DB33T 594.2-2005 草莓脫毒種苗 第2部分 生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程.doc

DB33/T 594.22005DB33浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布2006-01-12實施2005-12-12發(fā)布草莓脫毒種苗第2部分：生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程Virus-free plantlets of strawberryPart 2: Technical regulations for productionDB33/T 594.2-2005浙江省地方標準ICS 65.020.20B 211前 言草莓脫毒種苗系列標準分為2個部分：第1部分：脫毒種苗；第2部分：生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程。本部分為草莓脫毒種苗系列標準的第2部分。本部分由浙江省農(nóng)業(yè)廳歸口。本部分起草單位： 浙江大學生物技術(shù)研究所。本部分主要起草人： 毛碧增、婁沂春、李德葆、孔樟良、吳建祥。I草莓脫毒種苗第2部分：生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1 范圍本部分規(guī)定了草莓脫毒苗生產(chǎn)過程中的培育技術(shù)等要求。本部分適用于通過組織培養(yǎng)技術(shù)培育的不攜帶草莓斑駁病毒（Strawberry mottle virus，SMoV）、草莓輕型黃邊病毒（Strawberry mild yellow edge virus，SMYEV）、草莓鑲脈病毒（Strawberry vein banding virus，SVBV）和草莓皺縮病毒（Strawberry crinkle virus，SCV）的草莓脫毒種苗的生產(chǎn)。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。DB33/T 501.2-2004 無公害草莓 第2部分：生產(chǎn)技術(shù)準則DB33/ 594.1-2005 草莓脫毒種苗 第1部分：脫毒種苗3 脫毒苗培育技術(shù)3.1 脫毒組培瓶苗的培育技術(shù) 3.1.1 優(yōu)良品種選擇選擇適宜當?shù)卦耘嗟母弋a(chǎn)優(yōu)質(zhì)品種。3.1.2 草莓脫毒的主要方法3.1.2.1 莖尖組織培養(yǎng)法3.1.2.1.1 外植體選擇采樣最佳時間為6月8月份晴天的中午，選擇無病蟲、品種純正的健壯植株，切取帶生長點的匍匐莖段2 cm3 cm，用流水沖洗干凈。3.1.2.1.2 莖尖剝離將表面清洗過的外植體置于超凈工作臺上，用70乙醇表面消毒1 min，棄乙醇，加0.1升汞和1滴Tween-20消毒8 min10 min，并不斷搖動，然后用無菌水沖洗5次8次，用無菌濾紙吸干水分。再置于解剖鏡下用解剖刀挑取0.2 mm0.3 mm的莖尖，接種于莖尖誘導培養(yǎng)基中。3.1.2.1.3 培養(yǎng)條件白天溫度252，光照強度30 molm-2s-160 molm-2s-1；晚上溫度182，黑暗培養(yǎng)。每天照光12 h16 h。3.1.2.1.4 組織培養(yǎng)快繁誘導培養(yǎng)至不定芽1.5 cm2.0 cm時分株接種于增殖培養(yǎng)基。經(jīng)病毒檢測合格的試管苗在增殖培養(yǎng)基上增殖，增殖培養(yǎng)每20 d30 d繼代一次（總繼代次數(shù)不超過8代），選2 cm3 cm的小苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)。脫毒組培瓶苗質(zhì)量要求按DB33/ 594.1-2005 草莓脫毒種苗第1部分脫毒種苗執(zhí)行。3.1.2.2 花藥組織培養(yǎng)法3.1.2.2.1 外植體選擇摘取花萼未張開花粉母細胞處一單核期的花蕾，放入4冰箱中預處理1 d2 d。3.1.2.2.2 培養(yǎng)過程取預處理過的花蕾，在超凈工作臺上用7075%乙醇浸泡1 min，再用0.1%升汞消毒5 min10 min，并不斷搖動，無菌水沖洗5次10次，然后去除花萼、花托等，用無菌鑷子夾取黃色花藥接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基中。3.1.2.2.3 愈傷組織培養(yǎng)條件暗培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為252。3.1.2.2.4 組織培養(yǎng)快繁誘導培養(yǎng)至致密愈傷組織直徑為0.2 cm左右時轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中誘導芽分化，待分化成苗后，進行病毒檢測，對合格的試管苗進行增殖，增殖培養(yǎng)每20 d30 d繼代一次（總繼代次數(shù)不超過8代），選2 cm3 cm的小苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)。脫毒組培瓶苗質(zhì)量要求按DB33/xxx.1-2005 草莓脫毒種苗第1部分脫毒種苗執(zhí)行。3.2 脫毒原原種苗、脫毒原種苗和脫毒生產(chǎn)用苗繁殖技術(shù)3.2.1 脫毒原原種苗繁殖打開脫毒瓶苗的瓶蓋，常溫弱光照條件下馴化1天2天后洗凈瓊脂，定植按照DB33/T