胃癌Her2的檢測(cè).ppt

胃癌HER2的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè),周曉軍 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院,HER2，又名HER2/neu，c-erbB-2，表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）家族成員； 原癌基因，位于17q21，編碼相對(duì)分子量185KD的跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受體，表皮生長(zhǎng)因子樣分子），在細(xì)胞表面表達(dá)； 通過參與信號(hào)傳道通路的一系列活動(dòng)影響細(xì)胞的增殖與分化。,HER2基因,HER2 受體跨膜二聚體的信號(hào)傳導(dǎo)途徑,1 = 基因拷貝數(shù) 2 = mRNA 轉(zhuǎn)錄 3 = 細(xì)胞表面受體蛋白表達(dá) 4 = 細(xì)胞外受體功能域釋放,A = HER2 DNA B = HER2 mRNA C = HER2 receptor protein,正常,擴(kuò)增/過度表達(dá),細(xì)胞核,細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞膜,1,2,3,4,C,B,A,HER2過度表達(dá)：正常狀態(tài)的10-100倍,HER2癌基因的致瘤機(jī)制： 抑制凋亡，促進(jìn)增殖；增加腫瘤細(xì)胞的侵襲 力；促進(jìn)腫瘤血管新生和淋巴管新生。 研究表明： 30以上的人類腫瘤中存在HER2基因的擴(kuò)增/ 過度表達(dá)（如乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜 癌、輸卵管癌、胃癌和前列腺癌等); 胃癌中HER-2/neu基因的過表達(dá)率為7%- 27%(-45%)，通過FISH檢測(cè)基因擴(kuò)增率為 10%-20%,胃癌組織學(xué)類型(WHO2000)：,1管狀腺癌（adenocarcinoma）最多見。分高、中、低分化，此型癌多為高分化，惡性度較低，轉(zhuǎn)移較晚。 2乳頭狀腺癌（ papillary form）：腺腔內(nèi) 出現(xiàn)許多乳頭。 3印戒細(xì)胞癌（signet-ring cell）：癌細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量偏酸性粘液，常將胞核擠壓于癌細(xì)胞漿之一側(cè)，形似戒指，故稱之為印戒細(xì)胞癌。 4.,Lauren分型(1965): 根據(jù)胃癌細(xì)胞形態(tài)和胃癌組織中粘液性質(zhì)將胃癌分為腸型和彌漫型兩大類。 腸型胃癌中唾液酸粘液及硫酸粘液多見，發(fā)生于腸化生上皮；腸型胃癌多見于老年患者，惡性度較低，分化程度差別大，與腫瘤大小反比，組織學(xué)上多為乳頭狀腺癌或腺管狀腺癌。 彌漫型胃癌中中性粘液多見。彌漫型胃癌多見于青年人，惡性度較高，肉眼類型多為皮革胃，組織學(xué)上多為粘液細(xì)胞癌（印戒細(xì)胞癌）及未分化癌。 Ming（1977）：膨脹型 VS 浸潤(rùn)型,胃癌HER2檢測(cè),HER2 gene,HER2 gene,HER2 gene,雙鏈靶基因,變性的單鏈DNA,與熒光標(biāo)記探針復(fù)性產(chǎn)生熒光信號(hào),熒光原位雜交法原理 Fluorescence in situ Hybridisation (FISH),HER2 probe,CEP 17 probe,比值 2.2 提示Her-2無(wú)擴(kuò)增,比值 2.2提示Her-2有擴(kuò)增,比值介于1.82.2臨界值,Aneusomy, Not amplified,Denature target DNA and hybridise probe,Primary antibody binds to the probe,Secondary antibody (with unactivated visualisation agent) binds to primary antibody,色素原位雜交法原理 chromogenic in situ hybridization (CISH),CISH：無(wú)HER2基因擴(kuò)增,CISH： HER2基因低擴(kuò)增,CISH： HER2基因高拷貝擴(kuò)增,IHC檢測(cè):,抗原修復(fù) 有 / 無(wú),組織固定 方法,抗體選擇,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),變異性,IHC vs FISH,Fig. 1 HER-2 protein expression evaluated by immunohistochemistry (A-C) (original magnification 200) and HER-2 gene amplification assessed by FISH (D-F) (original magnification 1000) in gastric carcinoma tissue. A and D, 3+ by immunohistochemical staining with HER-2 amplification. B and E, 2+ by immunohistochemical staining with HER-2 amplification. C and F, 1+ by immunohistochemicalstaining with HER-2 amplification.,胃癌HER2檢測(cè),胃癌HER2檢測(cè),HER2檢測(cè)流程,組織采集,組織形態(tài),檢測(cè)耗時(shí),評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦68個(gè)） 有代表性的手術(shù)標(biāo)本,胃癌HER2檢測(cè)的流程,多處活檢的必要性,Image courtesy of Prof. G Viale,HER2檢測(cè)流程,組織采集,檢測(cè)耗時(shí),評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦68個(gè)） 有代表性的手術(shù)標(biāo)本,胃癌HER2檢測(cè)的特性,腫瘤異質(zhì)性高(HER2-陽(yáng)性位點(diǎn)范圍小) FISH檢測(cè)應(yīng)篩查整個(gè)切片,組織形態(tài),HER2檢測(cè)流程,和乳腺癌相似 首先采用免疫組化法（IHC） 檢測(cè) HER2-陽(yáng)性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+ 明視野方法優(yōu)先,足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦68個(gè)） 有代表性的手術(shù)標(biāo)本,腫瘤異質(zhì)性高(HER2-陽(yáng)性位點(diǎn)范圍小) FISH檢測(cè)應(yīng)篩查整個(gè)切片,檢測(cè)耗時(shí),評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),組織采集,組織形態(tài),胃癌HER2檢測(cè)的特性,明視野技術(shù)有利于發(fā)現(xiàn)HER2陽(yáng)性腫瘤區(qū)域,相比乳腺癌，著色異質(zhì)性在胃癌和胃食管結(jié)合部癌更常見1 胃癌中， 530%病例會(huì)出現(xiàn)腫瘤異質(zhì)性1-3,Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797805. Rschoff J, et al. der pathologe 2010; 31:20817. Rschoff J, et al. Virchovs Archive 2010; accepted for publication.,Image courtesy of Prof. G Viale,HER2檢測(cè)流程,和乳腺癌相似 首先采用免疫組化法（IHC） 檢測(cè) HER2-陽(yáng)性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+ 明視野方法優(yōu)先,足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦68個(gè)） 有代表性的手術(shù)標(biāo)本,腫瘤異質(zhì)性高(HER2-陽(yáng)性位點(diǎn)范圍小) FISH檢測(cè)應(yīng)篩查整個(gè)切片,檢測(cè)耗時(shí),組織采集,組織形態(tài),胃癌HER2檢測(cè)的特性,10%的腫瘤細(xì)胞的基側(cè)膜、側(cè)膜強(qiáng)染或完全膜強(qiáng)染定義為IHC陽(yáng)性 不界定活檢標(biāo)本染色的腫瘤細(xì)胞占總體腫瘤細(xì)胞的百分比：需要5個(gè) (成簇) 細(xì)胞染色,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),Herceptin EU SmPC: http:/www.ema.europa.eu/humandocs/PDFs/EPAR/ Herceptin/emea-combined-h278en.pdf.,胃癌HER2檢測(cè)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),完全、基側(cè)膜或側(cè)膜染色反應(yīng),HER2陽(yáng)性胃癌和胃食管結(jié)合部癌可能表現(xiàn)為基側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜染 底側(cè)膜、側(cè)膜染色的發(fā)生通常與低分化胃腺癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)有關(guān),Hofmann M, et al. Histopathology 2008; 52:797805. Image reproduced courtesy of TARGOS Molecular Pathology GmbH.,2.5x 5x,20x 40x,40x,10x 20x,放大: x-倍,評(píng)分,3+,2+,1+,0,強(qiáng)染色 (無(wú)放大),弱到中度染色,隱約可見 (更高放大倍數(shù)),陰性,染色強(qiáng)度,IHC染色強(qiáng)度對(duì)應(yīng)的放大倍率,為了分辨明顯的細(xì)胞間（完全、底側(cè)膜或側(cè)膜）的膜染色，所需的顯微鏡放大倍率（ 工作距離）,10x,20x,需更高的放大倍數(shù),IHC 2+,20x,需高倍放大,IHC 1+,40x,40x,5x,無(wú)需放大視野可見膜染色,IHC 3+,甚至無(wú)需顯微鏡也可見,5x,放大倍率和HER2評(píng)分,腫瘤組織內(nèi),邊緣擠壓所至的假象,IHC: 樣本排除標(biāo)準(zhǔn),HER2檢測(cè)ICH法染色的活檢/手術(shù)標(biāo)本,排除保存情況差的腫瘤組織,排除非特異性染色,非腫瘤組織內(nèi),腸型化生、再生（鄰近潰瘍）,胞漿、核、僅底邊、腔緣部分 著色,評(píng)分為0,無(wú)染色 (40x 放大倍率),IHC: 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),完全膜染色或基側(cè)膜、側(cè)膜染色,染色強(qiáng)度 (可見的不可疑的膜染色),強(qiáng)染色 (2.5x5x 放大倍率),弱到中度染色(10x20x 放大倍率),必須至少有: 活檢標(biāo)本中5個(gè) (成簇) 細(xì)胞染色 手術(shù)標(biāo)本中10%的腫瘤細(xì)胞染色,評(píng)分為2+,隱約可見染色(40x 放大倍率),評(píng)分為1+,評(píng)分為3+,特異性膜染色 (明顯的 & 細(xì)胞間的),HER2檢測(cè)流程,和乳腺癌相似 首先采用免疫組化法（IHC） 檢測(cè) HER2-陽(yáng)性: IHC 3+ 或 IHC 2+/FISH+ 明視野方法優(yōu)先,足夠數(shù)量的有代表性的活檢標(biāo)本（推薦68個(gè)） 有代表性的手術(shù)標(biāo)本,腫瘤異質(zhì)性高(HER2-陽(yáng)性位點(diǎn)范圍小) FISH檢測(cè)應(yīng)篩查整個(gè)切片,組織采集,組織形態(tài),胃癌HER2檢測(cè)的特性,10%的腫瘤細(xì)胞的基側(cè)膜、側(cè)膜強(qiáng)染或完全膜強(qiáng)染定義為IHC陽(yáng)性 不界定活檢標(biāo)本染色的腫瘤細(xì)胞占總體腫瘤細(xì)胞的百分比：需要5個(gè) (成簇) 細(xì)胞染色,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),檢測(cè)耗時(shí),檢測(cè)所需時(shí)間不應(yīng)該超過5個(gè)工作日 (晚期胃癌進(jìn)展十分快) 需應(yīng)用多學(xué)科方法,0,FISH,+,可接受赫賽汀治療,可接受赫賽汀胃癌治療的歐盟標(biāo)準(zhǔn),+1,+2,+3,IHC,腫瘤標(biāo)本,H