GB12743-2003大豆種子產(chǎn)地檢疫規(guī)程.pdf

GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3B li青 本標(biāo)準(zhǔn)代替GB 1 2 7 4 3 -1 9 9 1 大豆種子產(chǎn)地檢疫規(guī)程 。 GB 1 2 7 4 3 -1 9 9 1 大豆種子產(chǎn)地檢疫規(guī)程 已執(zhí)行了十余年， 目前， 大豆上的危險(xiǎn)性有害生物種類(lèi)已經(jīng)發(fā)生了變化， 檢驗(yàn)檢疫技術(shù)也有了發(fā)展和提高， 原規(guī)程已不適應(yīng)大豆生產(chǎn)發(fā)展的需要， 特對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂。修訂后的標(biāo)準(zhǔn)增加了1 9 9 5年新公布的國(guó)內(nèi)檢疫對(duì)象大豆疫病， 該病也是我國(guó) 1 9 9 3年公布的一類(lèi)進(jìn)境植物檢疫對(duì)象; 同時(shí)， 由于大豆菌核病是土傳病害， 種子本身并不帶菌傳病， 因此修訂后不再列為應(yīng)檢有害生物。有害生物的綜合治理措施也做了相應(yīng)的調(diào)整， 增加了一些新的技術(shù)內(nèi)容。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄B 、 附錄C為規(guī)范性附錄， 附錄 A為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部種植業(yè)管理司歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位: 全國(guó)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)、 遼寧省植保植檢站、 吉林省植物檢疫站、 黑龍江省植保植檢站、 農(nóng)業(yè)部大豆種子質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心、 黑龍江省富錦市植保站。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人: 王福祥、 吳立峰、 文景芝、 蔡明、 吳雨泉、 杜淑梅、 孫波、 萬(wàn)振家。 本標(biāo)準(zhǔn)委托全國(guó)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心負(fù)責(zé)解釋。 本標(biāo)準(zhǔn) 1 9 9 1 年首次發(fā)布， 本次為第一次修訂。C日 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3大 豆 種 子 產(chǎn) 地 檢 疫 規(guī) 程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大豆種子產(chǎn)地的限定性有害生物種類(lèi)、 健康種子生產(chǎn)、 檢驗(yàn)、 檢疫、 簽證等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于實(shí)施大豆種子產(chǎn)地檢疫管理的植物檢疫機(jī)構(gòu)及繁育、 生產(chǎn)大豆種子的單位和個(gè)人。2術(shù)語(yǔ)和定義 下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2 . 1 產(chǎn)地 因植物檢疫的目的而單獨(dú)管理的生產(chǎn)點(diǎn)。2 . 2 產(chǎn) 地檢疫 植物檢疫機(jī)構(gòu)對(duì)植物及其產(chǎn)品( 含種苗及其他縈殖材料， 下同) 在原產(chǎn)地生產(chǎn)過(guò)程中的全部工作， 包括田間調(diào)查、 室內(nèi)檢驗(yàn)、 簽發(fā)證書(shū)及監(jiān)督生產(chǎn)單位做好選地、 選種和疫情處理等工作。2 . 3 有害生物 任何對(duì)植物或植物產(chǎn)品有害的植物、 動(dòng)物或病原物的種、 株( 品) 系或生物型。2 . 4 限定性有害生物 一種檢疫性有害生物或限定非檢疫性有害生物。2 . 5 檢疫性有容生物 對(duì)受其威脅的地區(qū)具有潛在經(jīng)濟(jì)重要性、 但尚未在該地區(qū)發(fā)生， 或雖已發(fā)生但分布不廣并進(jìn)行官方防治的有害生物。2 . 6 限定非檢疫性有害生物 一種非檢疫性有害生物， 但它在供種植的植物中存在， 危及這些植物的預(yù)期用途而產(chǎn)生無(wú)法接受的經(jīng)濟(jì)影響， 因而在輸人方境內(nèi)受到限制。2 . 7 健康種子 按本標(biāo)準(zhǔn)所列檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)， 符合本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)限定性有害生物要求的大豆種子。3 限定性有害生物3 . 1 檢疫性有害生物: 大豆疫病 P h y t o p h t h o r a s o j a e K a u f m . &G e r d . 冤絲子屬 C u s c u t a s p p .3 . 2 限定非檢疫性有害生物: 大豆病毒病S o y b e a n v ir u s d i s e a s e 大豆霜霉病P e r o n o s p o r a ma n s c h u r i c a ( N a u m. ) S y dGB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3大豆灰 斑病C e r c o s p o r a s o j i n a H a r a3 . 3 省里補(bǔ)充的其他檢疫對(duì)象。4 健康種子生產(chǎn)4 . 1 妞育地選擇4 . 1 . 1 繁育地設(shè)在排灌條件良好、 土壤肥力中等的地塊， 并翻耕曬土。4 . 1 . 2 繁育地選擇連續(xù)種植禾谷類(lèi)作物二至三年以上的地塊， 無(wú)本標(biāo)準(zhǔn)所列的檢疫性有害生物發(fā)生。4 . 1 . 3 避免鄰作是限定性有害生物的寄主( 如向日葵和油菜等) ， 并保持 1 0 0 m內(nèi)無(wú)大豆的隔離條件。4 . 1 . 4 產(chǎn)地檢疫申報(bào): 種子繁育單位或個(gè)人應(yīng)在播種前一月向當(dāng)?shù)刂参餀z疫機(jī)構(gòu)申請(qǐng)產(chǎn)地檢疫， 并填寫(xiě)申 報(bào)表( 見(jiàn)表1 ) , 表 1 產(chǎn)地檢痊申報(bào)表申報(bào) 號(hào) :作 物名 稱(chēng) :申報(bào)單位( 農(nóng)戶) :聯(lián)系人:聯(lián)系電話:地址:種植地點(diǎn)種 植 地 塊編號(hào)種 植 面 積 /6 6 7 m ( 畝 )品 種種苗來(lái) 源預(yù)計(jì)播 期 預(yù) 產(chǎn)種子量/ k g隔離 條 件合計(jì)植物檢疫機(jī)構(gòu)審核意見(jiàn):審核人:植物檢疫專(zhuān)用章 年月日注 1 :本表一式二聯(lián)， 第一聯(lián)由審核機(jī)關(guān)留存， 第二聯(lián)交申報(bào)單位.注2 : 本表僅供當(dāng)季使用。4 . 2 種子健康標(biāo)準(zhǔn)4 . 2 . 1 原原種: 不帶本標(biāo)準(zhǔn)所列的限定性有害生物， 無(wú)斑駁。4 . 2 . 2 原種: 無(wú)疫霉菌、 冤絲子種粒; 霜霉病、 病毒病發(fā)病率要分別低于 3 %和 0 . 2 %， 灰斑病發(fā)病率、 種子斑駁率低于3 0%a4 . 2 . 3 一般良種: 無(wú)疫霉菌、 冤絲子種粒; 霜霉病、 病毒病發(fā)病率要分別低于 1 0 %和。 . 5 %， 灰斑病發(fā)病率、 種子斑駁率低于 5 %.4 . 3選種4 , 3 . 1 原原種自上一年無(wú)限定性有害生物的大豆 田中大豆健株上采集， 經(jīng)檢疫證明符合原原種健康標(biāo)準(zhǔn) 。4 . 3 . 2 原種及一般良種采 自上一級(jí)符合標(biāo)準(zhǔn)的種子田。4 . 4 防疫措施4 . 4 . 1 播種前用篩子、 選種機(jī)等機(jī)械或人工辦法粒選， 汰除混人的雜質(zhì)。GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 34 . 4 . 24 . 4 . 34 . 4 . 44 . 4 . 54 . 4 . 6處理 。4 . 4 . 74 . 4 . 8播種前用藥劑拌種， 防止大豆疫病或其他有害生物危害。在幼苗期， 及時(shí)拔除病苗雜草。在大豆花期以前， 如果有蚜蟲(chóng)發(fā)生， 應(yīng)對(duì)種子田及保護(hù)帶施藥滅蚜。盛花期遇潮濕天氣， 田間灰斑病病葉率達(dá)到3 0 %時(shí)， 應(yīng)施藥防治。開(kāi)展大豆疫病 田間監(jiān)測(cè)， 發(fā)現(xiàn)可疑株， 應(yīng)進(jìn)行土壤檢測(cè)， 一旦確認(rèn)立即銷(xiāo)毀病株并進(jìn)行土壤當(dāng)田間發(fā)現(xiàn)冤絲子時(shí)， 少的隨即拔除， 多的連同大豆一起銷(xiāo)毀。對(duì)田塊內(nèi)的大豆殘株及落葉等應(yīng)及時(shí)清除、 燒毀， 避免串田灌溉， 并及時(shí)防治其他有害生物。5 檢查、 檢驗(yàn)、 簽證51 檢查以農(nóng)業(yè)植物檢疫部門(mén)為主， 種子部門(mén)、 生產(chǎn)單位( 農(nóng)戶) 協(xié)助。5 . 2 原原種逐行逐株目測(cè)。原種、 一般良種采用棋盤(pán)式抽樣檢驗(yàn)， 檢驗(yàn)區(qū)面積不得大于 3 3 . 3 3 h m ,0 . 6 7 h . 以下取 5點(diǎn)， 0 . 6 7 h m ， 一6 . 6 7 h m ， 取 8點(diǎn)， 6 . 6 7 h m 2 一1 3 . 3 3 h . 1取 1 1 點(diǎn)， 1 3 . 3 3 h m3 3 . 3 3 h m 取 1 5 點(diǎn)， 每點(diǎn)檢驗(yàn)株數(shù)不得少于2 0 0 . 3 3 . 3 3 h 耐 以上可根據(jù)各方面條件的均勻程度， 另外劃分檢驗(yàn)區(qū)5 . 3 檢查時(shí)期: 在大豆整個(gè)生育期間， 要進(jìn)行限定性有害生物發(fā)生情況的系統(tǒng)調(diào)查。在幼苗期、 盛花期、 鼓粒成熟期進(jìn)行三次田間檢查， 田間癥狀詳見(jiàn)附錄A， 將檢驗(yàn)結(jié)果填人大豆種子田間檢驗(yàn)記錄表( 見(jiàn)表 2 ) , 表 2 大豆種子田間檢驗(yàn)記錄表地 點(diǎn)品 種臀處 理種 子級(jí) 別調(diào) 查 項(xiàng) 目調(diào) 查 時(shí) 期畝 產(chǎn) 量/ k g質(zhì) 量等 級(jí)播 前種 子苗期開(kāi) 花盛 期結(jié) 英盛 期收 獲種 子檢查株( 粒) 數(shù)冤絲子種( 株) 數(shù)疫病率/ ( 00/ a )箱霉病率/(%)灰斑病率/(%)種子斑駁率/(%)病毒種傳率/(%)其他調(diào) 查 日期調(diào) 查 人5 . 3 . 1 幼苗期檢查: 檢查有無(wú)限定性有害生物的可疑癥狀， 如發(fā)現(xiàn)有則按 4 . 4的有關(guān)防疫措施處理。5 . 3 . 2 盛花期檢查: 檢查大豆疫病和冤絲子并按照 4 . 4 的有關(guān)防疫措施及時(shí)處理。病毒病檢驗(yàn)以盛花期為主， 該期原種及良種田田間病株率可作為該地塊種傳率預(yù)測(cè)的依據(jù)， 原種及良種田花期病毒病株率應(yīng)分別低于 1 %和 3 %?；野卟∮诨ㄆ跈z查后， 根據(jù)病情和當(dāng)?shù)貧庀箢A(yù)報(bào)決定是否應(yīng)進(jìn)行藥劑防治。5 . 3 . 3 鼓粒成熟期檢查: 檢查大豆疫病并按照 4 . 4 給出的防疫措施及時(shí)處理。5 . 4 田間不能確診的限定性有害生物樣本帶回實(shí)驗(yàn)室， 做室內(nèi)檢驗(yàn)( 大豆疫病檢測(cè)方法見(jiàn)附錄B ， 病毒病檢測(cè)方法 詳見(jiàn)附錄 C， 其他有害生物按 常規(guī)方法進(jìn)行) 。檢驗(yàn)結(jié)果填人大豆室 內(nèi)檢驗(yàn)報(bào)告單( 見(jiàn) 表 3 ) 3GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3表 3 產(chǎn)地檢疫室內(nèi)檢驗(yàn)報(bào)告單對(duì)應(yīng)申報(bào)號(hào):樣 本 編 號(hào)取樣 日期 :作 物 名 稱(chēng) :作物品種取 樣 部 位檢 驗(yàn) 方 法 :檢 驗(yàn) 結(jié) 果 :備注:檢驗(yàn)人( 簽名)審核人( 簽名) : 植物檢疫專(zhuān)用章 年月日5 . 5簽證5 . 5 . 1 凡檢查、 檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大豆疫病者不予簽證。5 . 5 . 2 病毒病檢驗(yàn)以田間為主， 必要時(shí)做室內(nèi)檢驗(yàn)， 若病毒病不符合本標(biāo)準(zhǔn)要求， 不應(yīng)簽證。5 . 5 . 3 發(fā)現(xiàn)冤絲子經(jīng)嚴(yán)格處理合格， 可以簽證。5 . 5 . 4 凡經(jīng)過(guò)田間檢驗(yàn)及室內(nèi)檢驗(yàn)后， 收獲的種子符合健康種子標(biāo)準(zhǔn)的， 發(fā)給產(chǎn)地檢疫合格證( 見(jiàn)表4) . 表 4產(chǎn)地檢疫合格證有 效 期 至檢 疫 日期 :) 檢( ) 字第號(hào)口目口目月月年年作 物 名 稱(chēng)品種名稱(chēng)種 植 面 積田塊 數(shù) 目種 苗 數(shù) 量k g ( 株)種苗來(lái)源種 植 單 位負(fù)貴人檢 疫 結(jié) 果簽發(fā)機(jī)關(guān)( 蓋章)檢疫員 年月日注: 本證一式兩聯(lián)， 第一聯(lián)交生產(chǎn)單位憑證換取植物檢疫證書(shū)， 第二聯(lián)留存檢疫機(jī)關(guān)備查。 本證不作 植物檢疫證書(shū) 使用。5 . 5 . 5 若檢驗(yàn)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)檢疫性有害生物， 但發(fā)現(xiàn)限定非檢疫性有害生物的， 記錄下結(jié)果， 不予簽發(fā)產(chǎn)地檢疫合格證。調(diào)運(yùn)時(shí)， 檢疫機(jī)構(gòu)視是否符合種子調(diào)入地檢疫要求確定是否簽發(fā)植物檢疫證書(shū)。GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3 附錄A ( 資料性附錄)大 豆限定有 害生物的田間癥狀A(yù) . 1 大豆疫病 幼苗期， 幼苗出土前后碎倒， 根及下胚軸變褐、 變軟， 真葉期被害幼苗莖部呈水漬狀， 葉片變黃， 嚴(yán)重者枯萎而死。 成株受害時(shí)， 往往在莖基部發(fā)病， 出現(xiàn)咖啡色病斑， 并向上下擴(kuò)展， 病莖髓部變褐， 皮層和維管束組織壞死、 葉片變黃下垂但不脫落， 根部受害變黑褐色， 病痕邊緣不清晰A. 2繭絲子 莖線狀， 直徑1 . 0 m m -1 . 5 m m， 黃色、 淡橙黃色或黃 綠色， 光滑無(wú)毛， 在寄主莖上向左纏繞， 葉鱗片狀， 膜質(zhì)?；S白色， 多數(shù)簇生一起， 呈繡球形， 種子為小型茹果。A . 3 大豆腸易病A . 3 . 1 幼苗: 沿葉片主脈兩側(cè)出現(xiàn)褪綠塊斑， 擴(kuò)大后葉片全部變黃， 病葉背面密生灰白色霉層， 病株矮化， 葉皺縮， 封壟后死亡。A . 3 . 2 成株: 葉片上病斑散生， 呈圓形或不規(guī)則形的黃綠色小斑點(diǎn)， 葉背有灰白色霉層， 呈星芒狀。發(fā)病重的， 病斑可匯成更大病塊， 病葉干枯， 被害籽粒表面粘附有灰白色霉層。A . 4 大豆灰斑病 葉背病斑色較深， 生有黑灰色霉層( 即分生袍子梗和分生抱子) ， 干枯時(shí)破裂成孔。初在葉片表面生圓形小斑點(diǎn)， 后擴(kuò)大。中心變灰色或灰褐色， 周緣成赤褐色， 圓形、 橢圓形、 多角形或不規(guī)則形， 莢上病斑為圓形， 褐色， 有深褐色輪廓。莖部病斑呈紡錘形， 黑褐色， 逐漸發(fā)展繞莖一周。種子上的病斑為褐色圓形， 邊緣深褐色， 輕病粒僅產(chǎn)生褐色不規(guī)則形小點(diǎn)。A . 5 大豆病毒病A . 5 . 1 大豆花葉病毒病( S o y b e a n mo s a i c v i r u s )A . 5 . 1 . 1 病苗癥狀 大多數(shù)病苗在第 1 -2 復(fù)葉展開(kāi)后都已顯癥， 氣溫持續(xù)在2 5 以上時(shí)則隱癥或延遲顯癥， 病苗單葉兩側(cè)向下縱卷成筒狀， 或倒三角形， 單葉及復(fù)葉可有斑駁、 花葉， 或背面葉脈局部壞死， 而引起葉片向下彎曲。A . 5 . 1 . 2 成株癥狀 花葉型: 花葉、 斑駁、 黃斑、 矮化、 皺縮。 頂枯型: 葉脈壞死， 自莖頂部生長(zhǎng)點(diǎn)向下壞死， 也可彎曲A . 5 . 2 大豆矮化病毒病( S o y b e a n s t u n t v i r u s ) 單葉扭曲， 葉背脈部分壞死， 葉片沿脈抽縮， 復(fù)葉輕性斑駁， 或葉脈退綠， 成株期呈頂枯狀， 與大豆花葉病的頂枯型相同。A . 5 . 3 其他病毒病 由不同病毒引起。 5GB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3A . 5 . 3 . 1花生輕性斑駁病毒病( P e a n u t mi l d mo t t le v i r u s )葉上有黃斑、 枯斑、 脈壞死、 斑駁或皺縮。A . 5 . 3 . 2 首蓓花葉病毒病( A l f a l f a mo s a i c v i r u s )葉片上呈現(xiàn)黃色斑駁或花葉 。 附錄B ( 規(guī)范性附錄)大豆疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方法B . 1 病原菌分離和培養(yǎng)B . 1 . 1 從病組織分離 選擇典型病株， 切取病斑邊緣病健組織交界處約 5 c m長(zhǎng)的一段組織， 放人濾網(wǎng)中， 自來(lái)水沖洗1 0 mi n ， 然后切成 0 . 5 c m見(jiàn)方的小塊， 放人0 . 1 %次抓酸鈉水溶液中浸泡0 . 5 mi n - I mi n 后取出， 立即放人無(wú)菌水中沖洗 3 次4 次， 用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離， 室溫2 2 0 C -2 5 下培養(yǎng) 3 d ， 在實(shí)體解剖鏡下觀察， 挑取疫霉菌絲， 轉(zhuǎn)移到胡蘿 卜 ( C A ) 或利馬豆( L A) 培養(yǎng)基上繁殖。B ， 1 . 2 從土壤分離 將土壤風(fēng)干， 研碎， 過(guò)篩( 孔徑2 mm) ， 加蒸餾水潤(rùn)濕， 使土壤含水量達(dá)到或接近飽和， 2 4 0C 2 6 0C光照條件下培養(yǎng) 4 d -6 d后， 加適量蒸餾水浸泡， 浸泡水面高出土表不超過(guò) 1 . 5 e m， 加感病大豆品種5 m m葉碟誘集 6h -1 2h ， 取出葉碟， 光照條件下用無(wú)菌水培養(yǎng)， 1 d 3 d 后鏡檢葉碟邊緣有無(wú)抱子囊。若有， 則吸取游動(dòng)抱子懸浮液， 涂于選擇性培養(yǎng)基上， 2 4 C-2 6 黑暗條件下培養(yǎng) 4h - 1 2h ， 顯微鏡下選擇已萌發(fā)的單個(gè)抱子， 用接種針挑取含單個(gè)抱子的瓊脂塊轉(zhuǎn)移到選擇性培養(yǎng)基上， 2 5 0C黑暗條件下繼續(xù)培養(yǎng)， 4h -6h后繼續(xù)轉(zhuǎn)皿純化。取得單游動(dòng)抱子菌株后， 以形態(tài)和致病性作最終鑒定。B . 2 鑒別特征 大豆疫霉菌在 P D A培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢， 氣生菌絲致密， 幼齡菌絲無(wú)隔多核， 分枝大多呈直角， 分枝基部稍有繳縮， 菌絲老化時(shí)產(chǎn)生隔膜， 并形成結(jié)節(jié)狀或不規(guī)則膨大。膨大部球形、 橢圓形， 大小不等。菌絲體寬 3 p m-9 p m。可以產(chǎn)生厚垣抱子。 該菌在利馬豆培養(yǎng)基和自來(lái)水中可以形成大量抱子囊。抱囊梗單生， 無(wú)限生長(zhǎng)， 多數(shù)不分枝， 抱子囊頂生， 倒梨形， 頂部稍厚， 乳突不明顯。新抱子囊在舊抱子囊內(nèi)以層出方式產(chǎn)生， 抱子囊不脫落， ( 2 3 -8 9 ) p m X( 1 7 -5 2 ) p m ， 平均5 8 p mX 3 8 u m 。游動(dòng)抱子在抱子囊內(nèi)形成， 卵 形， 一端或兩端鈍尖， 具兩根鞭毛， 茸鞭朝前， 尾鞭長(zhǎng)度為茸鞭的4 倍一5倍。 利馬豆不易購(gòu)得， 可以用“ 白蕓豆瓊脂培養(yǎng)基” 代替。該培養(yǎng)基用干豆吸脹 2 4 h ， 取吸脹豆 1 5 0 g ,加3 0 0 mL蒸餾水， 用高壓滅菌鍋 1 2 1 0C煮2 0 mi n ， 雙層紗布過(guò)濾， 濾汁加水補(bǔ)足至 1 。 。 。mL ， 加瓊脂制成含2 %瓊脂的培養(yǎng)基。在白蕓豆瓊脂培養(yǎng)基平板上， 菌落邊緣整齊， 菌絲致密， 氣生菌絲白色， 菌落前沿有環(huán)形半透明帶( 淀粉利用帶) ， 菌落上可產(chǎn)生大量卵抱子。 用胡蘿 卜 或利馬豆固體培養(yǎng)基培養(yǎng)、 一周后可產(chǎn)生大量卵抱子。藏卵器壁薄， 球形至扁球形， 直徑2 9 p m -4 6 p m ， 一般在4 0 K m以 下。 雄器 側(cè)生， 長(zhǎng)形或圓形。 卵抱子球形， 直徑1 9 f c m -3 8 p m ， 有光滑的內(nèi)壁和外壁， 淡黃色， 壁厚1 t m- 3 K m 由 于常規(guī)洗滌檢 驗(yàn)也可洗下大豆霜霉菌卵抱子， 為免混淆，可根據(jù)表 B . 1進(jìn)行甄別 。CB 1 2 7 4 3 - 2 0 0 3表 B. 1 疫.菌和括扭菌卯抱子 比較項(xiàng)目疫 霉 菌 卵 泡 子箱母菌卯抱子卵抱子直徑/ P M2 3 . 2 - 3 1 . 92 3 . 2 -2 9 . 0卵抱子壁厚/ P .2 . 3 - 3 . 21 . 3 -2 . 6卵 抱 子 形 態(tài) 及 顏 色球 形 、 黃 褐 色球形、 淡黃色卵抱子著生部位及特點(diǎn)種皮里面、 分散種皮表面、 集中成堆病種子表面特征無(wú)霉 層灰白色干粉狀祥層B . 3 常用培養(yǎng)基及其配方B . 3 . 1 胡蘿 卜 瓊脂培養(yǎng)基( C A) : 胡蘿 卜2 0 0 g ， 加 2 0 0 m L蒸餾水組織搗碎， 過(guò)濾， 汁液中加2 0 g瓊脂加熱融化， 蒸餾水補(bǔ)足至 1 0 0 0 m L， 分裝滅菌 3 0 mi n ,B . 3 . 2 利馬豆瓊脂培養(yǎng)基( L A) : 利馬豆 2 5 g ， 加水浸脹后加人 1 0 0 0 mL蒸餾水， 高溫滅菌3 0 m i n ， 過(guò)濾， 加 2 0 g瓊脂， 將溶液體積補(bǔ)充至 1 0 0 0 mL , 高溫滅菌 3 0 mi n ,B . 3 . 3 在 C A或 L A培養(yǎng)基中添加不同藥劑即配置成多種選擇性培養(yǎng)基， 常用的有以下幾種:B . 3 . 3 . 1 P A R P選擇性培養(yǎng)基: 在 C A或 L A基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加匹馬霉素( P i m a r i c in ) 1 0 mg / L ， 安比西林( A mp i c i l li n ) 2 5 0 m g / L， 利福平( R i f a mp i c i n ) 1 0 mg / L ， 五氯硝基苯( P C N B ) 5 0 mg / L ,B . 3 . 3 . 2 P A R P H選 擇性培養(yǎng)基: 在C A或L A基礎(chǔ)培養(yǎng)基中 添加匹馬 霉素( P i m a r i c i n ) 1 0 m g / L ， 安比西林( A mp i c i l li n ) 2 5 0 m g / L， 利福平( R i f a mp i c i n ) 1 0 mg / L ， 五氯硝基苯( P C N B ) 5 0 mg / L , 惡霉靈( Hy -me x a z o l ) 5 0 mg / L ,B . 3 . 3 . 3 P B N C選擇性培養(yǎng)基: 在 L A基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加五氯硝基苯( P C N B ) 2 0 m g / L, 苯萊特( B e n -l a t e ) 5 mg / L ， 硫酸新霉素( N e o my c i n S u l f a t e ， 新絲霉素) 1 0 0 mg / L , 氯霉素( C h l o r o a mp h e i c o l) 1 0 mg / L , 附錄C ( 規(guī)范性附錄)大豆病毒病種傳率的檢測(cè)技術(shù)C . 1 檢測(cè)范圍原原種 和原種 。C. 2器材C . 2 . 1 防蟲(chóng)溫室或網(wǎng)室。C . 2 . 2 河沙、 礫石、 珍珠巖或消過(guò)毒土壤， 任選一種。C . 2 . 3 花盆或塑料果盤(pán)( 長(zhǎng)方形， 約長(zhǎng)4 5 c m、 寬 3 3 c m、 高 1 0 c m， 底有細(xì)孔) 供播種。C . 2 . 4 消毒 缽體。C . 2 . 5 電鏡。C . 2 . 6 硅藻土或金剛砂( 4 0 0目6 0 0目) 。C . 2 . 7 指示作物菜豆品種“ mo n r o e b e a n ， 供試幼苗， 要求在防蟲(chóng)溫室培育， 在單葉到一片復(fù)