鼠傷寒沙門氏菌、哺乳動(dòng)物肝微粒體致突變性實(shí)驗(yàn)

鼠傷寒沙門氏菌微粒體酶試驗(yàn)Ames test,原 理,鼠傷寒沙門氏菌野生型（原養(yǎng)型）,人工方法正向誘變,鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型（異養(yǎng)型）,誘變物作用回復(fù)突變,Ames是檢測(cè)遺傳毒理學(xué)的體外試驗(yàn)，檢測(cè)終點(diǎn)是基因突變,通過統(tǒng)計(jì)回復(fù)突變的菌落數(shù)判斷受試物質(zhì)的致突變性高低,S-9混合液的制備過程（使需要代謝激活的物質(zhì)得以活化）,暴露肝臟，KCL灌注,斷頭處死大鼠、放血、去皮,取出肝臟，加入KCL剪碎,制成勻漿，9000g離心,取上清、分裝、凍存,1 實(shí)驗(yàn)用菌液制備 平板菌落計(jì)數(shù)法，是種統(tǒng)計(jì)物品含菌數(shù)的有效方法。方法如下：將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液涂布到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞；統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。2 菌株性狀鑒定 （1）組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型 （2）深粗糙突變測(cè)定 （3）R因子的鑒定 （4） 切除修復(fù)缺失鑒定 （5）自發(fā)回變量測(cè)定 （6）回變特性鑒定,實(shí)驗(yàn)步驟與方法,菌株特性鑒定,1、組氨酸需求特性,菌株特性鑒定,2、深粗糙（rfa）特性,菌株特性鑒定,3、紫外線敏感特性,菌株特性鑒定,4、抗氨卞青霉素（R因子）特性,菌株特性鑒定,5、自然回變特性,菌株特性鑒定,Ames試驗(yàn)菌株特性,6、回變特性鑒定,菌株特性鑒定,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則,Ames試驗(yàn)設(shè)計(jì),Ames試驗(yàn)方法及結(jié)果評(píng)價(jià),點(diǎn)樣紙片周圍長(zhǎng)出一圈密集的His+回變菌落者，受試物即為陽性致突變物質(zhì)。,背景菌生長(zhǎng)良好受試物每皿回變菌落數(shù)增加一倍以上并有劑量-反應(yīng)關(guān)系，試驗(yàn)結(jié)果具有重現(xiàn)性即可認(rèn)為該受試物為誘變陽性。,結(jié)果與報(bào)告,1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷與評(píng)價(jià)（1）點(diǎn)試法 凡在點(diǎn)樣紙片周圍長(zhǎng)出一圈密集的his回變菌落者，該物質(zhì)具有致突變性，即為陽性；如只出現(xiàn)少數(shù)散在菌落，則為陰性。（2） 摻入法 突變率=誘發(fā)回變his菌落數(shù)/自發(fā)回變his菌落數(shù) 確認(rèn)待測(cè)物具有致突變作用，必須具有以下幾點(diǎn)： 誘發(fā)突變His+菌落數(shù)為自發(fā)回變His+菌落數(shù)的2倍或2倍以上 回變菌落數(shù)隨劑量增加而增加