GB5413.31-2013食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中脲酶的測定.pdf

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.3120132013-11-29 發(fā)布2014-06-01 實(shí)施食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中脲酶的測定GB 5413.312013I前言本標(biāo)準(zhǔn)代替 GB/T 5413.311997嬰幼兒配方食品和乳粉 脲酶的定性檢驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)與 GB/T 5413.311997 相比，主要變化如下：修改了標(biāo)準(zhǔn)的名稱；增加了尿素溶液的貯存條件；增加了納氏試劑的貯存條件；增加了判定結(jié)果的時(shí)限規(guī)定。GB 5413.3120131食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中脲酶的測定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中脲酶的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中脲酶的定性檢驗(yàn)。2原理脲酶在適當(dāng)酸堿度和溫度條件下，催化尿素轉(zhuǎn)化成碳酸銨。碳酸銨在堿性條件下生成氫氧化銨，與納氏試劑中的碘化鉀汞復(fù)鹽作用生成棕色的碘化雙汞銨。3試劑和材料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的三級水。3.1試劑3.1.1尿素（H2NCONH2）。3.1.2鎢酸鈉（Na2WO42H2O）。3.1.3酒石酸鉀鈉（C4H4O6KNa4H2O）。3.1.4硫酸（H2SO4）。3.1.5磷酸氫二鈉（Na2HPO4）。3.1.6磷酸二氫鉀（KH2PO4）。3.1.7碘化汞（HgI2）。3.1.8碘化鉀（KI）。3.1.9氫氧化鈉（NaOH）。3.2試劑配制3.2.1尿素溶液（10 g/L）：稱取尿素 5 g，溶解于 500 mL 水中。保存于棕色試劑瓶中，冰箱中冷藏，有效期為 1 個(gè)月。3.2.2鎢酸鈉溶液（100 g/L）：稱取鎢酸鈉 50 g，溶解于 500 mL 水中。3.2.3酒石酸鉀鈉溶液（20 g/L）：稱取酒石酸鉀鈉 10 g，溶解于 500 mL 水中。3.2.4硫酸溶液（50 mL/L）：吸取硫酸 25 mL，溶解于 500 mL 水中。3.2.5磷酸氫二鈉溶液：稱取無水磷酸氫二鈉 9.47 g，溶于 1000 mL 水中。3.2.6磷酸二氫鉀溶液：稱取磷酸二氫鉀 9.07 g，溶于 1000 mL 水中。3.2.7中性緩沖溶液：取磷酸氫二鈉溶液 611 mL，磷酸二氫鉀溶液 389 mL，兩種溶液混合均勻。3.2.8碘化汞-碘化鉀混合溶液：稱取紅色碘化汞55 g，碘化鉀41.25 g，溶于250 mL水中。GB 5413.31201323.2.9納氏試劑： 稱取氫氧化鈉144 g溶于500 mL水中，充分溶解并冷卻后，再緩慢地移入1000 mL的容量瓶中，加入碘化汞-碘化鉀混合溶液250 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)入試劑瓶內(nèi)，靜置后，用上清液。此試劑需棕色瓶保存，冰箱中冷藏，有效期為1個(gè)月。4儀器和設(shè)備4.1電子天平：感量為 0.01 g。4.2旋渦振蕩器。4.3恒溫水浴鍋：401。5分析步驟取試管甲、乙兩支，各稱入 0.10 g 試樣，再吸入 1 mL 水，振搖 0.5 min（約 100 次） 。然后分別吸入 1 mL 中性緩沖溶液。向甲管（樣品管）吸入 1 mL 尿素溶液，再向乙管（空白對照管）吸入 1 mL水。兩管搖勻后，置于 401水浴中保溫 20 min。從水浴中取出兩管后，各吸入 4 mL 水，搖勻，再吸入 1 mL 鎢酸鈉溶液， 搖勻， 吸入 1 mL 硫酸溶液， 搖勻， 過濾， 收集濾液備用。 取上述濾液 2 mL，分別吸入到二支 25 mL 具塞的比色管中。再各吸入 15 mL 水，1 mL 酒石酸鉀鈉溶液，和 2 mL 納氏試劑，最后用水定容至 25 mL，搖勻。5 min 內(nèi)觀察結(jié)果。6分析結(jié)果的表述分析結(jié)果按表 1 進(jìn)行判斷。表 1結(jié)果的判斷脲酶定性表示符號顯示情況強(qiáng)陽性+磚紅色混