沙門氏菌-方法驗證報告

第第頁《食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗》方法驗證報告1、方法依據(jù)GB4789.4-2024食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗。方法現(xiàn)行有效，已受控。2、方法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中沙門氏菌的檢驗方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中沙門氏菌的檢驗。3、儀器設(shè)備驗收情況儀器名稱方法對設(shè)備的要求儀器編號規(guī)格型號配備設(shè)備的參數(shù)檢定/校準(zhǔn)有效期恒溫恒濕培養(yǎng)箱36℃±1℃B-007RYHS-150F0.1℃2026.4.9恒溫恒濕培養(yǎng)箱42℃±1℃B-008RYHS-150F0.1℃2026.4.9電子天平0.1gB-018YP-30020.01g2026.4.9驗收結(jié)論符合要求4、環(huán)境條件驗證情況4.1方法對測試環(huán)境的要求在環(huán)境溫度為18-26℃，環(huán)境濕度為30%-70%，試驗區(qū)域為百級潔凈度進行4．2目前對環(huán)境的設(shè)施和監(jiān)控情況環(huán)境控制設(shè)備配置：空調(diào)；環(huán)境監(jiān)控設(shè)備配置：溫濕度表已檢定合格，在有效期內(nèi)4.3環(huán)境驗證情況定期進行沉降菌監(jiān)測，驗證潔凈度，合格5、人員能力驗收情況5．1該項目人員配備情況具有上崗資質(zhì)證書檢測人員，相關(guān)培訓(xùn)計劃、考核記錄、儀器授權(quán)等見人員檔案。5．2人員培訓(xùn)及考核情況驗收項目沙門氏菌驗收結(jié)果方法培訓(xùn)完成合格考核記錄完成合格儀器授權(quán)具備合格6、培養(yǎng)基驗收情況6．1方法所需關(guān)鍵培養(yǎng)基及試劑的配備情況培養(yǎng)基及試劑產(chǎn)品品牌生產(chǎn)批號緩沖蛋白胨水（BPW）北京陸橋240601四硫磺酸鈉黃綠（TTB）增菌液北京陸橋240719RVS增菌液北京陸橋240726亞硫酸鉍（BS）瓊脂北京陸橋240607HE瓊脂北京陸橋240727木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂北京陸橋240623沙門顯色培養(yǎng)基北京陸橋240425三糖鐵（TSI）瓊脂北京陸橋240728沙門氏菌生化鑒定盒北京陸橋240712鼠傷寒沙門氏菌ATCC編號：ATCC140286．2驗收情況實驗所涉及培養(yǎng)基及試劑性能穩(wěn)定，質(zhì)控菌株生物學(xué)性狀穩(wěn)定，已驗收合格。7、方法驗證情況7.1驗證方式：向樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)菌株7.1.1合格標(biāo)準(zhǔn)：供試品＋目標(biāo)菌組生長良好7.1.2樣品:咸鴨蛋7.2驗證內(nèi)容7.2.1菌液制備：取一粒鼠傷寒沙門氏菌（ATCC14028）瓷珠，放入10mL無菌生理鹽水中，置于漩渦混合儀上混合均勻。7.2.2培養(yǎng)基制備：按GB4789.4-2024要求配制。7.2.3樣品前處理：按GB4789.4-20247.2.4供試品＋目標(biāo)菌組7.2.4.1預(yù)增菌：以無菌操作稱取25g樣品放入盛有225mLBPW的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min-2min。向此均質(zhì)袋中加入1mL上述瓷珠菌懸液混勻。調(diào)節(jié)PH至6.8±0.2于36℃培養(yǎng)16h。增菌：移取1mL7.2.4.1中菌懸液轉(zhuǎn)種于10mLTTB內(nèi)，36℃培養(yǎng)18-24h。另取0.1mL轉(zhuǎn)種于10mLRVS內(nèi)，42℃培養(yǎng)18-24h。7.2.4.2分離：用直徑3mm的接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板和沙門氏菌顯色培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)24h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)。沙門氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見下表。選擇性瓊脂平板沙門氏菌菌落特征HE瓊脂藍綠色或藍色，菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色XLD瓊脂菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（品牌陸橋）呈現(xiàn)紫紅色HEHE瓊脂沙門氏菌XLD瓊脂沙門氏菌XLD瓊脂沙門氏菌沙門顯色沙門顯色TSI瓊脂沙門氏菌7.2.4.3生化試驗：將7.2.4.2中選擇性平板上分別挑取4個典型菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌，直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h。從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取同一純化平板上新鮮培養(yǎng)物至適量0.85%生理鹽水中研磨，與標(biāo)準(zhǔn)0.5個麥?zhǔn)蠞岫裙鼙容^，制成0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鶆蚓鷳乙?，使用生化鑒定試劑盒進行鑒定。TSI瓊脂沙門氏菌三糖鐵瓊脂試管斜面產(chǎn)堿（紫紅色）底層產(chǎn)酸（黃色），產(chǎn)氣，產(chǎn)硫化氫。沙門氏菌生化鑒定沙門氏菌生化鑒定生化鑒定試劑盒中賴氨酸脫羧酶呈陽性（紫色）、靛基質(zhì)呈陰性（黃色）、PH7.2尿素呈陰性（橙色）KCN呈陰性、甘露醇呈陽性（黃色）山梨醇呈陽性（黃色）、ONPG呈陰性（不變色）同時做樣品空白，樣品均無菌生長。沙門氏菌沙門氏菌XLD平板7.2.5以上試驗驗證結(jié)果如下：樣品信息檢測結(jié)果/25g咸鴨蛋＋沙門氏菌檢出咸鴨蛋未檢出7.3：供試品+目標(biāo)菌組生長良好8、試驗結(jié)論從儀器設(shè)備驗收情況、環(huán)境條件驗收情況、人員能力驗收情況、培養(yǎng)基驗收情況、方法驗收情況來看該方法在實驗室足夠成熟，具備了GB4789.4-2024食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗?zāi)?/p>