GB 15193.10-2014 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 體外哺乳類細(xì)胞DNA損傷修復(fù)（非程序性DNA合成）試驗(yàn).pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn) G. 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 體外哺乳類細(xì)胞 DNA 損傷修復(fù) 非程序性 DNA 合成 試驗(yàn) ( )2014-12-24發(fā)布 2015-05-01實(shí)施 中 華 人 民 共 和 國 發(fā) 布 國家衛(wèi)生和計劃生育委員會 G. 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替 非程序性 合成試驗(yàn) GB15193.102003 DNA 。 本標(biāo)準(zhǔn)與 相比 主要變化如下 GB15193.102003 , : 標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 體外哺乳類細(xì)胞 損傷修復(fù) 非程序性 合成 “ DNA ( DNA )試驗(yàn) ”; 修改了試驗(yàn)?zāi)康暮驮?; 修改了試驗(yàn)方法 ; 修改了數(shù)據(jù)處理 ; 修改了結(jié)果評價 。 G. 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 體外哺乳類細(xì)胞 DNA 損傷修復(fù) 非程序性 DNA 合成 試驗(yàn) ( )1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了體外哺乳類細(xì)胞 損傷修復(fù) 非程序性 合成 試驗(yàn)的基本試驗(yàn)方法和技術(shù) DNA ( DNA ) 要求 。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于評價受試物的誘變性和 或 致癌性 ( ) 。2 術(shù)語和定義 21 非程序性 DNA 合成 . 當(dāng) 受損傷時 損 傷 修 復(fù) 的 合 成 主 要 在 期 以 外 的 其 他 細(xì) 胞 周 期 稱 非 程 序 性 DNA , DNA S , DNA 合成 。3 試驗(yàn)?zāi)康暮驮?在正常情況下 合成僅在細(xì)胞有絲分裂周期的 期進(jìn)行 當(dāng)化學(xué)或物理因素誘發(fā) 損傷 ,DNA S 。 DNA 后 細(xì)胞啟動非程序性 合成程序以修復(fù)損傷的 區(qū)域 在非 期分離培養(yǎng)的原代哺乳動物細(xì) , DNA DNA 。 S 胞或連續(xù)細(xì)胞系 中 加 入3 胸 腺 嘧 啶 核 苷 3 通 過 放 射 自 顯 影 技 術(shù) 或 液 體 閃 爍 計 數(shù) , H- (H-TDR), DNA 法檢測染毒細(xì)胞中3 摻入 的量 可說明受損 的修復(fù)合成的程度 (LSC) H-TDR DNA , DNA 。 在體外培養(yǎng)細(xì)胞中 用缺乏半必需氨基酸精氨酸的培養(yǎng)基 進(jìn)行同步培養(yǎng) 合成的始動 , (ADM) ,DNA 受阻 使細(xì)胞同步于 期 并用藥物 常用羥基脲 抑制殘留的半保留 復(fù)制后 通過3 摻入 , G1 ; ( ) DNA , H-TDR 可顯示非程序性 合成 DNA (UDS)。4 試劑和材料 41 試劑 . 注 全部試劑除注明外 均為分析純 試驗(yàn)用水為雙蒸水或超純水 : , , 。411 細(xì)胞增殖用培養(yǎng)基 . 氏最低要求培養(yǎng)基 加入 小牛血清 青霉 Eagle (EaglesMinimalEssentialMedium,EMEM), 10% 、 素 鏈霉素貯存液 使青霉素的最終濃度為 單位 鏈霉素的最終濃度為 培養(yǎng)基 、 , 100 , 100g/mL。EMEM 可選用各種商品供應(yīng)之粉末培養(yǎng)基按生產(chǎn)廠商提供資料配制并除菌 冰箱貯存 。4 。412 細(xì)胞同