨基酸5g 或 1 0 g p H6 . 8B. 1 3 . 2制法 除氨基酸以外的成分加熱溶解后 ， 分裝每瓶 1 0 0 mL ， 分別加人各種氨基酸: 賴氨酸、 精氨酸和鳥氨酸L - 氨基酸按每瓶 1 0 0 m 工中加人 。 . 5 g 或 D L - 氨基酸加人 1g 。再行校正 p H至 6 . 8 。對照培養(yǎng)基不加氨基酸分裝于滅菌的小試管內(nèi)， 每管 。 . 5 mL ， 上面滴加一層液體石蠟， 1 1 5 高壓滅菌 1 0 mi n ,B . 1 3 . 3 試驗(yàn)方法 從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種， 于 3 6 士1 培養(yǎng) 1 8 h - - 2 4 h ， 觀察結(jié)果氨基酸脫梭酶陽性者由于產(chǎn)堿， 培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。陰性者無堿性產(chǎn)物， 但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色對照管應(yīng)為黃色 。B . 1 4 糖發(fā)酵管B . 1 4 . 1 成分 牛 肉膏59 蛋白豚1 0 g 氯化鈉39 磷酸氫二鈉( N a , HP O , 1 2 H 2 0 ) 2 g 0 . 2 %澳賡香草酚藍(lán)溶液1 2 ml , 蒸餾水1 0 0 0 MI , p H7 . 4B . 1 4 . 2制法B . 1 4 . 2 . 1 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后， 按 。 . 5 %加人葡萄糖， 分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi) ， 1 2 1 高壓滅菌 1 5 mi n,B . 1 4 . 2 . 2 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后， 分裝每瓶