核酸檢測(cè)pcr考試試題及答案

核酸檢測(cè)pcr考試試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.復(fù)性C.延伸D.轉(zhuǎn)錄2.用于PCR反應(yīng)的酶是（）A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.限制性內(nèi)切酶D.連接酶3.PCR反應(yīng)體系中不需要的成分是（）A.引物B.dNTPC.模板DNAD.核糖體4.引物設(shè)計(jì)的原則不包括（）A.長度適宜B.避免互補(bǔ)C.GC含量高D.特異性強(qiáng)5.以下哪種情況會(huì)導(dǎo)致PCR假陽性結(jié)果（）A.模板量不足B.引物濃度過低C.污染D.退火溫度過高6.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.孟德爾B.桑格C.穆利斯D.沃森7.一般PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)是（）A.10-15次B.15-20次C.25-35次D.40-50次8.退火溫度一般比引物的Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃9.PCR產(chǎn)物分析最常用的方法是（）A.凝膠電泳B.高效液相色譜C.質(zhì)譜分析D.比色法10.以下哪種物質(zhì)可抑制PCR反應(yīng)（）A.甘油B.乙醇C.肝素D.葡萄糖二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的特點(diǎn)有（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.快速D.簡便E.可擴(kuò)增特定基因片段2.引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮的因素有（）A.長度B.堿基組成C.特異性D.引物二聚體E.Tm值3.PCR反應(yīng)體系的成分包括（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.DNA聚合酶E.緩沖液4.可能導(dǎo)致PCR擴(kuò)增失敗的原因有（）A.模板質(zhì)量差B.引物設(shè)計(jì)不合理C.反應(yīng)條件不合適D.酶活性喪失E.污染5.提高PCR特異性的方法有（）A.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)B.調(diào)整反應(yīng)條件C.采用熱啟動(dòng)PCRD.增加模板量E.減少dNTP濃度6.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有應(yīng)用（）A.疾病診斷B.基因克隆C.法醫(yī)鑒定D.物種鑒定E.藥物研發(fā)7.影響PCR反應(yīng)的因素包括（）A.溫度B.時(shí)間C.循環(huán)次數(shù)D.各成分濃度E.儀器性能8.常用的DNA聚合酶有（）A.TaqDNA聚合酶B.PfuDNA聚合酶C.Klenow片段D.T4DNA聚合酶E.VentDNA聚合酶9.以下關(guān)于PCR產(chǎn)物回收的說法正確的是（）A.可用于后續(xù)克隆B.常用凝膠回收方法C.回收效率可能受多種因素影響D.可去除雜質(zhì)E.回收的產(chǎn)物可直接用于測(cè)序10.熱啟動(dòng)PCR的優(yōu)點(diǎn)有（）A.減少非特異性擴(kuò)增B.提高擴(kuò)增效率C.增加產(chǎn)物特異性D.降低引物二聚體形成E.縮短反應(yīng)時(shí)間三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR可以擴(kuò)增任何長度的DNA片段。（）2.引物的長度越長，PCR反應(yīng)的特異性越好。（）3.dNTP的濃度過高會(huì)導(dǎo)致PCR反應(yīng)出錯(cuò)率增加。（）4.退火溫度越高，PCR反應(yīng)的特異性越低。（）5.模板DNA的純度對(duì)PCR反應(yīng)結(jié)果沒有影響。（）6.PCR反應(yīng)中DNA聚合酶只能從5'端向3'端延伸DNA鏈。（）7.只要引物設(shè)計(jì)正確，PCR反應(yīng)就一定能成功。（）8.循環(huán)次數(shù)越多，PCR產(chǎn)物的量一定越多。（）9.不同的DNA聚合酶具有相同的保真性。（）10.PCR產(chǎn)物可以直接用于基因表達(dá)分析。（）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR是體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程。在高溫下模板DNA變性解鏈，低溫時(shí)引物與模板退火結(jié)合，適溫下DNA聚合酶以dNTP為原料，從引物3'端延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)多輪循環(huán)擴(kuò)增目的片段。2.引物設(shè)計(jì)的基本要求有哪些？答案：長度一般18-25bp；GC含量40%-60%；避免自身互補(bǔ)及引物二聚體形成；具有特異性，與模板結(jié)合的Tm值在55-65℃。3.簡述影響PCR反應(yīng)的主要因素。答案：包括模板DNA的質(zhì)量與濃度、引物的設(shè)計(jì)與濃度、dNTP濃度、DNA聚合酶活性與用量、反應(yīng)溫度（變性、退火、延伸溫度）、循環(huán)次數(shù)以及緩沖液成分等。4.簡述PCR技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用原理。答案：針對(duì)病原體特定基因設(shè)計(jì)引物，提取患者樣本中的核酸作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。若樣本中有相應(yīng)病原體，可擴(kuò)增出特定片段，通過電泳等方法檢測(cè)，以此輔助診斷疾病。五、討論題（每題5分，共4題）1.在核酸檢測(cè)PCR實(shí)驗(yàn)中，如何避免污染問題？答案：實(shí)驗(yàn)前對(duì)實(shí)驗(yàn)室及儀器徹底清潔消毒；操作在超凈臺(tái)等無菌環(huán)境進(jìn)行；試劑分裝使用，避免交叉污染；移液器等工具定期校準(zhǔn)、清潔；不同操作區(qū)嚴(yán)格分開，人員更換工作服和鞋套等。2.當(dāng)PCR擴(kuò)增結(jié)果出現(xiàn)非特異性條帶時(shí)，應(yīng)如何解決？答案：優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，提高特異性；調(diào)整退火溫度，適當(dāng)提高可減少非特異性結(jié)合；降低引物和模板濃度；采用熱啟動(dòng)PCR技術(shù)；檢查反應(yīng)體系各成分是否污染或變質(zhì)。3.討論P(yáng)CR技術(shù)在基因工程中的重要作用。答案：用于擴(kuò)增目的基因片段，為后續(xù)基因克隆提供足夠量的模板；構(gòu)建重組DNA分子，通過引物引入特定酶切位點(diǎn)；篩選陽性克隆，檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞；分析基因結(jié)構(gòu)與功能突變等研究。4.隨著技術(shù)發(fā)展，PCR技術(shù)可能在哪些方面有新的突破？答案：在靈敏度和特異性上進(jìn)一步提升，實(shí)現(xiàn)痕量核酸檢測(cè)；開發(fā)更簡便、快速的操作流程與設(shè)備，利于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)；與其他技術(shù)如芯片技術(shù)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)；拓展在新領(lǐng)域如單細(xì)胞分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等的應(yīng)用。答案一、單項(xiàng)選擇題1.D2.A3.D4.C5.C6.C7.C8.B9.A10.C二、多項(xiàng)選擇題1.ABCDE2.ABCDE