C反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng).ppt

C-反應(yīng)蛋白及臨床應(yīng)用,楊紅玲,Protein Structure CRP結(jié)構(gòu),C反應(yīng)蛋白的生理和生化,在細(xì)胞因子IL-6家族誘導(dǎo)下，CRP在肝中合 成迅速。 正常合成率為 l10 mgd，急性炎癥時(shí)每 天合成超過(guò) lg/d。 在急性相反應(yīng)高峰時(shí)肝大量合成蛋白，其中 20是合成CRP。 當(dāng)IL-6刺激物缺乏時(shí)，在 24 h內(nèi)合成率降 至正常。 循環(huán)中CRP半衰期約19h，但一旦它與配體結(jié) 合，可快速的被清除。 肝外合成對(duì)血清水平影響作用很小。,CRP的生物學(xué)功能,CRP的生物學(xué)功能-機(jī)理,結(jié)合壞死的內(nèi)源性物質(zhì) 在鈣離子存在的情況下，CRP能結(jié)合壞死的內(nèi)源性物質(zhì)和效應(yīng)細(xì)胞, 當(dāng)正常的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)被破壞致使內(nèi)部磷脂暴露時(shí)，CRP可發(fā)生與宿主細(xì)胞的結(jié)合。 在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的鼠模型中，注射CRP可改善SLE的狀況。 人CRP基因的多態(tài)性導(dǎo)致的低基礎(chǔ)水平表達(dá)增加了發(fā)生系統(tǒng)性狼瘡的風(fēng)險(xiǎn)。 CRP量的減少可能與SLE發(fā)病機(jī)理有關(guān)。 CRP量的減少使結(jié)合的細(xì)胞碎片減少。,CRP的生物學(xué)功能-機(jī)理,結(jié)合外源性物質(zhì) 細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)中的細(xì)胞壁磷酸膽堿。 CRP具有保護(hù)機(jī)體抗細(xì)菌感染的能力。 CRP 保護(hù)機(jī)體抵抗致命性的細(xì)菌脂多糖和各種炎癥介子的能力。,CRP的生物學(xué)功能-機(jī)理,結(jié)合配體的CRP激活下列生物系統(tǒng)，導(dǎo)致配體的消除： CRP對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的激活. CRP結(jié)合IgGFcR，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的活性。 CRP的調(diào)理性質(zhì)，調(diào)理即刺激細(xì)胞吞噬作用。 CRP和血小板激活因子(PAF)結(jié)合 抑制PAF刺激的血小板聚集。,CRP的生物學(xué)功能-機(jī)理,CRP具有多效性的作用。 當(dāng)抑制干擾素的合成時(shí) ，CRP可誘導(dǎo)IL-1受體拮抗劑而增加抗炎細(xì)胞因子IL-10的釋放 . CRP也可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。 CRP向上-調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達(dá)，刺激許多細(xì)胞釋放IL-8， 增加血漿纖維蛋白酶原催化劑抑制劑-1的表達(dá)和活性、增加IL-1, IL-6, IL-18, 和腫瘤壞死因子的釋放. CRP誘導(dǎo)或抑制炎癥反應(yīng)依賴(lài)于環(huán)境。,CRP功能,識(shí)別和啟動(dòng)靶效應(yīng)細(xì)胞及其產(chǎn)物并將其從組織中清除。 吞噬溶解入侵微生物。,急性相蛋白CRP合成的生物調(diào)控,CRP基因位于1號(hào)染色體短臂，只有一個(gè)內(nèi)含子，其分離編碼信號(hào)肽的區(qū)域。 肝臟CRP合成的調(diào)節(jié)主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄階段。由IL-6誘導(dǎo)，IL-1可增加此作用。 CRP啟動(dòng)子最近區(qū)為STAT3 和 Rel 蛋白的結(jié)合部位。 這些因子的相互作用增加DNA 結(jié)合C/EBP家屬成員的穩(wěn)定性，從而有效地誘導(dǎo)了CRP基因的表達(dá)。 神經(jīng)元細(xì)胞、動(dòng)脈硬化斑塊、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞也可以合成CRP。在這些部位的調(diào)節(jié)機(jī)制還不清楚。,修飾的CRP(m-CRP) -“Modified“ CRP,目前認(rèn)為m-CRP是原CRP的單體。 與天然CRP不同,表現(xiàn)在分子大小,溶解度,抗原性,帶電荷數(shù)等方面的差別. m-CRP具抗菌作用。 m-CRP具有強(qiáng)大地誘發(fā)炎癥的作用。,方 法 靈敏度 參考獻(xiàn) 試管內(nèi)沉淀試驗(yàn) - JExpMed1930;52561 毛細(xì)管內(nèi)沉淀試驗(yàn) 1020mg/L AmJMed1950;8445 改良平板雙擴(kuò)散法 1020mg/L IntArchAllergy1962 改良瓊脂柱擴(kuò)散法 3.0mg/L ProcSocExpBiol1955 改良單擴(kuò)散法 1.0mg/L ActaPatholMicrobiolScand 瓊脂糖凝膠電泳法 1.0mg/L ClinChimActa1969 放射電免疫擴(kuò)散法 10g/L JClinLabInvest1973 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 0.6mg/L ProcSocExpBiol1954 膠乳凝集試驗(yàn) 1.0mg/L Nature(London)1961 高敏乳膠增強(qiáng)濁度 0.35mg/ml Dade Germany2000 熒光抗體法 Nature(London)1961 放射免疫測(cè)定法 3g/L JLabClinMed1976,檢測(cè)方法,CRP檢測(cè)方法 - 免疫沉淀試驗(yàn),檢測(cè)CRP原始方法. 將兔抗CRP血清吸入毛細(xì)管內(nèi)。 把它浸入被測(cè)血漿或血清內(nèi),因毛細(xì)管虹吸作用被吸入,與抗CRP血清形成接觸界面。 這種方法較粗糙,取得結(jié)果時(shí)間較長(zhǎng),也不太正確可靠.,CRP檢測(cè)方法 - 免疫濁度法,可溶性CRP-Ag與可溶性抗CRP-Ab反應(yīng),形成可見(jiàn)的網(wǎng)絡(luò)狀沉淀性IC復(fù)合物點(diǎn). IC復(fù)合物對(duì)光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可見(jiàn)的濁度。 在被測(cè)樣品中加抗血清后一定時(shí)間,測(cè)定反應(yīng)系統(tǒng)散射光強(qiáng)度或濁度變化,可對(duì)被檢物及其濁度加以檢測(cè)。 根據(jù)儀器的光學(xué)系統(tǒng),濁度法分為散射濁度法和透射濁度法兩類(lèi)。 許多自動(dòng)化生化分析儀和自動(dòng)化免疫測(cè)定儀都可CRP測(cè)定項(xiàng)目。,CRP檢測(cè)方法 - 膠乳凝集試驗(yàn)(LAT),將強(qiáng)化的兔抗CRP抗體固定于膠乳微粒上。 加入被測(cè)樣品后與CRP在3分鐘內(nèi)形成肉眼可見(jiàn)的凝集物。 膠乳強(qiáng)化濁度法的靈敏度優(yōu)于傳統(tǒng)濁度法,試劑穩(wěn)定性佳。,檢測(cè)方法 - 標(biāo)記免疫測(cè)定,ELISA和免疫發(fā)光法和化學(xué)發(fā)光法等都可用于CRP的測(cè)定。 化學(xué)發(fā)光法的靈敏度和定量精確度可與RIA媲美,而無(wú)同位素污染,試劑穩(wěn)定,分析速度快。 CRP-POCT(床邊試驗(yàn))法 ELISA干片法。 把磷脂酰膽堿(PC)化學(xué)交聯(lián)固定于載體。 被測(cè)CRP與載體的PC結(jié)合。 被酶標(biāo)記的抗CRP單抗結(jié)合。 可靈敏、特異性檢測(cè)CRP,約5分鐘可得結(jié)果.。,檢測(cè)方法 - 膠乳增強(qiáng)試驗(yàn)（shCRP）：,常規(guī)CRP檢驗(yàn)方法可在感染或組織損傷時(shí)檢測(cè)出CRP10mg/L。 該檢測(cè)方法具有較高的靈敏度。 這個(gè)水平（0.110mg/L）的C反應(yīng)蛋白又被稱(chēng)為超敏C反應(yīng)蛋白（hsCRP）。,CRP檢測(cè)的評(píng)估,1、半定量：膠乳凝集試驗(yàn)等已棄用。 2、定量： 散射免疫比濁法、透射免疫比濁法：是目前常用方法。檢測(cè)限度為5150 mgL ，CV5% 。 膠乳增強(qiáng)試驗(yàn)-shCRP檢測(cè)：很大程度提高了敏感度。酶免疫分析和熒光免疫分析：有潛在的靈敏度優(yōu)勢(shì)。 膠乳增強(qiáng)試驗(yàn)-shCRP檢測(cè)方法很大程度提高了敏感度。 CRP檢測(cè)對(duì)標(biāo)本的采集也無(wú)特殊要求。 高濃度的類(lèi)風(fēng)濕因子可產(chǎn)生CRP假性升高。 CRP篩查的費(fèi)用遠(yuǎn)小于其他心血管檢查的費(fèi)用。,臨床應(yīng)用_參考范圍,臨床意義,器質(zhì)性疾病的篩選 急性或慢性炎癥如伴有細(xì)菌感染。 自身免疫或免疫復(fù)合物病。 組織壞死和惡性腫瘤。,臨床意義感染的診斷與鑒別,CRP在細(xì)菌感染發(fā)生后68h即開(kāi)始升高，2448h達(dá)到高峰，在感染消除后其含量急驟下降，一周內(nèi)可恢復(fù)正常。 CRP在病毒感染時(shí)無(wú)顯著升高。 革蘭陰性感染：可發(fā)生最高水平的CRP，有時(shí)高達(dá) 500 mgL。 革蘭陽(yáng)性菌感染和寄生蟲(chóng)感染：通常引起中等程度的反應(yīng)，典型的是在100 mgL 左右。 病毒感染：引起的反應(yīng)最輕，通常不超過(guò)50 mgL，極少超過(guò) 100 mgL。 在細(xì)菌感染的急性期，CRP顯著升高，寡聚腺苷合成酶正常； 在病毒感染時(shí)CRP水平正?；蜉p微升高，寡聚腺苷合酶水平升高。,臨床意義,C反應(yīng)蛋白是心血管疾病最強(qiáng)的危險(xiǎn)指標(biāo)，C反應(yīng)蛋白水平可預(yù)測(cè)將來(lái)心肌梗塞及中風(fēng)的危險(xiǎn)性。 C反應(yīng)蛋白含量2.1mg/L的人與1mg/L者比較: 將來(lái)發(fā)生心肌梗塞的危險(xiǎn)性為后者的2.9倍； 發(fā)生缺血性中風(fēng)的危險(xiǎn)性為后者的1.9倍； 發(fā)生外周動(dòng)脈血管性疾病的危險(xiǎn)性為后者的4.1倍。 在痛疼開(kāi)始后數(shù)小時(shí)內(nèi)，CRP升高，34d達(dá)高峰，在CK-MB回到正常后7-10d也降至正常。,臨床意義自身免疫或免疫復(fù)合物病。,系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多肌炎、系統(tǒng)性硬化癥CRP無(wú)明顯改變，所以可用于與風(fēng)濕性疾病鑒別。 若存在發(fā)熱為并發(fā)感染而非疾病的惡化。,臨床意義-癌癥,已升高或正在升高的CRP預(yù)示著不良的預(yù)后及常提示轉(zhuǎn)移。 結(jié)腸癌是導(dǎo)致死亡人數(shù)第二多的癌癥。 研究顯示，血液C-反應(yīng)蛋白含量最高的那些人患結(jié)直腸癌的危險(xiǎn)，是C-反應(yīng)蛋白含量最低者的兩倍.,臨床意義,評(píng)估疾病活動(dòng)性和療效監(jiān)控 CRP為 1050 mgL表示輕度炎癥。 CRP升至 100mgL表示較嚴(yán)重的疾病，它的嚴(yán)重程度在必要時(shí)需靜脈注射。 CRP 100 mgL表示嚴(yán)重的疾病過(guò)程并常表示細(xì)菌感染的存在。,臨床意義-抗生素的治療監(jiān)測(cè),系列血漿CRP的測(cè)定，可用來(lái)作為下列情況的治療監(jiān)測(cè)： 在許多感染時(shí)最有效使用抗生素治療。 根據(jù)CRP水平的變化來(lái)決定抗炎藥物的劑量。 在CRP下降至正常時(shí)，中 斷抗菌素治療。 在高危人群缺少微生物學(xué)診斷時(shí)，為抗生素治療的指引。,臨床意義-抗生素的治療監(jiān)測(cè),臨床意義-外科,患者施行手術(shù)后2472h,血中CRP水平明顯升 高,約在第57天恢復(fù)正常。 凡驟升后持續(xù)高水平多預(yù)示合并感染。 對(duì)中、大手術(shù)患者,在術(shù)前和術(shù)后37天各作 常規(guī)檢測(cè)一次。 凡術(shù)后57天CRP仍持續(xù)高水平者,理應(yīng)懷疑 合并感染,并配合治療作隨訪監(jiān)測(cè)。,臨床意義-內(nèi)科,肺炎: CRP100mg/L，強(qiáng)烈提示細(xì)菌感染，如化膿性支氣管炎或肺炎;典型的病毒性肺炎不會(huì)超過(guò)50mg/L。 心血管病，在痛疼開(kāi)始后數(shù)小時(shí)內(nèi)，CRP升高， 3-4d達(dá)高峰，在CK-MB回到正常后7-10d也降至正常。 代謝綜合征 代謝綜合征分組，根據(jù)CRP水平可將為 低危險(xiǎn)組，3 mg/,臨床意義-婦產(chǎn)科,盆腔炎和子宮附件炎. CRP值升高 盆腔腫塊和子宮肌瘤通常多為陰性。 診斷胎膜早破宮內(nèi)感染. 胎膜早破時(shí)，如母親CRP在產(chǎn)前6-19h超過(guò)50mg/L可作為出現(xiàn)AIS的標(biāo)準(zhǔn)； 產(chǎn)后第一天出現(xiàn)的AIS的CRP將比正常分娩時(shí)高出2-3倍。 無(wú)并發(fā)癥的CT和NG感染不會(huì)引起CRP升高。 但擴(kuò)散到盆腔可引起急時(shí)相反應(yīng)。,臨床意義-兒科,新生兒濃毒血癥: 出生3天前CRP10mg/L表示感染. 如果CRP在24h內(nèi)沒(méi)有超過(guò)10mg/L，多無(wú)新生兒感染. 小兒發(fā)熱 : 患病超過(guò)12h，CRP顯著40mg/L，ESR顯著30mm/h應(yīng)關(guān)注為細(xì)菌性感染。 腦膜炎 : CRP20mg/L提示為細(xì)菌感染的可能； 100mg/L時(shí)具有細(xì)菌感染診斷價(jià)值。 結(jié)腦CRP在20-60 mg/L。 成功的治療可使CRP在一周內(nèi)降至正常。,小 結(jié),CRP是一五球體結(jié)構(gòu)的高度保守的急時(shí)相蛋白。 CRP為一模式識(shí)別分子，與特殊的分子結(jié)構(gòu)結(jié)合而發(fā)揮作用。 為宿主先天性免