目的基因的化學(xué)合成法寡核苷酸片段組裝目的基因用激酶與連接酶_第1頁
目的基因的化學(xué)合成法寡核苷酸片段組裝目的基因用激酶與連接酶_第2頁
目的基因的化學(xué)合成法寡核苷酸片段組裝目的基因用激酶與連接酶_第3頁
目的基因的化學(xué)合成法寡核苷酸片段組裝目的基因用激酶與連接酶_第4頁
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文檔簡介

目的基因的化學(xué)合成法第三節(jié)

目的基因與載體寡核苷酸片段組裝目的基因用激酶與連接酶組裝基因：互補連接法用聚合酶與限制酶組裝基因：互補延伸連接法第二節(jié)

基因工程制藥中的工具酶生物技術(shù)中能用于DNA和RNA分子的切割、連接、聚合、反轉(zhuǎn)錄等有關(guān)操作的各種酶系統(tǒng)?；蚬こ痰拿笇W(xué)基礎(chǔ)

限制性內(nèi)切核酸酶在DNA分子內(nèi)部的特異性的堿基序列內(nèi)部進行切割

DNA連接酶將兩條以上的線性DNA分子或片段催化形成磷酸二酯鍵連接成一個整體 DNA聚合酶I通過向3’端逐一增加核苷酸以填補雙鏈DNA分子上的單鏈裂口，

即5’→3’DNA聚合酶活性與3’→5’及5’→3’外切酶活性 多核苷酸激酶催化將把一個磷酸分子加到多核苷酸鏈的5’-OH末端上

反轉(zhuǎn)錄酶以RNA或DNA鏈為模板合成互補的cDNA鏈

DNA末端轉(zhuǎn)移酶將同聚物尾巴加到了線性雙鏈或單鏈DNA分子的3’-OH末端或

DNA的3’末端標(biāo)dNTP

目的基因的化學(xué)合成法第三節(jié)

目的基因與載體寡核苷酸片段組裝目的基因用激酶與連接酶組裝基因：互補連接法1、互補配對片斷之間有互補區(qū)，混合退火形成有斷點的完整雙鏈2、5’端磷酸化使用T4多核苷酸激酶使各個片段的5’端帶上磷酸。（合成的DNA單鏈5’端是-OH）3、連接酶連成完整雙鏈?zhǔn)褂肨4DNA連接酶進行連接目的基因的化學(xué)合成法第三節(jié)

目的基因與載體寡核苷酸片段組裝目的基因用激酶與連接酶組裝基因：互補連接法目的基因的化學(xué)合成法第三節(jié)

目的基因與載體寡核苷酸片段組裝目的基因用聚合酶與限制酶組裝基因：互補延伸連接法片斷之間有局部互補區(qū)，可相互作為另一個片斷延長的引物，用DNA聚合酶

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