免疫學(xué)檢測(cè)原理及臨床應(yīng).ppt

免疫學(xué)檢測(cè)原理及臨床應(yīng)用,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,相關(guān)幫助,需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問(wèn)Fantibody全球抗體搜索引擎: fantibody全球抗體搜索引擎是一個(gè)供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫(kù)，其抗體信息數(shù)據(jù)來(lái)源于全球范圍的研究機(jī)構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫(kù)與抗體應(yīng)用評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評(píng)估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺(tái) 需要相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問(wèn)探生網(wǎng)進(jìn)行咨詢(xún)，期待您的加入,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,內(nèi)容提要：,概念 基于抗原-抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法 免疫細(xì)胞檢測(cè) 免疫分子檢測(cè) 免疫學(xué)診斷與檢測(cè),掌握：原理 臨床應(yīng)用,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,概念：,免疫學(xué) 細(xì)胞生物學(xué) 分子生物學(xué) 應(yīng)用：免疫相關(guān)疾病的診斷、病情檢測(cè)和療效評(píng)價(jià)等。,抗原 抗體 免疫細(xì)胞 細(xì)胞因子,檢測(cè),理論和方法,定性 定量,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,第1節(jié) 基于抗原-抗體反應(yīng) （antigen antibody reaction）的檢測(cè)方法,一、原理 二、反應(yīng)的特點(diǎn) 三、影響因素 四、基本檢測(cè)方法,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,一、原理,1、抗原抗體反應(yīng)的 特異性 2、抗原抗體反應(yīng)的 可見(jiàn)性 抗原抗體按適當(dāng)比例結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的現(xiàn)象。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,應(yīng) 用,1、利用已知抗原檢測(cè)未知抗體,（1）檢測(cè)病原微生物的相應(yīng)抗體以輔助診斷疾病： 傷寒病、流行性乙型腦炎、AIDS病等。 （2）檢測(cè)自身抗體診斷自身免疫?。篠LE、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等,2、利用已知抗體檢測(cè)未知抗原,（1）鑒定病原菌：診斷疾病 （2）檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原：檢測(cè)甲胎蛋白以診斷肝癌 （3）檢測(cè)血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定 （4）檢測(cè)藥物半抗原： 確認(rèn)運(yùn)動(dòng)員是否服用興奮劑,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn),特異性 帶現(xiàn)象與可見(jiàn)性 可逆性,取決于抗原表位與抗體高變區(qū)結(jié)合部位空間構(gòu)型的互補(bǔ)的程度,親和力（affimity） 親合力（avidity）,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,抗原抗體結(jié)合的帶現(xiàn)象與可見(jiàn)性,（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn),本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,可逆性：,（一）抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn),低pH值 高濃度鹽 凍融等,AgAb解離,取決于親和力大小,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素,電解質(zhì) 酸堿度 溫度 抗原抗體的性質(zhì),本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,1.電解質(zhì)： 親水性-疏水性 失去電荷-發(fā)生凝集,（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,2、酸堿度： 最適pH值：68 假陽(yáng)性 假陰性,（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,3.溫度： 適當(dāng)溫度-增加碰撞機(jī)會(huì) 加快結(jié)合速度 37,（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,4、抗原和抗體的性質(zhì) 關(guān)鍵因素-特異性和親和力 決定因素-二者的比例,（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（三） 抗原或抗體的檢測(cè)方法,凝集反應(yīng) 沉淀反應(yīng) 補(bǔ)體參與的反應(yīng) 免疫標(biāo)記技術(shù),（一）凝集反應(yīng)（agglutination）,顆粒性抗原（紅細(xì)胞、細(xì)菌、 乳膠顆粒等）與抗體特異性結(jié)合，形成肉眼可見(jiàn)的凝集塊。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,1、直接凝集(direct agglutination) 2、間接凝集 （indirect agglutination） 3、間接凝集抑制試驗(yàn) （in direct agglutination inhibition test） 4、協(xié)同凝集試驗(yàn) （co-agglutination test）,（一）凝集反應(yīng)（agglutination）,（二）沉淀反應(yīng)（precipitation）,可溶性抗原（免疫球蛋白、細(xì)胞裂解物、組織浸液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合， 形成不溶性免疫復(fù)合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。多在半固體瓊脂凝膠上進(jìn)行，形成白色的沉淀。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,1、單向免疫擴(kuò)散 （single immunodiffusion）,常用于測(cè)定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。,沉淀環(huán),抗體混于瓊脂凝膠中制板,環(huán)的直徑與抗原含量成正相關(guān),2、雙向免疫擴(kuò)散（doule immunodiffusion）：常用于抗原或抗體的定性檢測(cè)、組成和兩種抗原相關(guān)性分析。,3、免疫電泳（immunoelectrophoresis）,對(duì)流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis),4、免疫比濁法（immunonephelomtry）：快速簡(jiǎn)便。用于血清IgG、IgA、IgM、 補(bǔ)體C3、C4含量測(cè)定,（三）補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng),1、50 %補(bǔ)體溶血試驗(yàn)（CH50測(cè)定） 血清總補(bǔ)體量測(cè)定,2、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(complement fixation test)：檢測(cè)抗原或抗體。 原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測(cè)試驗(yàn)系統(tǒng)是否結(jié)合補(bǔ)體進(jìn)行診斷,試驗(yàn)原理？,檢測(cè)系統(tǒng)：待測(cè)樣品和已知抗原（或抗體）,指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素,溶血陰性；不溶血陽(yáng)性,用標(biāo)記物標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)借以提高免疫學(xué)診斷的敏感性,熒光素 ：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、 羅丹明（紅色熒光）,放射性同位素： 125I、131I,酶：辣根過(guò)氧化物酶、鹼性磷酸酶,免疫熒光檢測(cè)法（IFA）,放射免疫檢測(cè)法（RIA）,酶免疫檢測(cè)法（EIA）,（四）免疫標(biāo)記技術(shù),液相（ELISA）、固相（免疫組化技術(shù)）,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,1、免疫熒光法 （immunofluorescence,IF）,用熒光標(biāo)記抗體，再與待檢標(biāo)本中抗原反應(yīng)那個(gè)，所形成的抗原抗體復(fù)合物在熒光顯微鏡下散發(fā)熒光，借此對(duì)抗原進(jìn)行定性和定量。,間接ELISA,雙抗夾心法,2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （enzyme linked immunosorbent assay, ELISA法）,抗細(xì)胞因子的抗體包被,（1）,（2）,（3）,（4）,抗原包被,用于效應(yīng)細(xì)胞分泌的單一細(xì)胞因子的測(cè)定，也可測(cè)定分泌特異抗體的B細(xì)胞的頻數(shù)。,BAS-ELISA法（ biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系統(tǒng)-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗體以及DNA、RNA的檢測(cè)。,卵白及某些微生物中的蛋白質(zhì),本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,3、免疫組化 (immunohitochemistry),應(yīng)用標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞抗原反應(yīng)，借助形態(tài)學(xué)觀察，對(duì)組織或細(xì)胞表面抗原進(jìn)行定性、定量、定位檢測(cè)。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,4、放射免疫測(cè)定法 （radioimmunassay,RIA）,用發(fā)射性核素標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,5、化學(xué)發(fā)光免疫分析 （chemiluminescence immunoassay）,將發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，發(fā)光物質(zhì)在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)回復(fù)至穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)發(fā)射光子，通過(guò)自動(dòng)發(fā)光分析儀測(cè)定管子參量，可反應(yīng)樣品中抗體或抗原含量。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,6、免疫印記法 （immunoblotting）,又稱(chēng)western 印記法：結(jié)合凝膠電泳和固相免疫技術(shù)，將借助電泳所區(qū)分的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體，在應(yīng)用酶免疫、放射免疫等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,第2節(jié) 免疫細(xì)胞檢測(cè),機(jī)體免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo) 免疫細(xì)胞來(lái)源-外周血,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（一）免疫細(xì)胞及其亞類(lèi)計(jì)數(shù),1、淋巴細(xì)胞的分離：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法,白膜層,單核細(xì)胞,淋巴細(xì)胞,B,T,吸附分離,過(guò)尼龍毛柱分離,（1）尼龍棉柱分離法 B細(xì)胞滯留與柱上 T細(xì)胞流出 （2）E花環(huán)分離法 成熟人T細(xì)胞表面有CD2，綿羊紅細(xì)胞的受體,2、淋巴細(xì)胞亞群的分離,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（3）洗淘法（panning） （4）流式細(xì)胞儀（flowcytometry,FCM）,（5）磁珠分離法： 用抗CD4交聯(lián)的微珠可將T細(xì)胞 中的CD4+T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞分。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,3、淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù),免疫熒光計(jì)數(shù) 微量細(xì)胞毒試驗(yàn),（二）淋巴細(xì)胞功能測(cè)定,1、測(cè)定淋巴細(xì)胞功能的體外試驗(yàn),（1）T細(xì)胞增殖試驗(yàn)（淋轉(zhuǎn)）： 絲裂原、抗CD3單克隆抗體等能非特異地激活T細(xì)胞，使之發(fā)生轉(zhuǎn)化增殖，計(jì)算淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率（正常值6580%）,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,1、細(xì)胞增殖試驗(yàn)具體方法,形態(tài)學(xué)觀察法 3H-TdR滲入法：用液體閃爍儀測(cè)定樣品的射線放射活性 MTT法,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,檢測(cè)CTL、NK、 LAK、TIL細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的功能 51Cr釋放法 乳酸脫氫酶釋放法 細(xì)胞凋亡檢查法：TUNEL法（TdT dependent dUTP-biotin nick end labeling）、FACS測(cè)定法,（2）淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)（LMC）,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（3）分泌功能測(cè)定,檢測(cè)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞 檢測(cè)抗體形成細(xì)胞,2、測(cè)定淋巴細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗(yàn),結(jié)合菌素試驗(yàn)遲發(fā)型超敏反應(yīng),遲發(fā)型超敏反應(yīng)：舊結(jié)核菌素試驗(yàn)（ OT試驗(yàn) ） 皮試（+）有一定的細(xì)胞免疫能力 皮試（）細(xì)胞免疫功能缺損,第3節(jié) 免疫分子檢測(cè),（一）免疫球蛋白測(cè)定 1、體外用已知抗原檢測(cè)相應(yīng)抗體 2、用已知抗體定性、定量測(cè)定各類(lèi)免疫球蛋白,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（二）補(bǔ)體測(cè)定,免疫比濁法 ELISA RIA,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（三）細(xì)胞因子檢測(cè),1.免疫學(xué)測(cè)定法 鑒定分離的淋巴細(xì)胞亞群，監(jiān)測(cè)某些疾病狀態(tài)的細(xì)胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等檢測(cè) ELISA法 生物活性測(cè)定法 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（三）細(xì)胞因子檢測(cè),2.生物活性測(cè)定法 原理：不同細(xì)胞因子具有特定的生物學(xué)活性，借助相應(yīng)指示系統(tǒng)與之反應(yīng)，從結(jié)果得知細(xì)胞因子的活性,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,2.生物活性測(cè)定法,促進(jìn)細(xì)胞增殖和增殖抑制法 抗病毒活性測(cè)定法 直接殺傷法 趨化活性測(cè)定法,3.分子生物學(xué)測(cè)定法 PCR,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（四）CD分子、表面受體和粘附分子的測(cè)定,（五）HLA分型,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,第23章 免疫學(xué)防治,免疫學(xué)預(yù)防 免疫學(xué)治療,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)家!,（一）人工主動(dòng)免疫 （artificial active immunization） 用疫苗、類(lèi)毒素接種機(jī)體，使之產(chǎn)生特異性的免疫，從而預(yù)防感染的措施。,一、人工免疫,免疫預(yù)防,人工主動(dòng)免疫 常用制劑疫苗、類(lèi)毒素 死疫苗（滅活疫苗）是選用免疫原性強(qiáng)的病原體，經(jīng)理化方法使其失去活力制備而成的疫苗。傷寒菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌、鉤端螺旋體、流感病毒、狂犬病病毒、乙腦病毒疫苗均為滅活疫苗。 減毒活疫苗：是用減毒或無(wú)毒力的活病原體制成的疫苗。脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗是常用的減毒活疫苗。 類(lèi) 毒 素：細(xì)菌外毒素經(jīng)甲醛處理后，失去毒性而保留其免疫原性即為類(lèi)毒素。常用的類(lèi)毒素有破傷風(fēng)類(lèi)毒素、白喉類(lèi)毒素等。,本文由探生科技技術(shù)人員提供,Fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專(zhuān)