HDL和LDL膽固醇檢測方法學(xué)進展和比較.ppt

HDL和LDL膽固醇檢測方法學(xué)進展和比較 班級：10檢二 姓名： 陳艷慧 學(xué)號：6302410068,HDL,HDL(high density lipoprotein)，運載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出，動脈造影證明高密度脂蛋白膽固醇含量與動脈管腔狹窄程度呈顯著的負相關(guān)。所以高密度脂蛋白是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護因子。俗稱“血管清道夫”。,LDL,LDL的功能是轉(zhuǎn)運膽固醇到外圍組織，并調(diào)節(jié)這些部血漿脂蛋白位的膽固醇從頭合成。 血漿中的膽固醇是疏水性物質(zhì)必須與血液中HDL,LDL和PL等一起組成脂蛋白,HDL-C的檢驗方法,超速離心法 電泳法 化學(xué)沉淀法 直接測定法,超速離心法,美國疾病控制與預(yù)防中心(CDC)測定HDL-C的參考方法為超速離心法，也為NCEP所推薦。該法分三步進行：(1)超速離心(40000r/min，18.5小時)除去密度(d)1.006 kg/L富含甘油三酯的脂蛋白(CM、VLDL)。(2)下層懸浮液用肝素-MnCl2法(Hep-Mn2+法)離心沉淀(1 500g，30分鐘)，以除去富含apoB的脂蛋白LDL、Lp(a)。(3)測定上清液中chol含量，方法用CDC參考方法(ALBK法)。,電泳法,原理 在一定電場條件下，由于各種脂蛋白的分子大小及其在緩沖溶液中所帶電荷數(shù)的不同，故在支持介質(zhì)上遷移率亦不同。較小的HDL分子向陽極有較高的遷移率，可將HDL與VLDL、LDL區(qū)分開。,電泳法 Helena公司已開發(fā)可供REP快速全自動電泳儀使用的HDL-C檢測試劑盒，其原理是：血清(1 l)經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳(400V，15分鐘)后，將chol基質(zhì)試劑均勻鋪在凝膠表面，孵育一段時間(10分鐘)后用10%冰醋酸固定，然后將凝膠烤干。570 nm波長下自動掃描即可確定HDL-C百分含量。同時將血清TC值輸入，則可求得血清HDL-C值。,化學(xué)沉淀法,常用的沉淀劑為多陰離子，如磷鎢酸(PTA)、DS、肝素(Hep)或非離子多聚體如聚乙二醇(PEG)與某些兩價陽離子(如Mg2+、Ca2+、Mn2+)合用能使除HDL外含apoB的脂蛋白都沉淀。 HDL中chol多用酶法(CHOD-PAP)測定。,美國Reference Diagnostics公司推出新一代磁化DS沉淀法檢測試劑盒。其原理是單一沉淀劑與血清標本15混合在一標本杯中，然后將標本杯放進磁盤，非HDL脂蛋白顆粒因被磁化，能很快被磁盤吸至杯底(沉淀)，而與HDL顆粒分離(上清)。此過程簡單迅速，不需離心，無HDL共沉淀及含apoB顆粒沉淀不完全現(xiàn)象。結(jié)果準確，不受高TG干擾，比傳統(tǒng)DS50-Mg2+法測定時間大大縮短，亦有一定應(yīng)用價值。,直接測定法,清除法（反應(yīng)促進劑-過氧化物酶清除劑清除劑和過氧化物酶清除法） PEG修飾酶法 選擇性抑制法 免疫分離法（PEG/抗體包裹法和抗體免疫分離法）,PEG/抗體包裹法,akuyama等用PEG和抗apoB、抗apoC抗體包裹非HDL的脂蛋白，然后用酶法直接測定HDL-C的自動化分析方法。,日本International Reagents公司已研制成功可供商品化自動檢測的試劑盒。測定過程包括4種試劑：低濃度的PEG4000，包裹CM、VLDL、LDL。特異性抗apoB、apoC抗體，使CM、VLDL和LDL復(fù)合物凝聚。酶試劑，用于檢測上述復(fù)合物以外脂蛋白膽固醇(即HDL-C)。鹽酸胍試劑，終止酶促反應(yīng)和溶解含apoB脂蛋白復(fù)合物，以免其干擾吸光度測定,選擇性抑制法（PPD法）,應(yīng)用兩種不同的表面活性劑及多陰離子，根據(jù)脂蛋白的酶反應(yīng)選擇性，直接測定HDL-C。,第一反應(yīng)中，加入多陰離子和分散型表面活性劑(亦稱反應(yīng)抑制劑)，LDL、VLDL和CM先在多陰離子下聚集，由于反應(yīng)抑制劑與LDL、VLDL和CM的疏水性基因具有高度親和力，故其吸附在聚集的脂蛋白顆粒表面形成遮蔽圈。同時在HDL表面也吸附有少量反應(yīng)抑制劑，但由于親和力較弱，其結(jié)合是可逆的,第二反應(yīng)中，與膽固醇酶試劑一起加入具有對HDL顆粒中親水性基團具有親和力的可溶性表面活性劑(亦稱反應(yīng)促進劑)，由于反應(yīng)促進劑對HDL可溶性的強特異性作用可置換其表面吸附的少量反應(yīng)抑制劑，從而與酶試劑反應(yīng)，達到無需沉淀分離直接測定HDL-C的目的。,超速離心-高效液相色譜測定血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白膽固醇：一種候選參考方法,檢測方法學(xué)比較,超速離心-高效液相色譜 a)用超速離心法分離脂蛋白，所分離的脂蛋白與應(yīng)用最廣泛的脂蛋白定義一致， b)HDL不受Lp(a)污染 c)分離過程影響因素少d)所需樣品量小（0.1 ml），且一次可分析50個樣品e)用稀釋器代替手工容量操作, 操作簡便，精密度良好,可以測定脂蛋白類,LDL-C的檢測方法,免疫分離法 比濁法 選擇性測定法,免疫分離法,該法是通過使用包被有高親和力的羊抗人 apoAI和 apoE多克隆抗體的聚苯乙烯膠乳，用一種特制的具有離心過濾裝置的雙層試管，當一定量的血清和已包被有抗體的聚苯乙烯膠乳懸液被加入到雙層離心試管中，使 apoAI和 apoE抗體與血清中的 cM、 vLDL、 lDL和 hDL發(fā)生作用，然后1500g離心5min,免疫沉淀的 cM、 vLDL、 iDL和 hDL被過濾裝置截留在內(nèi)層小試管內(nèi)，含有 lDL的濾液被外層試管回收，通過酶法測定濾液中膽固醇的濃度，即可得出 lDL-C的含量,比濁法,其測定原理是血清中 lDL抗原與試劑中羊抗人 lDL抗體作用，形成抗原抗體復(fù)合物，并產(chǎn)生濁度，該濁度的高低在過量抗體存在時，與抗原（ lDL）的含量成正比，同時，由于反應(yīng)液中含有穩(wěn)定劑可使非 ag-Ab復(fù)合物（如脂類、大分子蛋白多聚物等）消濁，而消除非特異性干擾，用已知 lDL-C值的參考血清的濁度計算出待測標本中 lDL-C的濃度。,選擇性測定法,日本第一化學(xué)藥品株試會社(Daiichi)推出 lDL-C直接測定試劑盒，該試劑盒為液體雙試劑盒，適用于各類自動生化分析儀，在無需標本預(yù)處理的情況下，實現(xiàn) lDL-C自動化分析。該法原理14是試劑1中的表面活性劑可使樣品中的 hDL、 vLDL和 cM顆粒解離，膽固醇分子被釋放出來，立即同膽固醇酶試劑反應(yīng)，產(chǎn)生的 h2O2在缺乏偶聯(lián)劑時被消耗而不顯色，此時 lDL顆粒仍是完整的，加入試劑2（含